全 文 ：返魂草干粉吸入剂的含量测定及体外肺沉积率考察
郑慧敏① ,王晓波② ,袭荣刚② ,高慧媛① ,杨晓波①② ,刘 丹② ,吴立军①
[摘 要 ] 目的 建立高效液相色谱法测定返魂草干粉吸入剂中返魂草素 Ⅱ含量的方法 , 并对其体外沉积性质进行初
步考察。方法 采用 EclipseXDB-C18柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm), 流动相为 CH3OH-5 mmol/LNaH2PO4配制的 6 mmol/L的
四丁基溴化铵(2 mol/L的 NaOH调 pH7.0)(30∶70), 检测波长 230nm, 流速 1.0 ml/min。采用双层液体碰撞器测定返魂草
干粉吸入剂的有效部位沉积量。结果 返魂草素Ⅱ在 5 ～ 150 μg/ml(r=0.9994)范围内与峰面积呈良好的线性关系 ,平均回
收率为 97.2%, RSD为 1.4%(n=5),体外肺沉积率大于 10%。结论 本含量测定方法准确可靠 、重复性好 , 该制剂的体外
肺沉积率符合要求。
[关键词 ] 返魂草干粉吸入剂;高效液相色谱法;含量;体外沉积
[中图分类号 ] R927.2 [文献标志码 ] A [文章编号 ] 1008-9926(2011)04-0325-03
[ DOI] 10.3969/j.issn.1008-9926.2011.04.013
ContentDeterminationandinVitroLungDeposition
PropertiesofSenecioCannabifoliusLess.DPIs
ZHENGHui-min① , WANGXiao-bo② , XIRong-gang② , GAOHui-yuan① , YANGXiao-bo①② , LIUDan② , WULi-jun①
①ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China;
②Hospital210 ofPLA, NationalInstituteforDrugClinicalTrial, Dalian 116021, China
[ Abstract] ObjectiveToestablishanhighperformanceliquidchromatographymethodfordeterminationof
FanhuncaoinⅡinSeneciocannabifoliusLess.DPIs, andinvestigateitsdepositionpropertyinvitro.MethodsAn
EclipseXDB-C18 column(4.6 mm×150 mm, 5 μm)wasusedwithamixtureofmethanol-bufersolution
(5 mmol/Lsodiumdihydrogenphosphateand6 mmol/Ltetrabutylammoniumbromide, adjustedtopH7.0 with
2 mol/Lsodiumhydroxide)(30∶70)asthemobilephase.Theflowratewas1.0 ml/minandthedetection
wavelengthwassetat230 nm.Theinvitrodepositionpropertiesofthepowderwereasessedwithatwinstage
impinge.ResultsThelinearrangeofFanhuncaoinⅡ was5-150 μg/ml(r=0.9994).Theaveragerecoverywas
97.2%, andRSDwas1.4%(n=5).Theinvitrodepositiontestshowedthatthelungdepositionratewasmore
than10%.ConclusionThismethodiscredible, reproducibleandsuitablefordeterminationofSenecio
cannabifoliusLess.DPIs.Theinvitrolungdepositionratemeetsthestandard.
[ Keywords] SeneciocannabifoliusLess.DPIs;highperformanceliquidchromatography;content;deposi-
tioninvitro
菊 科 千 里 光 属 植 物 返 魂 草 (Senecio
cannabifoliusLess.),味苦 、性凉 ,具有散瘀 、止血 、止
痛 、镇咳平喘的功效 ,在民间广泛用于病毒性感冒 、
基金项目:国家 “重大新药创制 ”科技重大专项 , No.2009ZXJ09002-
019
作者简介:郑慧敏 ,硕士。研究方向:天然药物化学。 E-mail:huim-
inz08@sina.com
作者单位:① 110016 辽宁沈阳 ,沈阳药科大学;② 116021 辽宁
大连 ,解放军 210医院国家药物临床试验机构
通讯作者:吴立军 , Tel:(024)23986481;E-mail:wulijun @hotmail.
com;王晓波 , Tel:(0411)39847086;E-mail:wxbbenson0653@sina.
com
肺部炎症 。本项目组以返魂草抗炎 、抗菌 、抗病毒的
主要有效单体成分 -返魂草素Ⅱ为模型药物 ,制备干
粉吸入剂 ,对抗窒息性毒剂所致的吸入性急性肺损
伤和肺水肿。本研究采用高效液相色谱 (high
performanceliquidchromatography, HPLC)法测定了
返魂草干粉吸入剂中的主要有效成分返魂草素Ⅱ的
含量 ,并对其体外肺部沉积率进行了考察。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent1200型高效液相色谱仪 ,包括
1200 series泵 、UV检测器 、柱温箱 、在线脱气系统
(美国 Agilent公司), FA1104分析天平(上海民乔精
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密科学仪器有限公司),肺沉积液收集装置(自制)。
1.2 试药 返魂草素 Ⅱ对照品(含量≥98%,自
制 ,批号:20090823),返魂草干粉吸入剂(返魂草
素 Ⅱ载药量为 10%,自制 , 批号:20100818),返魂
草干粉吸入剂明胶胶囊 (约含 25 mg干粉 /粒 ,自
制 ,批号:20101215),其他试剂均为分析纯或色谱
纯 。
2 方法与结果
2.1 含量测定
2.1.1 色谱条件 色谱柱:AglientC18柱(250 mm
×4.6 mm, 5 μm);流动相:CH3OH- 5 mmol/L
NaH2PO4 配 制的 6 mmol/L的四 丁基 溴化铵
(2 mol/L的 NaOH调 pH7.0)(30∶70[ 1] );检测波
长:230 nm;进样量:20 μl;流速:1.0 ml/min;柱温:
30℃。
2.1.2 溶液的制备 (1)对照品溶液 精密称取
返魂草素 Ⅱ对照品 100 mg,置 10 ml量瓶中 ,加入
1% HAc水溶液超声溶解 , 并稀释至刻度 ,制备成
10 mg/ml的贮备液 。(2)供试品溶液 取返魂草干
粉吸入剂明胶胶囊 1粒(约含 25 mg干粉),完全倾
出内容物 ,精密称定 ,置 50 ml量瓶中 ,加少量 1%
HAc水溶液超声溶解 ,用 100 mmol/L的四丁基溴化
铵盐溶液(pH7.0的磷酸缓冲液配制)稀释至刻度 ,
摇匀 , 0.45 μm微孔滤膜滤过 , 取续滤液 , 即得 。
(3)阴性对照溶液 取不含返魂草素Ⅱ的空白干粉
吸入剂按(2)的制备方法制备 ,即得。
2.1.3 专属性试验 取阴性对照溶液 、返魂草素Ⅱ
对照品溶液及供试品溶液 20 μl,按 2.1.1项下色谱
条件测定 , 理论塔板数以返魂草素 Ⅱ计算不低于
2000,峰形良好 ,供试品溶液中其他组分不干扰测
定 。结果见图 1。
2.1.4 线性关系考察 用 100 mmol/L的四丁基溴
化铵盐溶液(pH7.0的磷酸缓冲液配制)将对照品
贮备液(10 mg/ml)逐步稀释 ,得到 150、100、75、50、
25、10、5 μg/ml的对照品系列溶液 ,分别进样 ,进样
量 20 μl,重复 3次 ,记录色谱峰峰面积 ,得到色谱峰
面积(Y)与返魂草素Ⅱ浓度(X, μg/ml)之间的回归
方程为:
Y=36.39X+83.52, r=0.9994
返魂草素Ⅱ在 5 ～ 150 μg/ml范围内与峰面积
呈良好的线性关系。
2.1.5 精密度试验 取同一对照品溶液 75 μg/
ml,按上述色谱条件连续进样 6次 ,进样量 20 μl,记
录色谱峰峰面积。结果 RSD为 0.24%,表明仪器精
密度良好 。
A:阴性对照;B:对照品;C:供试品;1:返魂草素Ⅱ
图 1 空白对照品及供试品的 HPLC图
2.1.6 稳定性试验 取同一室温下放置的供试品
溶液(批号:20101215),分别在 0、2、4、6、8、10 h进
样 ,记录峰面积 ,结果 RSD为 0.69%,表明供试品溶
液在 10 h内稳定 。
2.1.7 重复性试验 分别精密称定同一批号(批
号:20101215)的返魂草干粉吸入剂明胶胶囊 5份 ,
按 2.1.2(2)项下制备供试品溶液 ,进行测定 ,记录
峰面积 ,测得含量的平均值为 89.7%,计算 RSD为
0.52%,表明本法具有良好的重复性 。
2.1.8 回收率试验 精密称定已知含量的返魂草
干粉吸入剂明胶胶囊 5份 (批号:20101215), 按
2.1.2(2)项下方法制备供试品溶液 ,分别精密加入
对照品溶液 ,按上述色谱条件测定 ,计算回收率 ,结
果见表 1。
表 1 返魂草素Ⅱ回收率试验结果
样品量
(μg/ml)
加入量
(μg/ml)
测得量
(μg/ml)
回收率
(%)
x
(%)
RSD
(%)
38.6 20 58.8 101.0
38.5 20 58.2 98.5
39.4 20 59.7 101.5 99.9 1.4
38.7 20 58.5 99.0
39.1 20 59.0 99.5
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2.1.9 样品含量测定 取返魂草干粉吸入剂明胶
胶囊 4批 ,按 2.1.2(2)项下方法制备供试品溶液 ,
按上述色谱条件测定 ,记录峰面积 ,外标法计算返魂
草干粉吸入剂粉末中返魂草素 Ⅱ的实测含量 ,与其
标示量比较 ,得其百分含量 ,结果见表 2。
表 2 返魂草干粉吸入剂样品测定结果(n=3)
批号 返魂草素Ⅱ含量(%)
1 2 3
x
(%)
RSD
(%)
20100804 89.7 90.4 90.2 90.1 0.40
20100809 90.0 90.4 90.6 90.3 0.34
20100812 89.5 90.3 90.7 90.2 0.67
20100818 90.3 90.6 89.6 90.2 0.57
2.2 体外肺沉积率考察 参照文献 [ 2]的方法 ,利
用双层液体碰撞器装置测定返魂草干粉吸入剂的有
效部位沉积量 ,一级和二级接收瓶中分别加入 7、
30 ml1% HAc溶液作为接收液 ,取装有返魂草干粉
吸入剂的 3#明胶胶囊 1粒 ,置于干粉吸入装置内 ,
用手挤压装置两侧按钮 ,将胶囊两端刺破 ,开启真空
泵 ,调节流量使其达到 60 L/min;吸入装置经适宜
橡皮胶塞接口与模拟喉部呈水平紧密相接 , 10 s后
取下吸入器 ,重新装入另一胶囊 ,如此反复抽吸 10
粒 。用 1%HAc溶液分别洗一级 、二级沉积部位及
给药装置与胶塞 ,收集清洗液。
将清洗液用 100 mmol/L的四丁基溴化铵盐溶
液(pH7.0的磷酸缓冲液配制)定容至 50 ml量瓶
中 ,过 0.45 μm微孔滤膜 ,取续滤液 ,按上述含量测
定方法进行测定 ,所得结果除以 10,并与每吸标示
含量相比 ,即为有效部位的沉积量。
取不同批号的返魂草干粉吸入剂的体外肺沉积
率进行考察 ,结果见表 3。 2010版 《中国药典 》规
定 ,有效部位沉积应大于 10%[ 2] ,从表 3可看出 ,返
魂草干粉吸入剂的体外肺沉积率均大于 10%,符合
要求。
表 3 返魂草干粉吸入剂的体外肺部沉积率测定结果(n=3)
批号 体外肺沉积率(%)
1 2 3
平均沉积率
(%)
20100804 15.72 15.65 15.78 15.72
20100809 14.87 14.93 14.97 14.92
20100812 15.34 15.28 15.32 15.31
20100818 13.80 13.89 13.78 13.82
3 讨论
返魂草素 Ⅱ为酚酸类化合物 ,酸性较强 , HPLC
测定时需在流动相中加入酸 、缓冲盐或离子对试剂 ,
抑制其解离 ,以延长保留时间[ 3, 4] 。本文首次建立
了离子对反相高效液相色谱法测定返魂草素 Ⅱ的含
量。该法专属性强 、准确度高 ,可用于返魂草干粉吸
入剂的质量控制。
吸入给药的主要目的是将药物靶向性送至病灶
部位 ,返魂草干粉吸入剂的研制 ,对上呼吸道感染的
治疗实现了靶向给药 ,提高了疗效 ,降低了不良反
应。对于干粉吸入剂 ,其体外模拟肺沉积试验可帮
助筛选合适的处方和制剂 ,评价体内沉积情况 ,控制
DPI的质量。本文初步对返魂草干粉吸入剂的体外
肺沉积率进行了考察 ,可帮助筛选制剂的处方工艺。
[参考文献 ]
[ 1] 蒋 晔 ,张晓青 ,徐智儒.高效液相色谱法测定唑来膦酸及其
制剂含量 [ J] .药物分析杂志 , 2005, 25(4):406-408
[ 2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[ S] .北京:中
国医药科技出版社 , 2010.附录 XH;附录 IL
[ 3] 吴国海 ,邢建华 ,张丽梅 ,等.高效液相色谱法同时测定呋柳擦
剂中水杨酸及苯甲酸含量 [ J].药物鉴定 , 2009, 18(1):21-22
[ 4] EshitaSM.3-Hydroxybenzoicacidasaninternalstandardforthe
high-pressureliquidchromatographyquantitationofsalicylicacid
inplants[J] .AnalBiochem, 2001, 289:99-102
(收稿日期:2011-02-14;修回日期:2011-06-24)
(本文编辑 梁爱君)
《解放军药学学报 》在第五届全军医学期刊
质量评比中 , 被评为全军优秀医学期刊 。
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