全 文 ：China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 35 中国药房 2011年第22卷第35期
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（收稿日期：2011-02-01 修回日期：2011-05-28）
大鼠血浆中木兰花碱的HPLC法测定及药动学研究
马全明 1＊，王 荣 2，王亚峰 1（1.青海省人民医院药剂科，西宁市 810007；2.青海大学医学院，西宁市 810001）
中图分类号 R285；R969.1 文献标识码 A 文章编号 1001-0408（2011）35-3280-03
摘 要 目的：建立大鼠血浆中木兰花碱的高效液相色谱分析方法，研究其在大鼠体内药动学过程。方法：以塔斯品碱为内标，
采用甲基叔丁基醚沉淀蛋白。色谱柱为Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.05 mol·L-1 KH2PO4-三乙胺（42∶58∶
0.5，V∶V∶V），流速为1.0 mL·min-1，紫外检测波长为260 nm。结果：大鼠血浆内源性物质对木兰花碱测定无干扰，木兰花碱检测浓
度在0.50～30.00 μg·mL-1范围内与木兰花碱对内标塔斯品碱的峰面积之比线性关系良好（r＝0.999 4）；提取回收率≥91.05％，方
法回收率在90.57％～95.38％之间，日内、日间精密度RSD均≤8.42％（n＝6）。木兰花碱在大鼠体内的血药浓度-时间曲线符合二
室模型。结论：该方法准确、简便、灵敏，适用于木兰花碱在大鼠体内的药动学研究。
关键词 木兰花碱；高效液相色谱法；大鼠；药动学
Determination of Magnoflorine in Rat Plasma by HPLC and Pharmacokinetic Study
MA Quan-ming，WANG Ya-feng（Dept. of Pharmacy，Qinghai Provincial People’s Hospital，Xining 810007，
China）
WANG Rong（Medical College，Qinghai University，Xining 810001，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish HPLC method for the determination of magnoflorine in rat plasma and to study the relat-
ed pharmacokinetics in rats. METHODS：Taspine was used as the internal standard. Magnoflorine was extracted by liquid-liquid ex-
traction with tert-Butyl methyl ether. Analysis was performed on a Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）column with the mobile
phase consisted of methanol-0.05 mol·L-1 KH2PO4- triethylamine（42∶58∶0.5，V∶V∶V）at a flow rate of 1.0 mL·min-1. The UV de-
tection wavelength was set at 260 nm. RESULTS：Magnoflorine and endogenous could be separated. A linear relationship for mag-
noflorine was found in the range of 0.50～30.00 μg·mL-1（r＝0.999 4）. The extraction recovery rate was more than 91.05％ while
the method recovery was within the range of 90.57％～95.38％. The inter-day and intra-day RSD was less than 8.42％（n＝6）. The
plasma concentration-time curve of magnoflorine in rats could be fitted to a two-compartment model. CONCLUSION：The method
is accurate，simple and sensitive，which could be suitable for the pharmacokinetic study of magnoflorine in rats.
KEY WORDS Magnoflorine；HPLC；Rats；Pharmacokinetics
＊副主任药师。研究方向：医院药学。电话：0971-8066391。
E-mail：mquanm4@163.com
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中国药房 2011年第22卷第35期 China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 35
木兰花碱，又名木兰碱，别名唐松草碱，是毛茛科植物粗
果唐松草Thalictrum dasycarpum Fisch.et Hall.的根部植物中主
要活性物质。现代药理学研究表明[1，2]，木兰花碱具有抗炎、降
压、抗生育及消除运动性疲劳等作用，是复方中药降压组方中
主要的降压成分之一。
到目前为止，对木兰花碱的报道多集中于药效学及含量
分析研究[3～5]，尚未有药动学报道。本文拟采用高效液相色谱
法测定大鼠血浆中木兰花碱的含量，并探讨其药动学特点，旨
在为该药的临床前研究和评价及今后的临床研究提供依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器
600高效液相色谱仪，包括Waters510泵、U6K进样器、484
紫外检测器、Base810s色谱工作站（美国Waters公司）；KQ
250B型数控超声波清洗器（江苏昆山超声仪器有限公司）；
G560E型微型振荡混合仪（美国 Scientific Industries公司）；
SL40型低温离心机（美国Thermo公司）；BS124S型电子天平
（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。
1.2 试药
木兰花碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：
2009020586）；塔斯品碱标准品（中国天津中新药业有限公司，
批号：20080917，含量：≥98.0％）；甲醇为色谱纯，甲基叔丁基
醚、三乙胺及磷酸二氢钾均为分析纯，试验用水为重蒸馏水。
1.3 动物
Wistar大鼠，♀♂兼半，体重（220±20）g，由中国医学科
学院实验动物研究所提供（动物生产合格证号：SCXK（京）
11-00-0006）。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 木兰花碱对照品贮备液的制备 精密称取木兰花碱对
照品 10.0 mg，置于 100 mL容量瓶内，加甲醇溶解并稀释至刻
度，摇匀，即得100 μg·mL-1的木兰花碱对照品贮备液，备用。
2.1.2 塔斯品碱标准品贮备液的制备 精密称取塔斯品碱标
准品 2.0 mg，置于 100 mL容量瓶内，加甲醇溶解并稀释至刻
度，摇匀，即得20 μg·mL-1的塔斯品碱对照品贮备液，备用。
2.2 血浆样品预处理
精密吸取离心后的大鼠血浆100 μL，置于离心试管中，加
入 50 μL塔斯品碱标准品贮备液，滴加 3 mL甲基叔丁基醚除
蛋白，涡旋 30 s，15 000 r·min-1离心 8 min，转移全部上清液于
45℃氮气吹干，残渣用100 μL流动相复溶，过0.45 μm微孔滤
膜后，量取20 μL进行高效液相色谱分析。
2.3 色谱条件
色谱柱：Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲
醇-0.05 mol·L-1 KH2PO4-三乙胺（42∶58∶0.5，V∶V∶V）；流速：
1.0 mL·min-1；紫外检测波长：260 nm；柱温：室温；进样量：
20 μL；灵敏度：0.02 AUFS。相应的理论板数不低于 4 000，分
离度大于2.0。高效液相色谱图见图1。
2.4 标准曲线制备
精密吸取木兰花碱对照品贮备液适量，加入 100 μL空白
血浆，配成木兰花碱浓度分别为 0.50、1.00、5.00、10.00、15.00、
20.00、30.00 μg·mL-1的血浆样品，按“2.2”项下方法操作并记
录色谱峰面积。以木兰花碱的浓度（c）为横坐标，木兰花碱对
内标塔斯品碱的峰面积之比（A1/A2）为纵坐标，进行线性回归，
得回归方程为A1/A2＝0.238 6 c+0.032 16（r＝0.999 4）。结果表
明，木兰花碱检测浓度在0.50～30.00 μg·mL-1范围内与木兰花
碱对内标塔斯品碱的峰面积之比线性关系良好。在此色谱条
件下以 rSN≥3计，木兰花碱在血浆中最低检测浓度为0.10 μg·
mL-1。
2.5 精密度试验
精密吸取木兰花碱对照品贮备液适量，置于离心管中，加入
100 μL 空白血浆，配制成质量浓度分别为 1.00、10.00、
20.00 μg·mL-1的标准血浆质控样品，分别进行日内和日间精
密度考察，结果见表1。
表 1 精密度试验结果（x±s，n＝6）
Tab 1 Results of precision test（x±s，n＝6）
理论浓度/μg·mL-1
1.00
10.00
20.00
日内
测定浓度 /μg·mL-1
0.96±0.05
9.98±0.36
19.87±0.54
RSD/％
5.21
3.61
2.72
日间
测定浓度/μg·mL-1
0.95±0.08
9.99±0.17
19.95±0.68
RSD/％
8.42
1.70
3.41
2.6 回收率试验
精密吸取木兰花碱对照品贮备液适量，置于离心管中，加入
100 μL空白血浆，配制成质量浓度分别为 1.00、10.00、20.00
μg·mL-1的标准血浆质控样品，按“2.2”项下方法操作并记录色
谱峰面积，以测定值与实际值之比计算方法回收率；同时配制
相同浓度木兰花碱水溶液，计算提取回收率，结果见表2。
表 2 木兰花碱血浆样品回收率试验结果（x±s，n＝6）
Tab 2 Results of recovery test of magnoflorine in plasma
sample（x±s，n＝6）
理论浓度/μg·mL-1
1.00
10.00
20.00
提取回收率/％
回收率
92.42±1.27
91.05±2.89
94.47±1.16
RSD
1.37
3.17
1.23
方法回收率/％
回收率
90.57±2.04
95.38±3.63
92.74±1.80
RSD
2.25
3.81
1.94
2.7 稳定性试验
精密吸取木兰花碱对照品贮备液适量，置于离心管中，加入
100 μL空白血浆，配制成质量浓度分别为1.00、10.00、20.00 μg·
mL-1的标准血浆质控样品，考察室温稳定性（0、5、10、15、20
h）；考察反复冻融3次稳定性（24 h）；考察长期稳定性（0、1、3、
5、7、9、11、15、30 d）。质控样品测得的木兰花碱与塔斯品碱峰
面积比与其 0时峰面积比较，RSD均＜10％。结果表明，质控
0 10 20 min
A
0 10 20 min
B
0 10 20 min
C
图1 高效液相色谱图
A.空白血浆样品；B.空白血浆+塔斯品碱内标（20 μg·mL-1）；C. iv 10
mg·kg-1木兰花碱 7.5 h后大鼠血浆样品；1.木兰花碱；2.塔斯品碱（内
标）
Fig 1 HPLC chromatograms
A. blank plasma sample；B. blank plasma+ taspine internal standard（20
μg·mL-1）；C. rat plasma sample 7.5 h after intravenous injection of 10
mg·kg-1magn- oflorine；1.magnoflorine；2. taspine（internal standard）
1
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China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 35 中国药房 2011年第22卷第35期
样品室温放置 20 h、反复冻融 3次、长期保存 30 d均稳定。木
兰花碱血浆样品稳定性试验结果见表3。
表 3 木兰花碱血浆样品稳定性试验结果（x±s，n＝6）
Tab 3 Results of stability test of magnoflorine in plasma
sample（x±s，n＝6）
理论浓度/μg·mL-1
1.00
10.00
20.00
测定浓度/μg·mL-1
0 h
0.98±1.14
9.97±2.08
19.89±0.78
室温放置20 h
0.97±2.01
9.97±3.04
19.90±1.63
反复冻融3次
0.96±1.49
9.96±2.57
19.87±4.01
长期保存30 d
0.98±1.60
9.94±4.97
19.86±3.50
2.8 血浆样品的采集
健康Wistar大鼠 6只，♀♂兼半，隔夜禁食 12 h，自由饮
水，将木兰花碱以生理盐水溶解，按 10 mg·kg-1尾 iv给药。分
别于给药0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.5、4.5、5.5、7.5、9.5、11.5、
24.0、36.0 h后尾静脉采血 0.3 mL，置于肝素化试管中，15 000
r·min-1离心5 min，取上清血浆100 μL，－20℃贮藏，待测。血
浆样品按“2.2”项下方法操作，进样 20 μL，记录色谱峰面积。
血药浓度数据采用中国药理学会数学专业委员会编写的DAS
2.0软件进行模型拟合，以AIC和拟合优度（r）为指标，确定
血药浓度为二室模型。大鼠 iv给药后血药浓度-时间曲线见
图 2；木兰花碱主要药动学参数见表4。
3 讨论
大鼠 iv 10 mg·kg-1木兰花碱后，药物自中央室向外周室分
布相对较快，t1/2α约为 2 h；药物由中央室消除得也很快，t1/2β约
为3 h。
关于木兰花碱含量的高效液相色谱法测定已有文献[3～5]报
道，但是均采用外标法进行含量测定。本试验建立的高效液
相色谱法测定木兰花碱在大鼠血浆中的含量，以塔斯品碱作
为内标，方法简便、快速、重复性好、准确度高，可为该药临床
研究提供参考。
高效液相色谱法测定木兰花碱含量时，曾比较了不同比
例的乙腈-水、甲醇-水、甲醇-水-三乙胺、乙腈-水-三乙胺等多
种流动相系统，结果发现以甲醇-0.05 mol·L-1 KH2PO4-三乙胺
作为流动相，色谱图峰形好，出峰时间适宜，分离效果较好。
本研究采用甲基叔丁基醚作为蛋白沉淀剂，与乙腈、甲
醇、氯仿、乙醚等有机溶剂相比，甲基叔丁基醚具有蛋白沉淀
率高、挥发快等优点，不但能够充分有效地将结合型药物解
离，而且还缩短了血浆样品的处理时间。
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20
15
10
5
0 0 10 20 30 40
t/h
c/μg
·mL
-1
图 2 大鼠 iv给药后血药浓度-时间曲线（x±s，n＝6）
Fig 2 Plasma concentration-time curves of magnoflorine in
rats after intravenous administration（x±s，n＝6）
表 4 木兰花碱主要药动学参数（x±s，n＝6）
Tab 4 Main pharmacokinetic parameters of magnoflorine
（x±s，n＝6）
参数
K10/h-1
K12/h-1
K21/h-1
t1/2α/h
t1/2β/h
AUC0→t/μg·h·mL-1
AUC0-∞/μg·h·mL-1
CL/L·h-1·kg-1
数值
0.181±0.009
0.172±0.101
0.088±0.104
2.145±0.812
3.148±0.143
131.225±2.831
151.242±4.527
0.060±0.007
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