全 文 ：云南大学学报 (自然科学版), 2005 , 27 (1):82～ 85 CN 53-1045/N　ISSN 0258-7971
Journal of Yunnan University
三七叶甙对兔血小板聚集功能的影响
陈　鹏1 , 胡晓立2 , 雷伟亚1 , 沈志强1
(1.昆明医学院 云南省天然药物药理重点实验室 , 云南 昆明　650031;
2.云南大学 生命科学学院 ,云南 昆明　650022)
摘要:应用 Bo rn氏比浊法分别测定三七叶甙(Panax notoginseng fo lium saponins)对花生四烯酸(arachidonic
acid , AA)、血小板活化因子(platelet activating factor , PAF)和腺苷二磷酸(adenosine diphosphate, ADP)诱导的兔
血小板聚集功能的影响.实验结果表明:三七叶甙在体外显著抑制 ADP 诱导的血小板聚集 , 其半数抑制浓度
(medium inhibitory concentration , IC50)为 89.4 mg/ L;三七叶甙静脉注射也能明显降低ADP诱导的兔血小板聚
集率 , 且呈剂量-效应关系.提示三七叶甙体内外均明显抑制 ADP诱导的兔血小板聚集 ,而对 AA 和 PAF诱导
的兔血小板聚集无明显影响.
关键词:三七叶甙;花生四烯酸;腺苷二磷酸;血小板活化因子;血小板;聚集
中图分类号:R 963　　文献标识码:A　　文章编号:0258-7971(2005)01-0082-04
　　三七(Panax notoginseng)是云南名贵中药 ,现
从三七各部位分离得到 18种 Dammarane 皂甙 ,这
些皂甙可分为人参皂甙(ginsenoside)Rg , Rb , Ro 3
种类型[ 1] .三七叶中以 Rb型皂甙较多 , Rg 型皂甙
含量极少 ,经研究发现 ,三七叶甙具有镇静 、镇痛及
加速运动性疲劳的消除等作用.临床已用于治疗神
经衰弱及偏头痛[ 2] .
血小板活化聚集与血栓形成 、动脉粥样硬化及
其并发症的发生发展密切相关[ 3] ,本实验探讨三
七叶甙对血小板聚集功能的影响 ,以期为其临床应
用范围的扩大提供实验依据.
1　材　料
1.1　动物　健康家兔 ,体重 2.0 ～ 3.0 kg ,雌雄各
半;由昆明医学院实验动物中心提供 (合格证号:
滇实动证字 2002082号).
1.2　药物与试剂　三七叶甙由云南省药物研究所
提供 ,用前溶于生理盐水中 (pH 7.0).阿司匹林
(aspirin , Asp)结晶 , Sigma 公司产品 , 临用前溶于
100 mmol/L 的 Na2CO3 中 ,以 HCl调 pH 值至7.0.
1.3　仪器　四道血液凝聚仪(LBY-NJ2型 ,北京
普利生科贸集团).
2　方　法
2.1　富血小板血浆(platelet-rich plasma , PRP)
和贫血小板血浆(platelet-poor plasma , PPP)的制
备[ 4 , 5] 　自家兔颈动脉取血 ,以 3.8%柠檬酸钠抗
凝(V(血)∶V(抗凝剂)=9∶1),收集于塑料离心管
中 ,以 1 000 r/min离心 9min ,取上层液即为 PRP ,
剩余血液继以 2 500 r/min离心10 min取上层液得
PPP.实验过程中 , PRP 中的血小板数应控制在约
5×108 mL-1.
2.2　血小板聚集体外试验[ 4 ,5] 　按 Born 比浊法
进行血小板聚集性测定 ,用 PPP 300μL调零 ,于比
浊管中加入 PRP 300μL ,不同浓度三七叶甙及阿
司匹林药液各 10μL ,37℃温孵 5 min后 ,分别加
入 3种诱导剂(AA 终浓度 0.35 mmol/ L ,ADP 终
浓度 3μmol/L , PAF 终浓度 7.2 nmol/L),并记录
300 s内最大聚集率.血小板聚集抑制率按下式计
算:抑制率(%)=[(1-给药管聚集率/对照管聚集
率)] ×100.
2.3　血小板聚集体内试验[ 4 ,5] 　健康家兔 30只 ,
收稿日期:2004-07-20
　基金项目:云南省天然药物药理重点实验室开放课题(98KZ02).
　作者简介:陈　鹏(1974-　),男 ,讲师 ,硕士 ,主要从事天然药物方面的研究.
沈志强(1962-　),男 ,教授 ,博士.E-mail:szq21cn@hotmail.com.
随机分为 5组 ,每组 6只.A组:等体积生理盐水;B
组:10 mg/kg 阿司匹林作为阳性对照;C ～ E 组:
50 ,100和 200 mg/kg 三七叶甙组.给药前取血 1
次 ,然后按上述分组分别由兔耳缘静脉给药后 ,分
别于 0.5 ,1 ,2和 3 h取血.PRP 和PPP 制备及血小
板聚集性测定同体外试验.
3　结　果
3.1　三七叶甙在体外对血小板聚集的影响　AA ,
ADP 和 PAF 在生理盐水组诱导的兔血小板(PRP)
聚集率(%)分别为 72.3±9.2 ,69.4±6.0和 70.8
±4.6;三七叶甙对 ADP 诱导的兔血小板(PRP)聚
集呈浓度依赖性抑制作用 ,其 IC50为 89.4 mg/L ,
但对 AA 和 PAF 诱导的兔血小板(PRP)聚集无明
显抑制作用;阿司匹林体外只抑制 AA诱导的兔血
小板(PRP)聚集(表 1).
3.2　三七叶甙静脉注射对兔血小板聚集功能的影
响　给药前 , AA , ADP 和 PAF 诱导的兔血小板聚
集率(%)分别为 71.5±6.7 , 60.2±5.5 , 69.1±
8.3.50 ,100 ,200 mg/kg 的三七叶甙于 i.v.后 0.5
h即明显抑制 ADP 诱导的兔血小板聚集 ,1 h 时抑
制作用最为显著 ,药效至少可持续 3 h ,但对 AA 和
PAF 诱导的兔血小板聚集无明显抑制作用;阿司
匹林在体内同样明显抑制 AA 诱导的兔血小板聚
集 ,但对 ADP和 PAF 诱导的兔血小板聚集无抑制
作用(表 2 ～ 4).
表 1　三七叶甙体外对 AA , ADP和 PAF诱导的兔血小板聚集功能的影响
Tab.1 Effects of notoginseng folium saponins on rabbit platelet agg regation induced by AA , ADP and PAF
药物 ρ/(mg·L-1) 血小板聚集抑制率/ %
AA ADP PAF
20 1.2±1.3 12.5±3.9 0.9±1.0
40 2.6±1.9 26.4±2.8＊ 1.3±1.1
三七叶甙 80 3.1±1.7 40.4±6.3＊＊ 1.8±0.7
160 5.4±2.8 81.2±5.4＊＊ 1.9±0.9
320 8.3±2.5 91.2±3.6＊＊ 2.1±0.8
7.5 60.1.±7.9＊＊ 1.2±0.9 1.5±1.0
Asp 15 74.2±8.8＊＊ 1.6±1.1 1.8±1.2
30 94.8±5.9＊＊ 1.9±0.7 2.0±0.8
　　n=6 , x ±s , ＊:P<0.05;＊＊:P<0.01;与生理盐水组比较
表 2　三七叶甙 i.v.对 AA诱导的兔血小板聚集的影响
　　Tab.2 Effects o f interior notoginseng fo lium saponins on rabbit platelet aggregation induced by AA　　%
给药时间/min 三七叶甙(50 mg/ kg)
三七叶甙
(100 mg/kg)
三七叶甙
(200 mg/ kg)
Asp
(10 mg/ kg)
30 1.8±1.2 1.3±1.2 1.6±0.9 54.8±8.7＊＊
60 3.1±0.8 4.4±2.5 5.7±3.1 72.2±9.7＊＊
120 2.9±2.1 3.6±1.5 2.9±1.8 90.5±4.3＊＊
180 1.9±1.0 2.2±1.3 2.7±1.2 72.5±7.2＊＊
　　　n=6 , x ±s , ＊＊:P<0.01与给药前比较;给药前血小板聚集率:71.5±6.7
83第 1 期　　　　　　　　　　　陈　鹏等:三七叶甙对兔血小板聚集功能的影响
表 3　三七叶甙 i.v.对 ADP 诱导的兔血小板聚集的影响
　Tab.3 Effects of interior notoginseng folium saponins on rabbit platelet ag gregation induced by ADP　　%
给药时间/min 三七叶甙(50 mg/ kg)
三七叶甙
(100 mg/kg)
三七叶甙
(200 mg/ kg)
Asp
(10 mg/ kg)
30 26.3±6.7＊ 37.7±11.0＊＊ 46.9±9.2＊＊ 7.7±2.2
60 45.9±8.4＊＊ 53.2±9.5＊＊ 63.4±7.8＊＊ 11.3±3.3
120 35.5±5.6＊＊ 47.1±8.0＊＊ 51.2±10.2＊＊ 13.5±4.9
180 32.9±4.0＊＊ 36.2±4.3＊＊ 48.0±7.5＊＊ 12.7±3.3
　　　n=6 , x ±s , ＊:P<0.05 , ＊＊:P<0.01与给药前比较;给药前血小板聚集率:60.2±5.5
表 4　三七叶甙 i.v.对 PAF诱导的兔血小板聚集的影响
　Tab.4 Effects of interior notoginseng folium saponins on rabbit platelet agg regation induced by PAF　　%
给药时间/min 三七叶甙(50 mg/ kg)
三七叶甙
(100 mg/kg)
三七叶甙
(200 mg/ kg)
Asp
(10 mg/ kg)
30 2.3±1.1 3.9±1.8 5.1±1.0 1.8±1.2
60 2.8±0.8 3.0±1.2 5.5±1.5 3.8±1.5
120 2.1±0.7 2.5±1.6 4.8±1.3 6.2±2.8
180 1.4±1.1 3.1±1.0 3.8±0.6 4.5±1.9
　　　n=6 , x ±s , P>0.05与给药前比较;给药前血小板聚集率:69.1±8.3
4　讨　论
血栓或血栓栓塞性血管阻塞 ,在冠心病 、脑卒
中 、肺栓塞等临床重症的发病机制中起到非常关键
的作用.血栓形成是血液在流动状态下 ,止血机制
过度激活的一种病理性结局 ,是血小板 、白细胞 、内
皮细胞等多细胞间相互作用的结果 ,而血小板的活
化和聚集是其中重要因素之一[ 6] .
在正常的循环血液中 ,血小板处于静息状态 ,
而在某些生理或病理状态下 ,血小板可以被激活
(activation).血小板激活是指血小板在刺激物(诱
导剂)作用下发生的各种改变 ,如变形 、粘附和聚集
等 ,这些改变可以先后出现 ,或以不同组合出现 ,或
单独出现 ,其中血小板的活化聚集是血小板的重要
改变形式[ 7] .血小板活化聚集后 ,可导致血栓形
成 ,血管痉挛 ,影响血液循环 ,产生缺血或梗组 ,从
而促进疾病的发生和发展.因此研究药物对血小板
活化聚集的影响 ,对于防治有关疾病和开发新药至
关重要.
目前认为血小板活化聚集主要通过 3条途径:
AA 途径 、ADP 途径和 PAF 途径[ 8] .不同的诱导剂
通过不同的方式诱导血小板聚集 , 本实验选用
AA ,ADP 和 PAF 作为血小板聚集的诱导剂 ,分别
代表血小板活化的 3条途径 ,观察三七叶甙对这 3
条途径的影响 ,探讨三七叶甙抗血小板聚集作用及
范围.血小板聚集反应中的最终效应受体是
GPⅡb/ Ⅲa分子 ,它与纤维蛋白原结合导致血小板
的聚集.ADP 诱导的血小板聚集是通过一个与 G
蛋白偶联的 P2嘌呤型受体 ,使 GPⅡb/ Ⅲa分子活
化 ,以便与纤维蛋白原结合.血小板ADP 受体转导
激活信号的过程尚不清楚 ,有证据表明其通过抑制
腺苷酸环化酶活性及增加胞浆钙离子浓度参与血
小板的聚集反应[ 9] .实验结果表明 ,三七叶甙体内
外均明显抑制 ADP 诱导的血小板聚集.其作用机
制推测 可能 和三 七叶 甙抑 制血 小 板表 面
GPⅡb/ Ⅲa分子与钙依赖性纤维蛋白原受体的结
合或抑制 ADP 与血小板膜受体的结合 ,产生抗血
小板聚集作用 ,有待在进一步的实验中证实.
综上所述 ,三七叶甙能明显抑制血小板的聚
集 ,因此其可望成为防治血栓性疾病的特色新药 ,
具有较高的研究和应用价值.
84 云南大学学报(自然科学版)　　　　　　　　　　　　　　　　第 27 卷
参考文献:
[ 1] 　黎光南.云南中药志(第 1 卷)[ M] .昆明:云南科技出
版社 , 1990.
[ 2] 　杨　权.三七叶皂甙治疗偏头痛临床疗效观察[ J] .中
西医结合杂志 , 1988 , 8(12):726—727.
[ 3] 　MASSBERG S , SCHULZ C , GAWAZ M.Role of platelets
in the pathophysiology of acute coronary syndrome [ J] .
Semin Vasc Med , 2003 ,(2):147—162.
[ 4] 　BORN GVR.Aggregation of blood platelet by adenosine
dipho sphate and its reversal[ J] .Nature , 1962 , 194(2):
927—929.
[ 5] 　SHEN Zhi-qiang , DONG Ze-jun , CHEN Peng.Effect of
plumbagin on platelet agg regation and pla telet-neu-
trophil interactions[ J] .Planta Madica , 2003 , 69(6):
605—609.
[ 6] 　李家增 , 贺石林 ,王鸿利.血栓病学[ M] .北京:科学出
版社 , 1998.
[ 7] 　汪　钟 , 郑植荃.现代血栓病学[ M] .北京:北京医科
大学中国协和医科大学联合出版社 , 1997.
[ 8] 　PACKHAN M A.Role of platelet in thrombosis and
hemostasis[ J] .Can J Physiol Pharmacol , 1994 , 72(6):
278—285.
[ 9] 　COLLER B S.New antiplatelet agents:Platelet GPⅡb/
Ⅲa antagonists[ J] .Thrombosis and Hemostasis , 1995 ,
74(1):271—302.
Effects of Panax notoginseng folium saponins on rabbit platelet agg regation
CHEN Peng
1 , HU Xiao-li2 , LEI Wei-ya1 , SHEN Zhi-qiang1
(1.Yunnan Pharmacolo gical Labo ratories of Natural Products , Kunming Medical College , Kunming 650031 , China;
2.Life Science School , Yunnan University , Kunming 650022 , China)
Abstract:The ef fects of notoginseng folium saponins on rabbit platelet agg regat ion induced by AA ,ADP
and PAF were investigated by Born s method.It w as show ed that notoginseng folium saponins signif icantly
inhibited platelet aggregation induced by ADP in vit ro , and the IC50 value(concentration resulting in 50% in-
hibition)was 89.4 mg/ L.In vivo notoginseng folium saponins(50 , 100 ,200 mg/kg)also markedly inhibited
rabbit platelet agg regation induced by ADP .It is suggested that notoginseng folium saponins concentration-de-
pendtly suppressed rabbit platelet aggregation induced by ADP , but no t by AA and PAF .
Key words:Panax notoginseng folium saponins;AA;ADP;PAF;platelets;aggregation
85第 1 期　　　　　　　　　　　陈　鹏等:三七叶甙对兔血小板聚集功能的影响