全 文 ：基金项目： 国家科技支撑计划项目（No. 2007BAD76B05）， 国家工程技术研究中心组建项目共同资助。
作者简介： 卢少芳， 女， 1966 年生， 大专。 主要研究方向： 香草兰及其精深加工产品的研究与开发。 E-mail： meicheng_665@163.com。
收稿日期： 2009-07-02 修回日期： 2009-08-31
第 30 卷 第 10 期 热 带 作 物 学 报 Vol．30 No．10
2009 年 10 月 CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CROPS Oct.2009
反相高效液相色谱法检测香草兰豆酊、 浸膏中香兰素
卢少芳， 初 众， 赵建平
中国热带农业科学院香料饮料研究所
国家重要热带作物工程技术研究中心 海南兴隆 571533
摘要 采用反相高效液相色谱法测定香草兰豆酊、 浸膏中香兰素含量， 色谱柱为 C18柱， 甲醇/0.5％冰乙酸水溶
液（20/80， v/v）为流动相， 等浓度洗脱， 测定波长为 280 nm， 外标法定量。 该方法相对标准偏差分别为 0.28％和
0.24％， 加标回收率为 97.89％～100.71％。 本方法具有操作简便， 结果准确等优点， 特别适用于香草兰豆酊、 浸
膏等精深加工产品中香兰素含量的检测分析。
关键词 香兰素； 高效液相色谱法； 检测
中图分类号 O657.72
香草兰（vanilla planifolia andrews）是珍贵的热带香料作物， 素有 “食品香料之王” 美誉 [1]。 其独特的
香气品质使其成为高级香烟、 名酒、 茶叶、 高级糕点的主要配香原料。 目前食品化工企业生产使用的天
然香草兰配香原料， 约 80％为香草兰豆酊与浸膏产品。 香兰素学名 3-甲氧基-4-羟基苯甲醛， 可分为合
成和天然两大类， 天然的香兰素产量很小， 但需求很大， 据统计， 每年中国天然香兰素使用增长率已超
过 12％， 造成极大的市场缺口[2]。 一般来说， 天然香兰素作为主要成分存在于豆酊、 浸膏等香草兰精深加
工产品中， 因此， 它的含量也决定着香草兰豆酊、 浸膏产品的质量、 品质与档次。
目前， 国内外对食品中香兰素的分析检测方法研究报道多采用液相色谱法 [3~7]， 但未见对香草兰豆酊、
浸膏等精深加工产品中香兰素检测方法的研究。 国内多数食品化工企业在使用香草兰豆酊、 浸膏等配香
原料时没有对香兰素含量这一指标作出规定， 造成其产品香气品质稳定性差， 市场竞争力不强等缺点。
此外， 科技人员在评价香草兰精深加工产品品质时， 了解香兰素含量这一指标尤为重要。 因此， 研究香
兰素含量的测定方法在香草兰豆酊、 浸膏生产和新工艺研究中有着重要意义。 笔者采用反相高效液相色
谱法， 用甲醇和 0.5％冰乙酸水溶液作流动相， 在 280 nm 下， 测定香兰素含量， 得到了满意的结果。
1 材料与方法
1.1 材料
香草兰豆酊、 浸膏均为中国热带农业科学院香料饮料研究所产品加工研究中心自制提供。
1.2 仪器与试剂
Agilent1200 型高效液相色谱仪， 配有在线脱气机、 二元泵、 自动进样器、 柱温箱、 二极管阵列检测
器（美国 Agilent 公司）； Milli-Q 超纯水器（美国 Millipore 公司）； KQ-600B 型超声波清洗器（昆山市超声仪
器有限公司）； MS2型旋涡振荡器（德国 IKA 公司）； 甲醇为色谱纯试剂（美国 Fisher 公司）； 香兰素标准品
购自美国 ChromaDex 公司， 纯度不小于 99.5％， 其他试剂均为分析纯（北京化工厂）。
1.3 方法
1.3.1色谱条件 色谱柱： Agilent ZORBAX XDB-C18柱 （5μm， 4.6 mm×150 mm）； 流动相： 甲醇 ∶ 0.5％
冰乙酸水溶液（v/v）=20 ∶ 80； 流速: 1.0 mL/min； 柱温： 室温（26 ℃）， 进样量： 3 μL； 检测波长： 280 nm；
灵敏度： 0.01 AUFS。 以色谱峰的保留时间定性， 并以紫外吸收光谱图辅助定性； 以外标法峰面积定量。
热 带 作 物 学 报 30 卷
1.3.2标准溶液的配制 准确称取香兰素标准品 100 mg 于 100 mL 容量瓶中， 溶液用甲醇-0.5％冰乙酸
水溶液（体积比为 50 ∶ 50）混合液溶解并定容， 配制成质量浓度为 1 000 mg/L 的香兰素标准液， 从中分别吸
取香兰素标准液 4.00， 5.00， 6.00， 7.00， 8.00， 9.00， 10.00 mL 于 7 个 50 mL 容量瓶中定容， 由稀到浓依
次进样 3 μL， 结果见表 1， 色谱图见图 1。
1.3.3香草兰豆酊、 浸膏样品的制备 称取香草兰
豆酊、 浸膏试样 1 mL（mg）， 置于 10 mL 容量瓶中， 用
流动相定容至刻度， 进样 3 μL， 色谱图见图 2。
2 结果与分析
2.1 色谱条件的选择
2.1.1色谱柱的选择 分别考察了 C18柱、 C8柱、 苯基柱等具有不同选择性固定相的色谱柱对香兰素标
准品的分离效果。 结果表明， 香兰素在不同固定相的色谱柱上表现出分离选择性的差异， 最终采用
Agilent ZORBAX XDB-C18 柱（5 μm， 4.6 mm × 150 mm）色谱柱获得了最为理想的分离效果。
2.1.2流动相及洗脱条件的选择 分别采用不同比例的甲醇-水、 乙腈-水等混合溶剂体系进行一系列预
试验， 结果表明， 由于香兰素具有弱酸性， 其在中性流动相体系中的色谱峰形不够理想。 本研究考察了在
流动相中添加甲酸、 冰乙酸、 三氟乙酸后对香兰素色谱分离效果的影响。 结果表明， 以甲醇-0.5％冰乙酸
水溶液作为流动相系统获得了理想的色谱峰形和分离效果。 选择采用等梯度洗脱方式， 经过多次比例试
验， 确定优化的等梯度洗脱条件为甲醇∶ 0.5％冰乙酸水溶液（v/v）=20 ∶ 80。
2.1.3柱温的选择 色谱柱的柱温对于香兰素的保留值和选择性具有一定影响。 本试验研究了 20~40 ℃
柱温范围的分离情况。 结果表明， 当柱温为室温（26℃）时香兰素色谱峰实现了理想的分离。
2.2 标准曲线回归方程与相关系数
由表 1 中香兰素标准系列进样量为横坐标， 相对应色谱图中香兰素检测峰面积为纵坐标绘制标准曲
线， 并对标准曲线进行线性回归， 得到回归曲线与回归方程， 见图 3 所示， R2=0.999 7， 表明线性关系良
好。 此方法最小检测量为 0.024 μg。
2.3 方法精密度测定
连续准确称取 12 份样品， 其中香草兰豆酊、 浸膏样品
各 6 份， 按 1.3.3 所述方法配制成溶液， 稀释同等倍数， 在
上述操作条件下， 进样测定， 其结果见表 2所示。 香草兰豆
酊、 浸膏测定样品相对标准偏差分别为 0.28％和 0.24％， 说
明该方法测定香兰素含量精密度好。
900
800
700
600
500
400
300
200
100
0
0 5 10 15 20 25 30
17.225
VWD1A， 波长=280 mm（XIANG\YANG000027.D）
香兰素
min
m
AU
图 2 测试样品中香兰素色谱图
700
600
500
400
300
200
100
0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20
min
香兰素
17.223
VWD1A， 波长=280 mm（XIANG\YANG000022.D）
m
AU
图 1 香兰素标准样品色谱图
4.5
4
3.5
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
R2=0.999 7
峰
面
积
（ A
e4
）
进样量/μg
图 3 香兰素标准曲线
1544
10期
2.4 方法准确度测定
各取 3份香草兰豆酊、 浸膏样品 0.5 mL（mg）于 6个 50 mL容量瓶中， 分别加入香兰素标准液 2.00， 4.00，
6.00 mL， 用流动相定容至刻度， 进样 3 μL， 结果见表 3。
3 结论
用反相高效液相色谱法 C18 色谱柱， 在
280 nm波长下， 甲醇 ∶0.5％冰乙酸水溶液（v/v）=
20 ∶80为流动相， 等梯度洗脱测定香草兰豆酊、
浸膏产品中香兰素含量， 是一种简便、 快速、
准确的分析方法， 从进样到测试完成分析共需
20～30 min， 香兰素含量与峰面积比值之间呈良
好的线性关系， 相对标准偏差分别为 0.28％
（n=6） 和0.24％（n=6）， 加标回收率为 97.89％～
100.71％。 因此， 本分析方法适于香草兰豆酊、 浸膏产品中香兰素含量的检测， 为香草兰精深加工产品品
质控制分析提供重要理论依据。
参 考 文 献
[1] 王庆煌， 朱自慧. 香草兰[M]. 北京： 中国农业出版社， 2004. 4~7.
[2] 韩秀山. 我国香兰素发展概况[J]. 四川化工与腐蚀控制， 2002， 5（1）： 36~37.
[3] Edwin M， Wallace. HPLC of vanillin and related phenols[J]. Journal of chromatography Science， 1983， 21（3）： 139~143.
[4] 黄艳凤， 周庆礼， 王昌禄. 发酵液中香兰素测定方法的研究[J]. 食品科学， 2004， 25（6）： 160~162.
[5] 景丽洁， 韩 伟， 闫光烈. 用反相高效液相色谱法测定香兰素含量[J]. 食品科学 2006， 27（4）： 205~207.
[6] 任群翔， 孟祥军， 葛 欣， 等. 薄层色谱法在香兰素合成中的应用[J]. 理化检验化学分册， 2002， 38 （8）： 389~393.
[7] 张秀尧. 反相高效液相色谱法同时快速测定食品中常见的 8 种食品添加剂[J]. 色谱， 2000， 18（6）： 539-542.
Determination of Vanillin from Tincture and Extract Products of Vanilla
by Using Reversed Phase High Pressure Liquid Chromatography
Lu Shaofang, Chu Zhong, Zhao Jianping
Spice and Beverage Research Institute, CATAS; State Engineering Technology Research Center for Important
Tropical Crops, Xinglong, Hainan 571533, China
Abstract A simple, rapid and accurate method was developed for determination of vanillin by Reversed
Phase High Pressure Liquid Chromatography. In this method chromatographic column was C18, mobile
phase methanol/0.5% acetic acid (20/80, v/v), elution isocratic, wavelength 280nm, External Standard for
quantification. With this method the relative standard deviation was 0.28% for detection of the samples of
vanilla tincture and 0.24% for detection of the samples of vanilla extract, and the spike recovery rate
ranged from 98.89% to 100.71%. This method is good for determination of vanillin from the well-processed
vanilla tincture and the vanilla extract.
Keywords vanillin; High Pressure Liquid Chromatography(HPLC); determination.
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责任编辑： 赵军明
卢少芳等： 反相高效液相色谱法检测香草兰豆酊、 浸膏中香兰素 1545