全 文 ：书收稿日期:2012-07-11; 修订日期:2012-09-26
基金项目:新世纪优秀人才基金( No． NECT － 08 － 0820) ;
国家自然科学基金( No． 21142004) ;
中央高校研究基金( No． SWJTU2010ZT09)
作者简介:潘明凤( 1988-) ，女( 汉族) ，黑龙江齐齐哈尔人，现为西南交通
大学生命科学与工程学院在读硕士研究生，主要从事药物分析研究工作．
* 通讯作者简介:周先礼( 1969-) ，男( 汉族) ，四川成都人，现任西南交通
大学生命科学与工程学院教授，博士学位，主要从事天然产物化学方面的
研究工作．
黄柏中黄柏碱和木兰花碱含量
的反相高效液相色谱法测定
潘明凤，冯 锐，罗 鸿，肖 峰，周先礼*
(西南交通大学，生命科学与工程学院，四川 成都 610031)
摘要:目的 反相高效液相色谱法测定黄柏药材中黄柏碱和木兰花碱的含量。方法 采用 Phenomenex ＲP － C18色谱柱
( 4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ，乙腈 － 0． 05 mol·L －1磷酸水溶液( 10∶ 90，每 100 ml加二乙胺 0． 2 ml) 为流动相，流速 1． 0 ml
·min －1，柱温 30 ℃，检测波长 225 nm。结果 黄柏碱，木兰花碱分别在 0． 338 4 ～ 2． 030 4 μg，0． 307 2 ～ 1． 843 2 μg范围
内线性关系良好;平均回收率( n = 6) 分别为 100． 85%，100． 35% 。结论 该方法为黄柏药材的质量控制提供实验依据，
该方法具有简便、快速、准确、重现性好的特点。
关键词:黄柏; 黄柏碱; 木兰花碱; 含量测定
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 01． 015
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 01-0035-02
Determination of phellodenrine and magnoflorine in Cortex Phellodendri by ＲP －HPLC
PAN Ming － feng，FENG Ｒui，LUO Hong，XiAO Feng，ZHOU Xian － li*
( School of Life Science and Engineering，Southwest Jiaotong University，Chengdu，Sichuan 610031，China)
Abstract: Objective To establish an ＲP － HPLC for determination of phellodendrine and magnoflorine in Cortex Phellodendri．
Methods SymmetryShieldTM ＲP － C18 Column( 4． 6 mm × 250 mm，5 μm ) was adopted; The mobile phase was acetonitrile －
0． 05 mol·L －1 phosphoric acid ( 10∶ 90，0． 2 ml diethylamine in every 100ml ) at the flow rate of 1 ml·min －1 ; The column
temperature was 30 ℃ and the detection wavelength was 225 nm． Ｒesults The linear ranges of phellodenrine and magnoflorine
were 0． 338 4 ～ 2． 030 4 μg and 0． 307 2 ～ 1． 843 2 μg; The average recoveries( n = 6) for the sample preparation of the markers
were 100． 85%，100． 35%，respectively． Conclusion The quantitative method for quality control of phellodendrine and magnoflo-
rine in Cortex Phellodendri by ＲP － HPLC provided the basis for quality countrol of Cortex Phellodendri，this method is simple，rap-
id and accurate with good reproducibility．
Key words: Cortex Phellodendri; Phellodenrine; Magnoflorine; Content determination
川黄柏为芸香科植物黄皮树 Phellodendron chinense Schneid．
的干燥树皮［1］，始载于《神农本草经》，列为上品，其后历代本草
均有记载［2 ～ 4］。《中国药典》1963 ～ 2010 年版均有收载。为常用
中药，味苦性寒，归肾、膀胱经。黄柏中主要有效成分为小檗碱、
黄柏碱、药根碱、木兰花碱等季铵型生物碱［5］。药效学研究证
明:黄柏具有明显的抗菌消炎及降压作用，其中，小檗碱是抗菌的
有效成分，黄柏碱和木兰花碱是降血压的有效成分［6 ～ 8］。有关黄
柏活性成分含量测定的报道，国内外均集中于以其所含生物碱中
小檗碱，黄柏碱的含量作为控制生药材的质量标准，可是对于化
学结构与小檗碱相似但降压作用靶点更多的木兰花碱，在黄柏药
材中的含量测定却罕见报道。基于此，本课题以黄柏碱，木兰花
碱作为质量控制的指标，采用反相高效液相色谱法同时测定黄柏
药材中二者的含量，同时对不同产地川黄柏药材中两者的含量进
行比较分析，以期为黄柏药材的质量评价提供新的理论依据。
1 仪器与试药
Waters 2695 高效液相色谱仪，Waters2998 二极管阵列检测
器及 Waters Empower 色谱工作站;Amershan 纯净水发生器;
SK8200LH 型超声仪;BS224S 电子分析天平。甲醇、乙腈为色谱
纯(Fisher Scientific公司出品) ;其余试剂均为分析纯，购自成都
市高新区石羊化学试剂厂。
黄柏碱和木兰花碱标准品:均由本课题组提供，纯度在 99%
以上;黄柏药材购自各地中药材市场，并经西南交通大学生命科
学与工程学院宋良科教授鉴定。
2 方法与结果
2． 1 溶液的制备
2． 1． 1 对照品溶液的制备 称取黄柏碱和木兰花碱对照品适量，
精密称定于 10 ml 量瓶中，稀释至刻度，摇匀，再精密量取上述溶
液 1 ml置 10 ml量瓶中，甲醇稀释至刻度，即得浓度分别为0． 112 8
mg·ml －1，0． 102 4 mg·ml －1黄柏碱、木兰花碱对照品溶液。
2． 1． 2 供试品溶液的制备 取黄柏药材粉末(过 4 号筛)约 1． 0
g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入 1 %甲酸 －甲醇溶液 50 ml，
精密称重，超声处理(功率 250 W，频率 59 kHz)40 min，放冷后称
重，加溶剂补足减失的重量，摇匀后静置，取上清液，通过 0． 45
μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液，备用。
2． 2 色谱条件 采用 Phenomenex ＲP － C18色谱柱(4． 6 mm × 250
mm，5 μm) ;流动相为乙腈 － 0． 05 mol·L －1磷酸水溶液(10 ∶
90，每 100 ml 含二乙胺 0． 2 ml ) ;流速 1． 0 ml·min －1;柱温 30
℃;检测波长 225 nm，进样量 10 μl。在上述色谱条件下对照品及
典型样品色谱图见图 1 ～ 3。
2． 3 线性关系考察 分别精密量取对照品溶液 3，6，9，12，15，18
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 1 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 1 期
书μl，按“2． 2”项的色谱条件进行测定，以峰面积(Y)对进样量(X)
进行线性回归，得回归方程分别为:黄柏碱 Y = 298 377X －
99 558，r = 0． 999 8，线性范围 0． 338 4 ～ 2． 030 4 μg;木兰花碱 Y =
462 741X + 4 9302，r = 0． 999 2，线性范围 0． 307 2 ～ 1． 843 2 μg。
2． 4 稳定性试验 取供试品溶液，室温放置，分别于 0，2，4，8，12，
24 h进样测定，结果表明黄柏碱和木兰花碱的峰面积无明显变化，
ＲSD值分别为 1． 73 %和 1． 97 %。表明供试品溶液稳定性好。
图 1 黄柏碱的色谱图
图 2 木兰花碱的色谱图
图 3 黄柏的色谱图(1．黄柏碱 2．木兰花碱)
2． 5 精密度试验 分别精密吸取黄柏碱和木兰花碱对照品溶液
10 μl，重复进样 6 次，测定峰面积，无明显变化。黄柏碱、木兰花
碱峰面积的 ＲSD分别为 1． 06 %和 1． 42 %，表明仪器精密度好。
2． 6 重复性试验 取同一批次黄柏药材，依“2． 1． 2”项下制备样
品溶液 6 份，分别精密吸取 15 μl 进样测定。结果样品中黄柏
碱、木兰花碱的含量平均值为 3． 63 mg /g，2． 59 mg /g;ＲSD分别为
2． 51 %和 1． 90 %。表明方法重复性好。
2． 7 加样回收率试验 取 6 份同一批次已知黄柏碱和木兰花碱
含量的黄柏药材 0． 2g，精密称定，分别准确加入黄柏碱和木兰花
碱对照品适量，余下同“2． 1． 2”项下操作，进样 10 μl，测定峰面
积。结果见表 1 ～ 2。
表 1 黄柏碱加样回收率试验结果
样品含量 /
μg
加入量 /
μg
检测量 /
μg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
0． 7581 0． 7634 1． 5177 99． 50
0． 7625 0． 7528 1． 5398 103． 25
0． 7824 0． 7734 1． 5584 100． 34 100． 85 1． 89
0． 7654 0． 7831 1． 5405 98． 98
0． 7704 0． 7674 1． 5625 103． 22
0． 7788 0． 7764 1． 5536 99． 79
表 2 木兰花碱加样回收率试验结果
样品含量 /
μg
加入量 /
μg
检测量 /
μg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
0． 561 3 0． 579 2 1． 139 9 99． 90
0． 564 6 0． 568 7 1． 135 0 100． 30
0． 579 3 0． 569 3 1． 147 6 99． 82 100． 35 1． 34
0． 566 7 0． 576 4 1． 155 2 102． 10
0． 570 4 0． 580 6 1． 141 5 98． 36
0． 576 6 0． 581 4 1． 167 3 101． 60
2． 8 含量测定 取各批黄柏药材各约 1． 0 g，精密称定，按
“2． 1． 2”项下处理方法制备，按“2． 2”项下色谱条件进样 15 μl，
进行测定，每份样品重复测定 3 次，计算含量。结果见表 3。
表 3 样品的含量测定结果 mg·g － 1
药材产地 黄柏碱 木兰花碱
都江堰 3． 61 2． 24
平武 3． 52 2． 19
邛崃 3． 46 2． 15
青川 3． 31 2． 03
雅安 3． 63 2． 59
3 讨论
3． 1 流动相的选择 在本研究中，分别考察了乙腈 －水，乙腈 －
0． 1 %二乙胺溶液，乙腈 － 0． 1 %磷酸溶液，乙腈 － 0． 1 %磷酸溶
液(每 100 ml中含 0． 2 g SDS) ，乙腈 －磷酸二乙胺缓冲液 5 种流
动相体系，结果发现，乙腈 －磷酸二乙胺缓冲液洗脱能力较好，但
缓冲液中磷酸和二乙胺的相对含量变化对黄柏碱和木兰花碱的
分离有很大影响，经实验摸索，最终确定流动相体系为乙腈 －
0． 05 mol·L －1磷酸水溶液(每 100 ml中含二乙胺 0． 2 ml)。以此
体系作为流动相，黄柏碱和木兰花碱与其他组分分离良好。
3． 2 检测波长的确定 由于该实验使用二极管阵列检测器，经扫
描光谱图发现黄柏碱在 225nm，284 nm 处有最大吸收，木兰花碱
在 225，268 nm处有最大吸收，且在 225nm处杂峰较少，综合考虑
故选 225 nm作为检测波长。
3． 3 样品含量分析 通过比较不同产地川黄柏药材中黄柏碱、木
兰花碱的含量，发现各产地黄柏碱、木兰花碱含量差异较小，且二
者的含量较稳定，故可以考虑把木兰花碱含量作为黄柏质量分析
的一个指标，这为黄柏的质量分析提供了新的理论依据。
参考文献:
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 1 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 1