全 文 ：正交试验法优选毛郁金渗漉提取工艺研究
蒋俭秀１，徐红娟１，刘华钢２＊，赖茂祥３，蒋珍藕３
（１．广西中医药大学，广西 南宁５３００００；２．广西药学会，广西 南宁５３００００；
３．广西中医药研究院，广西 南宁５３００００）
摘 要：目的：采用正交试验法优选毛郁金的最佳渗漉提取工艺。方法：通过正交试验设计，以姜黄素含
量为指标，运用 ＨＰＬＣ法测定其提取量，并对测定结果进行比较、分析，优选出最佳提取工艺。结果：最
佳提取工艺为：毛郁金中粉加２５倍量８０％乙醇进行渗漉，８０℃下进行浓缩干燥。此条件下毛郁金药材
中姜黄素的提取量可达０．２０３ ５ｍｇ／ｇ，转移率为７１．９１％。结论：该工艺简便、稳定、重复性好，可以为工
业化生产提供有效参考。
关键词：毛郁金；渗漉提取；姜黄素
中图分类号：Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－２１９７（２０１６）１６－００４９－０３
ＤＯＩ：１０．１１９５４／ｙｔｃｔｙｙ．２０１６１６０１８
收稿日期：２０１６－０４－１０
作者简介：蒋俭秀（１９９１－），女，广西中医药大学硕士研究生，研究方向为中药学。
通讯作者：刘华钢（１９５６－），女，广西药学会教授，研究方向为药物新剂型、中药药理学。
毛郁金为姜科植物毛郁金Ｃｕｒｃｕｍａ ａｒｏｍａｔｉｃ Ｓａｌｉｓｂ．的
干燥根茎，最早在《唐本草》中有所记载。中医理论中，毛郁
金性辛、苦、寒，归心、肺、肝经，具有破血行气、温经止痛的
功效，主要用于治疗胸胁刺痛、经闭、癥瘕、风湿骨痛、跌扑
肿痛。在壮医理论中，毛郁金性辣、苦、温，通龙路、火路，止
疼痛，用于心绞痛、闭经、腹痛、子宫肌瘤、
痹病以及跌打损
表４ 松香酸液相鉴别结果
编号 液相鉴别结果 结论
２０１５－０１
与松香酸对照试剂在相同保
留时间出现色谱峰
与化学鉴别、薄层
鉴别结论一致
２０１５－０２
与松香酸对照试剂在相同保
留时间未出现色谱峰
未检出松香酸
２０１５－０３
与松香酸对照试剂在相同保
留时间未出现色谱峰
未检出松香酸
２０１５－０４
与松香酸对照试剂在相同保
留时间未出现色谱峰
未检出松香酸
２０１５－０５
与松香酸对照试剂在相同保
留时间未出现色谱峰
未检出松香酸
２０１５－０６
与松香酸对照试剂在相同保
留时间未出现色谱峰
未检出松香酸
２０１５－０７
与松香酸对照试剂在相同保
留时间出现色谱峰
与化学鉴别、薄层
鉴别结论一致
２０１５－０８
与松香酸对照试剂在相同保
留时间未出现色谱峰
未检出松香酸
２０１５－０９
与松香酸对照试剂在相同保
留时间未出现色谱峰
未检出松香酸
２０１５－１０
与松香酸对照试剂在相同保
留时间未 出现色谱峰
未检出松香酸
从表４和图４、图５、图６可以看出，采用乙酸乙酯提取，
新制乙酸铜（０．５％）显色的化学鉴别反应，与采用液相鉴别
反应所得到的结论基本一致。
４ 结论
在实验中发现，如果沉香样品不经过粉碎，或者振摇强
度和时间不够，很容易导致无法显色，从而造成假阴性。部
分样品在振摇过程中容易乳化，或者有其他杂质进入萃取
层，颜色变得浑浊，容易造成显色判断困难。建议结合其他
联用技术对复杂沉香样品是否掺伪进行快速鉴定。
本实验在现有文献报道的基础上，建立采用乙酸乙酯
提取、新制０．５％的乙酸铜为显色剂进行显色的简易化学鉴
别方法快速鉴别沉香中非法添加的松香酸，并用薄层色谱
和液相色谱进行了验证。结果表明，该方法准确率高，适合
现场快速测定，能为食品药品监督管理提供技术参考。
参考文献：
［１］ 吴萌，饶伟文．一种市售掺伪沉香的鉴别［Ｊ］．现代中药研究
与实验，２０１０，２４（５）：３２－３４．
［２］ 张妤琳，曹玲，谭力，等．液质联用技术用于沉香中非法掺入
含松香酸类物质的检测［Ｊ］．中成药，２０１１，３３（５）：８４４－８４７．
［３］ 杨林，乔立瑞，谢丹，等．国产沉香中的二萜类化学成分［Ｊ］．
中国中药杂志，２０１１，３６（１５）：２０８８－２０９１．
［４］ 国家药典委员会．中国人民共和国药典［Ｍ］．北京：中国医药
科技出版社，２０１５：１８５－１８６． （编辑：尹晨茹）
—９４—
伤的治疗［１］。该药材主产于我国东南部至西南部，如广西
横县、灵山、南宁、贵州南北盘江低热河谷区等地，东南亚各
地均有分布［２－３］。毛郁金的现代研究起步较晚，其中针对毛
郁金的化学成分分析及含量测定研究比较多，关于提取工
艺方面的研究报道则比较少。有学者在实验研究中发现毛
郁金具有很好的治疗心血管疾病，尤其冠心病的作用。本
实验旨在探索毛郁金的最佳渗漉提取工艺条件，为今后毛
郁金的大批量生产及大规模应用提供参考依据。
１ 仪器与试药
１．１ 仪器
高效液相色谱仪，日本岛津公司生产；Ｕｌｔｉｍａｔｅ?ＸＢ－Ｃ１８
（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），美国 ＷＥＬＣＨ公司生产；高精度
全自动交流稳压器，鸿宝电气集团股份有限公司生产；
ＫＱ３２００ＤＥ型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公
司生产。
１．２ 试药
毛郁金药材采自广西境内，经广西中医药研究院赖茂
祥研究员鉴定为姜科植物毛郁金（Ｃｕｒｃｕｍａ ａｒｏｍａｔｉｃａ Ｓａｌ－
ｉｓｂ．）的干燥茎，根据有关标准规定［１］，各项检验均合格；姜
黄素对照品购自中国食品药品鉴定研究院，批号：１１０８２３－
２０１００４，含量为９８．８％；可溶性淀粉购自国药集团化学试剂
有限公司，批号：Ｆ２０１０１０２１；渗漉用各浓度乙醇为无水酒
精，实验用水为纯净水，甲醇为分析纯。
２ 方法与结果
２．１ 对照品制备［１］
精密称取５ｍｇ姜黄素对照品，转移至５０ｍＬ量瓶中，加
少量甲醇溶解后再加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品母液，
浓度为９８．８μｇ／ｍＬ。精密量取１ｍＬ母液于１０ｍＬ量瓶中，
加甲醇至刻度，摇匀，即得姜黄素对照品溶液，浓度为
９．８８μｇ／ｍＬ。
２．２ 样品制备
称取适量药材，置于渗漉筒中，加适量特定浓度乙醇浸
泡一定时间后进行渗漉。收集渗漉液，用旋转蒸发仪在
８０℃［４］浓缩，浓缩到一定程度后转移至恒重蒸发皿中，并加
入适量水溶性淀粉，混匀后８０℃水浴中浓缩至固体状，再于
８０℃进行真空干燥，称重，减去蒸发皿重量，得到干膏重量。
收集干膏，置于干燥器中保存，备用。根据加入淀粉量，称
取适量干燥毛郁金提取淀粉混合物，精密称定，置于洁净干
燥２５ｍＬ具塞锥形瓶中，精确加入２５ｍＬ甲醇，称重。静置
３０ｍｉｎ后超声３０ｍｉｎ，取出晾干，待其冷却至室温，称量补
重，用定量滤纸过滤，收集续滤液。精密量取１ｍＬ滤液于
１０ｍＬ量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀即得。
２．３ 色谱条件 ［１］
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈－４％冰醋酸
（４８∶５２）为流动相，检测波长为４３０ｎｍ，流速为１ｍＬ／ｍｉｎ，
柱温为２５℃。
２．４ 测定方法
分别精密吸取上述对照品及样品溶液５μＬ、１０μＬ注入
液相色谱仪，测定即得。见图１。
图１ 姜黄素对照品（Ａ）与毛郁金样品（Ｂ）ＨＰＬＣ色谱
２．５ 方法学考察
２．５．１ 线性考察 按照“２．１”项下方法，分别制备２．９６、
４．９４、９．８８、１１．８６、１４．８２μｇ／ｍＬ浓度的对照品，分别精密吸
取上述对照品溶液各５μＬ，注入液相色谱仪，测定，即得。姜
黄素对照品标准曲线如图２所示。姜黄素对照品的标准曲
线方程为ｙ＝７ ８４８ｘ－３３ １７３，表明进样量在（１．４８２～７．４１）
×１０－２μｇ范围内与其峰面积积分线性关系良好。
２．５．２ 加样回收实验 根据加入淀粉量，称取适量干燥
毛郁金提取淀粉混合物，相当于净干燥提取物约０．５ｇ，再称
取约５ｍｇ姜黄素对照品，分别精密称定，置于洁净干燥
２５ｍＬ具塞锥形瓶中，共６份。分别精确加入２５ｍＬ甲醇，
称重。静置３０ｍｉｎ后超声３０ｍｉｎ，取出晾干，待其冷却至室
温，称量补重，用定量滤纸过滤，收集续滤液。精密量取
１ｍＬ滤液于１０ｍＬ量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀即得。
再参照“２．３”“２．４”项下方法测定，结果表明平均回收率为
９９．８９％（ＲＳＤ＝１．２９％）。
２．６ 正交试验设计
以毛郁金药材粉末的粗细（Ａ）、乙醇浓度（Ｂ）以及乙醇
用量（Ｃ）为考察因素，各设计三个不同水平，即：Ａ为粉末的
粗细，分为特粗粉、粗粉、中粉三个水平；Ｂ为乙醇浓度，分别
为６５％、８０％、９５％；Ｃ为乙醇倍量，分别为１５、２０、２５倍（见
表３）。根据正交试验设计表进行组合，并依此组合进行渗
漉，统一称取药材约４０ｇ（精确至０．０１ｇ）进行渗漉。收集渗
漉液，用旋转蒸发仪在８０℃下浓缩，浓缩到一定程度后转移
至恒重蒸发皿中，并加入适量水溶性淀粉，混匀后８０℃水浴
中浓缩至固体状，再于８０℃进行真空干燥，称重，减去蒸发
皿重量，得到干膏重量。收集干膏，置于干燥器中保存，备
用。样品的制备参照“２．２”项下方法，色谱条件与系统适用
性试验参照“２．３”项下方法，分别精密吸取上述样品溶液各
１０μＬ，注入液相色谱仪，测定，即得。正交试验结果及方差
分析见表４、表５。
—０５—
图２ 姜黄素对照品标准曲线
表３ Ｌ９（３４）正交试验因素水平
水平 Ａ（粉末粗细） Ｂ（乙醇浓度／％） Ｃ（乙醇用量／倍）
１ 特粗粉 ６５ １５
２ 粗粉 ８０ ２０
３ 中粉 ９５ ２５
由表４和表５方差分析结果可知，在三个因素中，粉末
粗细、乙醇浓度对毛郁金的提取有显著性影响（Ｐ＜０．０５），
乙醇用量影响较小，三个因素对毛郁金提取影响程度依次
为：Ｂ＞Ａ＞Ｃ。又因Ａ３＞Ａ２＞Ａ１，故选择Ａ３；Ｂ２＞Ｂ３＞Ｂ１，
故选择Ｂ２；Ｃ３＞Ｃ２＞Ｃ１，因此最佳提取组合为Ａ３Ｂ２Ｃ３，即毛
郁金中粉用２５倍药材量的８０％乙醇进行渗漉提取。
表４ Ｌ９（３４）正交试验结果
序号 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ 结果（ｍｇ／ｇ）
１
２
３
４
５
６
７
８
９
１
１
１
２
２
２
３
３
３
１
２
３
１
２
３
１
２
３
１
２
３
２
３
１
３
１
２
１
２
３
３
１
２
２
３
１
０．１２９ ８
０．１２４ ４
０．１２７ ２
０．１７２ １
０．１６６ ３
０．１３５ ３
０．１８８ ０
０．１５９ ８
０．１７５ ３
Ｋ１
Ｋ２
Ｋ３
Ｒ
０．３８
０．４７
０．５２
０．０５
０．２５
０．３７
０．３０
０．０８
０．４２
０．４７
０．４８
０．０２
０．４７
０．４５
０．４６
０．０１
注：Ａ：粉末粗细；Ｂ：乙醇浓度；Ｃ：乙醇用量；Ｄ：空白对照。
表５ 方差分析结果
方差来源 离差平方和 自由度 均方（ＭＳ） Ｆ值 显著性
Ａ ０．００３４５ ２ ０．００１７３ ３６．８２ ＜０．０５
Ｂ ０．００４５２ ２ ０．００２２６ ４６．１４ ＜０．０５
Ｃ ０．０００６１ ２ ０．０００３０ ６．５２ ＞０．０５
Ｄ ０．０００１０ ２ ０．００００５ １．００ ＞０．０５
注：Ａ：粉末粗细；Ｂ：乙醇浓度；Ｃ：乙醇用量；Ｄ：空白对照；Ｆ０．０５（１，２）＝
１９．００。
２．７ 验证试验
取毛郁金中粉３份，每份约４０ｇ（精确至０．０１ｇ），分别按
照优选的最佳渗漉工艺条件进行试验，结果见表６。结果表
明按优选得到的工艺条件进行提取，姜黄素提取量稳定，平
均含量为０．２０３ ５ｍｇ／ｇ，平均转移率为７１．９１％，表明优选
得到的工艺条件合理、稳定、可行。
表６ 验证试验结果
序号 药材量（ｇ）总黄酮醇苷提取量（ｍｇ／ｇ） 均值（ｍｇ／ｇ）ＲＳＤ（％）
１ ４０．４６ ０．２０６ ９
２ ４０．４３ ０．１９７ ０ ０．２０３ ５ １．６４
３ ４０．４２ ０．２０６ ７
综合上述研究结果，确定毛郁金渗漉提取的最佳工艺
为：毛郁金中粉用２５倍药材量的８０％乙醇进行渗漉。
３ 讨论
此次测定的毛郁金指标成分姜黄素化学结构不稳
定［４－５］，高温易分解，故干燥温度不宜过高。毛郁金含有多种
脂溶性成分，其提取物不易干燥及粉碎。因此，向毛郁金提
取物中加入适量的淀粉作为稀释剂，在利于干燥的同时不
影响姜黄素的测定。
本研究以姜黄素的含量为主要考察指标，粉末的粗细、
乙醇浓度以及乙醇用量为考察因素进行正交试验设计优选
最佳组合。通过正交试验，确定毛郁金的渗漉提取最佳工
艺为毛郁金中粉，乙醇浓度为８０％，乙醇体积用量为２５倍。
在此条件下，姜黄素的提取率可达７１．９１％。本实验的优化
工艺简便、重现性好，可为工业大生产提供重要参考。
参考文献：
［１］ 广西壮族自治区食品药品监督管理局．广西壮族自治区壮药
质量标准［Ｍ］．南宁：广西科学技术出版社，２０１１：５３－５４．
［２］ 肖小河，钟国跃，舒光明，等．国产姜黄属药用植物的数值分
类学研究［Ｊ］．中国中药杂志，２００４，２９（１）：１５－２３．
［３］ 叶世芸，苏彦雷，黄勇其，等．贵州南、北盘江地区姜黄属植物
中姜黄素类化合物含量对比研究［Ｊ］．安徽农业科学，２０１２，
４０（１２）：７０５８－７０６０．
［４］ 陈雁鸿，秦波，张媛媛，等．姜黄素不同提取方法比较研究
［Ｊ］．中国中医药信息杂志，２００８，１５（７）：５５－５６．
［５］ 王丽华，彭永练，江玉才，等．姜黄素化合物酯缩合前药及活
性研究进展［Ｊ］．海峡药学，２０１５，２７（６）：３－８．
（编辑：尹晨茹）
—１５—