全 文 ：2012 年 5 月第 35 卷第 3 期 陕 西 中 医 学 院 学 报
May． 2012 Vol． 35 No． 3 Journal of Shaanxi College of Traditional Chinese Medicine ·81·
HPLC法测定陕西民间草药天王七中绿原酸的含量*
郭耀武1＊＊ 齐 星2 罗定强1
(1．陕西省食品药品检验所，陕西 西安 710061;2．陕西中医学院，陕西 咸阳 712046)
摘 要:目的 建立天王七药材中有效成分绿原酸的 HPLC 含量测定。方法 岛津 C18 色谱柱(250 mm ×
4． 6 mm，5 um) ，流动相为乙腈 － 0． 4 %磷酸溶液。结果 绿原酸在 0． 994 μg /mL ～ 39． 76 μg /mL，呈良好线性关系，r
= 0． 9997，平均回收率 100． 36 %(n = 6)。结论 该方法简便快速，结果准确，可用于检测天王七药材中绿原酸的含
量。
关键词:天王七;绿原酸;HPLC法;含量测定
中图分类号:R 284 文献标识码:A 文章编号:1002 － 168X(2012)03 － 0081 － 02
天王七始载于《陕西中草药》，为忍冬科植物
羽裂莛子藨 Triosteum pinnatifidum Maxim． 的干燥
根，别名四大天王、白果七、鸡爪七、莛子藨。分布
在陕西、河南、甘肃等地。其味苦涩，性平，入心、
脾、胃经，具有祛风湿、理气活血、健脾胃、消炎镇
痛、生肌的功能，临床上用于劳伤、风湿腰腿痛、跌
打损伤、消化不良、月经不调、白带异常的治疗。本
实验采用高效液相色谱法对天王七中绿原酸的含
量进行测定，方法快速、简便、重复性好，为天王七
药材质量标准研究提供依据［1 － 2］。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 LC － 2010C 岛津高效液相色谱仪，
Sartorius BS224S型分析天平。
1． 2 试药 试剂:乙腈为色谱纯，水为超纯水，其
它试剂均为分析纯。对照品:绿原酸(中国生物制
品检定所，纯度 ＞ 99 %，批号 110753 － 200413)。
样品:分别采自陕西各地忍冬科植物天王七的干
燥根。
2 方法［3 －4］与结果
绿原酸对照品与样品色谱图见图 1、图 2。
2． 1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充
剂;以乙腈 － 0． 4 %磷酸溶液(13:87)为流动相;检
测波长为 327 nm。
2． 2 对照品溶液制备 精密称取绿原酸对照药品
9． 94 mg，置于 25 mL 容量瓶中，加 50 %甲醇使之
溶解，定容至刻度，制成浓度为 39． 76 μg /mL 的对
照品溶液。
2． 3 供试品溶液的制备 称取天王七粗粉(过四
号筛)约 0． 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加
入 50 % 甲醇 50 mL，称定重量，超声处理(功率
250 W，频率 35 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用
50 % 甲醇补足减失的重量，摇匀，过微孔滤膜
(0． 45 μm) ，即得。
图 1 绿原酸对照品色谱图 图 2 绿原酸样品色谱图
2． 4 线性关系的考察 精密称取绿原酸对照品适
量，加甲醇制成浓度分别 0． 994，1． 988，4． 92，9．
94，19． 88，39． 76 μg /mL 的系列对照品溶液，分别
吸取上述对照品溶液各 10 μl，注入液相色谱仪，测
定峰面积。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，
绘制标准曲线，计算回归方程 Y = 31206X，R =
0． 9997，结果表明绿原酸进样量在 0． 994 ～ 39． 76
μg范围内线性良好。
2． 5 精密度实验 精密称取对照品溶液(浓度:
39． 76 μg /mL) ，在上述色谱条件下，连续进样 6
次，记录峰面积积分值，求得 RSD 为 0． 11 %。表
明仪器精密度良好。
2． 6 稳定性试验 取 2． 3 项下方法制备溶液，分
别在 0、2、4、8、12、24、48 小时进样，测定绿原酸的
色谱峰面积，求得 RSD 为 1． 83 %，表明该溶液在
48 h内稳定性良好。
2 ． 7 重复性试验 取同一批样品，按 2 ． 3 项下
(下转第 87 页)
＊
＊＊
基金项目:陕西省科技厅项目(2010 － 24);陕西省中医管理局中医药科研课题(2010ZY11)
通讯作者:郭耀武(1963 － )男，主任药师，硕士研究生导师。研究方向:中药资源开发利用研究。
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3 讨论
冠脉康片由三七、赤芍、佛手、泽泻、甘草等组
成，赤芍中的芍药苷具有扩张血管、抑制血小板聚
集和抗心肌缺血等药理作用，是冠脉康片主要有效
成分之一，故作为冠脉康片含量测定指标。
本文采用 HPLC 法测定了冠脉康中的芍药苷
含量，并对方法学进行了系统研究［3］［4］［5］，结果线
性范围 9． 5 ～ 152 μg /mL，相关系数 r = 0． 9999;稳
定性试验结果表明，本品在 8 h 内稳定，对照品与
样品的 RSD 分别为 0． 89 %和 1． 64 %。5 次重复
性试验的相对标准偏差 RSD =1． 37 %，6 次试验的
平均回收率为 98． 43 %，相对标准偏差 RSD =
1． 52 %。在实际生产中，用于冠脉康片的质量控
制表明，该方法能满足质量分析的需要。该方法
准确、简便、专属，能有效控制冠脉康片质量。
参考文献
［1］卫生部．国家中成药标准汇编·冠脉康片质量标准．
［2］国家药典委员会． 中国药典［M］． 北京:化学工业出版
社，2010．
［3］姚仲青，朱虹，姚海峰．温度及 pH值对赤芍总苷稳定性
的影响［J］．时珍国医国药． 2006，17(7) :1214 － 1215．
［4］水文波． 高效液相色谱 －质谱联用法研究芍药苷的大
鼠小肠吸收［J］． 中国药学杂志． 2007，42(14) :1098
－ 1101．
［5］凌宁生，孙婕，李林，白芍中芍药苷测定方法的比较
［M］．中草药，2004:1372 － 1373．
(收稿日期:2012 － 00 － 00

)
(上接第 81 页)
的制 备 方 法 制 备，平 行 6 份，结 果 均 值 为
3． 0022 mg /g，RSD 为 1． 12 %，表明该方法重复性
良好。
2． 8 加样回收率试验 取已知含量的供试品，精
密称取 6 份，每份约 0． 25 g，分别精密加入绿原酸
对照品溶液(39． 76 μg /mL)20 mL，按供试品溶液
同法制备，测定含量，平均回收率为 100． 36 %，
RSD为 1． 79 %，表明该方法回收率较好。结果见
表 1。
表 1 绿原酸回收率测定结果
取样量(g) 样品中绿原酸含量(mg) 加入量绿原酸(mg) 测得量绿原酸(mg) 回收率% 平均回收率% RSD%
0． 2535 0． 7611 0． 7952 1． 5600 100． 46 100． 36 1． 79
0． 2508 0． 7530 0． 7952 1． 5485 100． 04
0． 2512 0． 7542 0． 7952 1． 5708 102． 69
0． 2496 0． 7493 0． 7952 1． 5605 102． 01
0． 2500 0． 7506 0． 7952 1． 5289 97． 87
0． 2505 0． 7521 0． 7952 1． 5402 99． 11
2． 9 样品测定 对 6 批样品进行 2． 2 项下的方法
测定含量，结果见表 2。
表 2 样品测定结果
批号 含量(mg /g)
1 3． 5679
2 2． 8765
3 3． 0986
4 4． 1105
5 3． 1243
6 2． 6902
3 讨论
3． 1 色谱条件的选择 曾尝试乙腈 － 0． 4 %磷酸
溶液、甲醇 － 0． 4 %磷酸溶液、甲醇 －水 －冰醋酸
作流动相，结果乙腈 － 0． 4 %磷酸溶液做流动相分
离效果好且峰形较好。
3． 2 提取方法的选择 本实验比较了不同提取法
(超声、回流、索氏提取)以及提取时间(20、30、
60 min)对药材提取的影响，结果发现提取时间
30 min以后随时间延长，目标成分含量几乎没有变
化。本实验还考察了 50 %、70 %的甲醇两种溶剂
的提取效果，最终确定以 50 %的甲醇，超声 30 min
作为药材的提取方法。
参考文献
［1］李世全．秦岭巴山天然药物志［M］． 西安:陕西科学技
术出版社． 1987:22．
［2］陕西省生产力促进中心．陕西中药现代化［M］．陕西科
学技术出版社． 2007:191．
［3］刘文斌，何振辉，宾漫容． 中药白芍的 HPLC 含量测定
及指纹图谱研究［J］． 光谱实验室，2010，7(2) :695
－ 697．
［4］石丽，杨海燕，张成． 蝎子七的质量控制方法研究［J］．
药物分析杂志，2005，25(11) :1343 － 1345．
(收稿日期:2012 － 01 － 08)