全 文 ：收稿日期: 2009 - 09 - 10
基金项目:浙江省科技计划资助项目 ( F200513028)
作者简介:马备娟 ( 1969 - ),女,浙江金华人,副主任药师,学士, 主
要从事药品检验和医院药学工作。
HSP70的表达有明显影响, 可使缺血半影区神经元 HSP70
表达明显增加,从而保护缺血半影区神经元。提示:针刺治
疗脑缺血的机制可能与 HSP70蛋白增加有关, 为临床针刺
治疗脑缺血疾病提供又一新的理论依据。
参考文献
[1 ] 王伟. 严格控制实验条件,建立标准化脑缺血动物模型 [ J ].
中华神经科杂志, 1998, 31 ( 5) : 261 - 263.
[ 2 ] Longa EZ, W ein stein PR, C arlsin S, et a.l Reversib le m iddle cer-
ebra l artery occlu sion W ith ou tcran iectom y in rats [ J ]. S troke,
1989, 20: 84 - 91.
[ 3 ] Kazuo K itagaw a, Masayasu M atsum oto, Keisuke Kuw abara, et a.l
Ischem ia Tolerance P henom enon Detected In Variou s Brain Re-
g ion s[ J ]. Brain Research, 1991, 561, 203 - 211.
[ 4 ] Liu Y, Kato H, Nakata N, et a.l Tem poral profi le of heat shock
protein 70 synth es is in ischem ic tolerance induced by p recondi-
tion ing ischem ia in rat h ippocampu s [ J ]. Neu roscience, 1993, 56
( 4) : 921 - 927.
第 28卷 第 2期
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中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 28 No. 2
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中华中医药
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学刊
RP -HPLC法测定乌骨藤药材中 Tenacissoside B的含量
马备娟1,李晓誉 2,叶益萍2
( 1.金华人民医院药剂科, 浙江 金华 321000; 2.浙江省医学科学院药物研究所,浙江 杭州 310013)
摘 要:目的: 建立乌骨藤药材中 Tenacisso side B的含量测定方法。方法: 采用高效液相色谱法测定乌骨藤
中 Tenac isso side B的含量, 色谱柱使用 D iamonsil C18 ( 250mm @ 4. 6mm, 5Lm ) ;流动相为甲醇B水 ( 78B22); 检测波
长为 217nm; 流速 1mL /m in; 柱温 30e 。结果: Tenac isso side B在进样量 1. 01~ 10. 1Lg范围内线性关系良好,回归
方程为: y= 432. 41x - 13. 14, R2 = 0. 9998;平均回收率为 98. 30% , RSD为 1. 78% ( n = 6)。结论:该方法简便,
灵敏,准确, 重现性好,可用于乌骨藤药材的含量测定和质量控制。
关键词:乌骨藤; T enac isso side B;高效液相色谱法
中图分类号: R284. 1 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2010) 02 -0362 - 02
Determ ination of Tenac issoside B in the S tems ofMarsdenia
Tenac issmi a by RP -HPLC
MA Be i-juan1, LI X iao-yu2, YE Y i-p ing2
( 1. The Peop le. sH ospi tal of Jinhu a, Jinhua 321000, Zhejiang, Ch ina;
2. In stitu te ofM ateriaM ed ica, Zhejiang A cadem y ofM ed ica lS cien ces, H angzhou 310013, Zhejiang, Ch ina)
Abstrac t: Ob jective: To establish am e thod fo r de te rm ina tion o f the con tent of Tenacissoside B in the roots o fM a rsde-
nia tenacissim a. M ethods: The ana lysisw as carried out by RP -HPLC on D iamonsilC18 ( 250mm @ 4. 6mm, 5Lm ), M etha-
no lBw ater ( 78B22) a sm obile phase; w ave leng th w as 217 nm; flow ra tew as 1. 0mL /m in; co lum n temperaturew as 30e .
R esults: The liner range of Tenacisso side B was 1. 01~ 10. 1Lg. Reg ression equation was: y= 432. 41x - 13. 14, R2 = 0.
9998. The average recovery w as 98. 30% w ith RSD= 1. 78% ( n = 6). Conclusion: The m ethod is simple and accura te
w ith a good reproducibility and can be used as a quantitative ana lysis for the stem s o fM arsdenia tenacissim a.
Keyw ords: M a rsden ia tenac issim a; Tenacisso side B; HPLC
乌骨藤, 又名通光藤、通光散, 系萝藦科植物乌骨藤
Marsden ia tenac issim a ( Roxb) W ight e tA rn的藤茎, 具有清
热解毒、化痰软坚之功效。以乌骨藤单味制成的制剂 /消
癌平片0和 /消癌平注射液0临床用于治疗食道癌、胃癌、肺
癌、肝癌等恶性肿瘤 ,取得较好的疗效, 但存在着质量控制
技术落后的问题, /消癌平片0质量标准仅有理化鉴别 [1 ],
/消癌平注射液0用分光光度法测定总酚酸的含量 [2]。乌
骨藤主要包括酚酸类、甾体皂苷类、多糖类、生物碱类等化
学成分。文献报道从通光藤中分离得到 C21甾体苷 ) ) ) Te-
nac isso side s A - I[3 - 4]。笔者对乌骨藤的抗肿瘤活性成分进
行了研究,分离获得抗肿瘤有效部位乌骨藤总苷 H,并从总
苷中分离得到 C
21
甾体苷 Tenacissosides A, B, C, D和 K,
且以 Tenacissoside B含量最高, 因此本文建立了高效液相
色谱仪测定乌骨藤中 C21甾体苷 Tenacissoside B含量方法,
以进一步控制该药材质量。
1 仪器与试药
岛津 LC - 20AT系列高效液相色谱仪 ( LC - 20AT泵,
SPD - 20A 紫外检测器 ), N2000色谱工作站。 Sarto rius
BP211D型分析天平。
Tenac issoside B对照品系浙江省医学科学院药物研究所
天然药物化学实验室分离制备, 经高效液相色谱峰面积归一
化法测定,纯度为 98. 6%。乌骨藤药材购自云南昆明。
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DOI：10.13193/j.archtcm.2010.02.140.mabj.049
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试剂:甲醇为色谱纯,水为双重蒸水, 其他试剂均为分
析纯。
2 方法和结果
2. 1 色谱条件 色谱柱 Diam onsil C18 ( 250mm @ 4. 6mm,
5Lm );甲醇B水 ( 78 B22)为流动相; 检测波长为 217nm;流速
1mL /m in;柱温 30e ;在此条件下能得到较好分离见图 1。
A. Tenacissoside B对照品 B.乌骨藤药材
1. Tenacissoside B
图 1 Ten acissoside B对照品和药材的高效液相色谱图
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取 Tenacissoside B对照
品适量,加甲醇制成每 1 mL含 200Lg的对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取乌骨藤药材粉末 (过 3号筛 )
约 2. 0g, 精密称定, 置于 100mL量瓶中, 加甲醇溶液至刻
度,超声 20 m in,冷却至室温, 补足减失的溶剂,摇匀, 滤过,
精密量取续滤液 50mL回收溶剂,用甲醇转移至 10mL量瓶
中,加甲醇至刻度, 摇匀,即得。
2. 4 线性关系考察 精密称取 Tenacissoside B对照品适
量,加甲醇配制成每 1m L含 1. 01mg的溶液。分别精密量
取 0. 5, 1. 0, 1. 5, 2. 0, 2. 5, 5. 0m L置 10mL量瓶中, 加甲醇
稀释至刻度, 摇匀, 各进样 20LL, 测定峰面积, 以峰面积 /
1000为纵坐标 ( Y ), T enacissoside B进样量为横坐标 ( X )作
线性回归, 回归方程为: y= 432. 41x - 13. 14, R 2 = 0. 9998,
在 1. 01~ 10. 1Lg范围内有良好的线性关系。
2. 5 溶液稳定性试验 取供试品溶液, 分别在 0, 1, 3, 5,
7, 10h进样, 测定 Tenac isso side B峰面积分别为: 1626614,
1602383, 1581414, 1567081, 1596737, 1588522, RSD 为
1127% ( n = 6), 表明样品溶液在 10h内稳定。
2. 6 重复性试验 取每 1 mL含 200Lg的对照品溶液
20LL, 连续进样 6针, 测得 Tenacissoside B峰面积分别为
1654091, 1687125, 1640941, 1668829, 1660856, 1636118,
RSD为 1. 13%。
2. 7 精密度试验 取同一批乌骨藤药材, 每份 2g, 按
图 2 Tenacissos ide B的标准曲线
/ 2130项下供试品处理方法制备, 于同一日内和不同日间
( 6天内, 每日测定 1次 )分别测定 6次, 计算日内和日间精
密度。测得日内 Tenac isso side B含量分别为 1. 90, 1. 93,
11 88, 1. 91, 1. 88, 1. 88mg /g, RSD为 1. 02% ( n = 6 );测得日
间 Tenacissoside B 含量分别为 1. 90, 11 85, 1. 88, 1. 87,
1. 92, 11 85, RSD为 1. 48% ( n = 6)。
2. 8 加样回收率试验 取乌骨藤药材 6份,分别加入 Te-
nacissoside B对照品, 按 / 2. 30项下制备,分别进样 20LL,计
算得回收率为 98. 30% , RSD为 1. 78% ,见表 1。
表 1 回收率试验结果
药材中
Tenacissoside B
的量 ( mg)A
实测值
( mg) B
加入的
Tenacissoside B
的量 ( mg) C
回收率
( B -A) /C
@ 100%
平均回收
率 (% )
RSD
(% )
1. 926 3. 770 1. 855 99. 42
1. 868 3. 654 1. 855 96. 26
1. 855 3. 636 1. 855 96. 04
1. 907 3. 742 1. 855 98. 94 98. 30 1. 78
1. 937 3. 769 1. 855 98. 82
1. 923 3. 784 1. 855 100. 33
2. 9 样品含量测定 按拟定方法进对照品溶液和供试品
溶液各 20LL, 测定样品中 Tenacisso side B含量, 见表 2。
表 2 药材含量测定 ( n = 6)
批号 Tenacissoside B含量 ( m g /g) RSD (% )
20031004 1. 90 1. 02
20040706 1. 67 1. 46
20060907 1. 75 1. 22
3 讨 论
笔者曾对超声提取时间进行比较研究 , 超声提取 10、
20、30m in乌骨藤药材中 Tenacissoside B 的含量分别为
11 54、1. 91、1. 90 mg /g,因此超声提取时间为 20 m in最佳。
参考文献
[ 1 ] 卫生部药典委员会. 药品标准中药成方制剂 # 12册 [S ].
1998: 277.
[ 2 ] 国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编 [S ]. 2002: 442 -
443.
[ 3 ] M iyakaw a S, Yamaura K, H ayash i K, et a.l F ive glycosid es
from the Ch inese d rug/ tong - guan - san0: the stem s ofM arsde-
nia tenacissim a [ J ]. Phy tochem istry, 1986, 25 ( 12 ) : 2861 -
2865.
[ 4 ] 陈纪军,张壮鑫,周俊. 通光藤甙 F, G, H,和 I结构 [ J ].云南
植物研究, 1999, 21: 369 - 377.
363