全 文 ：乌骨藤多糖的提取及含量测定
聂丽华 ,沈　婷 ,余　波 ,刘金旗
(安徽中医学院药学院 , 安徽省中药研究与开发重点实验室 , 安徽 合肥　230031)
摘要:目的 　从乌骨藤中提取多糖并测定多糖含量。方法　药材经醇提后 , 用水提醇沉法提取多糖 , 用苯酚-硫酸法测定乌骨
藤多糖的含量。结果　乌骨藤多糖含量为 74.4%, 平均回收率 98.3%, RSD=0.31%。结论　乌骨藤中多糖含量较高 ,具有开
发利用价值。
关键词:乌骨藤多糖;苯酚-硫酸法;含量测定
Extraction, isolationanddeterminationof
polysaccharidesfromMarsdeniatenacissima
NIELi-hua, SHENGTing, YUBo, LIUJing-qi
(DepartmentofPharmacy, AnhuiCollegeofTraditionalChineseMedicine＆Anhui
ProvincialKeyLaboratoryforResearchandDevelopmentofChineseMedicine, HefeiAhhui　230031, China)
Abstract:Aim　 ToextractanddeterminethecontentofpolysaccharideinMarsdeniatenacissima.Methods　PolysaccharideofMarsde-
niatenacissimawasextractedbythealcoholwithwaterextractionandalcoholprecipitationmethod, anditscontentwasdeterminedbythe
phenol-sulfuricacidanmethodwithultravioletspectrophotometerat490 nm.Results　Thepolysaccharidecontentwas74.4%, withan
averagerecoveryof98.3% andanRSDof0.31%.Conclusion　ThepolysaccharidescanbeextractedfromMarsdeniatenacissimaby
themethodsoftheexperiment.Theresultsofthecontentofpolysaccharideswereaccurate, andthemethodscanbeusedtodeterminepol-
ysaccharides.
Keywords:Marsdeniatenacissima;polysaccharide;phenol-sulfuricacidcolorimetry;determination
　　乌骨藤 Marsdeniatenacissima(Roxb.)WightetAm.是萝
蘑科牛奶菜属植物 , 始载于 《滇南本草 》, 主产于云南 [ 1] 。味
苦 , 性微寒 ,具有消炎 、清热解毒 、止咳平喘 、散结止痛之功效;
主治气管炎 , 支气管哮喘 , 癌瘤积毒等 [ 2] 。 乌骨藤的水提物
开发的消癌平制剂 , 如消癌平注射液 、消癌平糖浆 、消癌平片
剂 , 临床上用于治疗胃癌 、肺癌 、肝癌等各种晚期恶性肿瘤疗
效确切 , 毒副作用小。乌骨藤内含多糖 、甾体皂苷和生物碱等
有效成分 ,能干扰癌细胞核酸以及 DNA合成 , 抑制癌细胞发
展 , 具有广谱抗癌作用。但乌骨藤多糖的提取方法未见报道。
本实验通过提取乌骨藤多糖并测定其含量 , 以期为乌骨藤多
作者简介:聂丽华 ,女 ,硕士研究生
通讯作者:刘金旗 ,男 ,副教授 ,硕士生导师 ,研究方向:中药活性成分
的研究 , E-mail:Liujinqi228@ 163.com
糖的进一步开发利用提供依据。
1　材料和方法
1.1　药材　乌骨藤 , 购于安徽亳州药材市场 , 经安徽中医学
院药学院中药教研室某教授鉴定为乌骨藤 Marsdeniatenacis-
sima(Roxb.)WightetAm.
1.2　仪器与试剂　RD52-4旋转蒸发仪(上海沪西分析仪器
厂有限公司)、UV-8三用紫外分析仪(无锡科达仪器厂)、紫
外分光光度仪(UV757DRT)、真空干燥箱等均为国产仪器设
备。正丁醇 、氯仿 、碳酸钠 、苯酚 、浓硫酸 、葡萄糖 、铝片 、活性
炭等 , 所用试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　乌骨藤多糖的提取 　称取用 70%乙醇渗漉的乌骨藤干
燥粉末 200g, 分别加 1500ml蒸馏水煎煮 3次 ,每次 1.5 h, 滤
3　讨论
本实验采用 HPLC法测定茴三硫含量 ,方法简便 , 结果准
确 , 稳定性好 ,专属性强 , 可用于茴三硫的质量控制。
关于流动相的选择 , 曾试验了甲醇:磷酸盐缓冲液 、乙腈:
水 、乙腈:磷酸盐缓冲液 ,结果均不理想, 采用本流动相后 ,茴三
硫的分离良好 , 峰形较好 ,基线平稳, 没有拖尾现象 ,结果满意。
参考文献:
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(收稿日期:2009-07-22)
·167·安 徽 医 药　AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal　2010 Feb;14(2)
过 , 合并滤液 ,减压浓缩至 150 ml,趁热加入乙醇 , 使含醇量达
到 80%, 静置过夜。减压抽滤 , 滤渣加热水溶解依法进行醇
沉;重复三次 ,所得滤渣加 700 ml水加热使溶解;放置 ,加 3 ～
4 g的活性炭 , 再加热至沸 , 保温 30 min, 滤过 , 滤液用正丁醇
-三氯甲烷(1∶4)振摇提取 5次 , 每次 300 ml分取正丁醇 -
三氯甲烷层 , sevag法取出蛋白质 , 水溶液滤过 , 滤液浓缩至稠
膏状 , 70℃减压干燥 ,研细 , 得 3.3 g多糖 ,为浅灰色粉末。多
糖平均提取率约为 1.75%。
2.2　乌骨藤多糖含量的测定
2.2.1　对照品溶液的制备　精密称取 105 ℃干燥至恒重的葡
萄糖对照品 100 mg,加适量水溶解 , 转移至 100 ml容量瓶中 ,
加蒸馏水至刻度 ,摇匀 ,配成 1g· L-1葡萄糖标准溶液备用。
2.2.2　 5%苯酚溶液制备　 取苯酚 100 g, 加 0.1 g铝片和
0.05 gNaHCO3 ,蒸馏。收集 182℃馏分 10 g,加蒸馏水 200ml
溶解 , 置棕色瓶内放入冰箱中备用 [ 3] 。
2.2.3　供试品溶液的制备　精密称取 10.40 mg乌骨藤多
糖置于 10 ml容量瓶中加蒸馏水溶解 , 定容至刻度 , 制成
1.040 g· L-1的供试品溶液。
2.2.4　吸收波长的选择　精密移取 0.1ml标准品葡萄糖溶
液置 10 ml具塞试管中 , 加水至 1 ml, 再加 1 ml苯酚溶液 , 摇
匀 , 加入 5 ml浓硫酸 ,立即摇匀 , 水浴 80℃加热 30 min,冷却
至室温。在 400 ～ 550 nm进行扫描 , 测得对照品无水葡萄糖
的最大吸收波长为 490 nm。精密吸取 “ 2.2.3”项下乌骨藤多
糖供试品 0.1ml置 10ml具塞试管中 ,按同样操作 , 同法用蒸
馏水为空白对照。在 400 ～ 550 nm进行扫描 , 测得样品多糖
的最大吸收波长为 490 nm。表明乌骨藤多糖与葡萄糖在紫
外 490nm波长处呈现最大吸收峰。见图 1 ～图 3。
　　　　图 1　对照品紫外扫描图　　　　　　　　　　　图 2　供试品紫外扫描图　　　　　　　　　　　图 3　阴性光谱图
2.2.5　线性关系考察　分别精密吸取对照品溶液 0.2, 0.4,
0.6, 0.8, 1.0, 1.2ml于 50 ml容量瓶中各加入 6 ml苯酚溶液
和 30ml浓硫酸 ,水浴 80℃加热 30 min, 冷却至室温 , 用蒸馏
水定容至 50ml, 在 490 nm处测定吸光度 , 以蒸馏水为空白对
照。结果表明:葡萄糖浓度在 0.004 ～ 0.024 g· L-1范围内 ,
吸光度与浓度具有良好的线性关系。以吸光度(A)为纵坐
标 , 浓度(C, mg· L-1)为横坐标 ,绘制标准曲线 , 得回归方程:
A=0.0283C-0.0686, r=0.9996。
2.2.6　精密度试验 　精密吸取对照品溶液连续测定 6次 ,
结果吸收度的 RSD为 0.21%,表明本法精密度良好。
2.2.7　稳定性试验 　将供试品溶液 ,依法显色后 , 每隔 0.5
h测吸光度(A)一次 , 连续测定 6次。结果 A值的 RSD为
0.17%(n=6),表明显色后的样品溶液 2 h内稳定性良好。
2.2.8　重复性试验　 精密称取乌骨藤多糖 6份 , 制成供试
品溶液测定其含量 , 平均含量为 73.00%, RSD为 0.29%。
2.2.9　加样回收率试验　取已知含量的供试品 6份 , 分别
加入葡萄糖标准溶液 ,按照供试品制备方法制备 6份供试品
溶液 , 测定其吸光度 ,计算其回收率 ,得平均回收率为 98.3%,
RSD=0.31%。
表 1　加样回收率试验
多糖含有量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率
1 0.7364 0.5899 1.3157 98.2%
2 0.7364 0.5899 1.3169 98.4%
3 0.7405 0.7406 1.4656 97.9%
4 0.7406 0.7408 1.4683 98.2%
5 0.7389 0.8867 1.6123 98.5%
6 0.7389 0.8868 1.6152 98.8%
2.2.10　样品含量测定　取乌骨藤多糖样品三批 , 按 2.2.3
项下操作配制供试品溶液 , 测吸光度 ,计算多糖的百分含量分
别为 73.1%, 74.6%, 75.4%, 平均含量为 74.4%。
3　讨论
多糖的测定方法很多 , 本实验通过脱脂 , 再以 80%乙醇
提取以除去醇溶成分 , 再用水提醇沉法分离多糖成分 , 并以苯
酚 -硫酸法测其含量 , 吸收峰扫描清晰 、稳定 , 回收率好结果
可靠 , 实验结果表明乌骨藤中多糖含量丰富。但乌骨藤多糖
的理化性质及药理学活性还有待于进一步研究。
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(收稿日期:2009-08-13)
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