全 文 ：安徽科技学院学报，2012，26(5) :38 ～ 42
Journal of Anhui Science and Technology University
收稿日期:2012 － 05 － 07
基金项目:国家科技部科技人员服务企业行动项目(2009GJC30034) ;安徽省教育厅研究计划项目(KJ2010B301) ;安徽科技学院青年基
金研究计划项目(ZRC2011283)。
作者简介:周国梁 (1979 －) ，男，河南省浚县人，在读硕士生，讲师，主要从事中药分析及中药质量研究。* 通讯作者:俞浩，副教授，E
－ mail:yhz_1230@ 163． com。
凤尾草多糖两种测定方法的比较
周国梁1，鲍 斌2，俞 浩1* ，张孝林1，刘汉珍1，时维静1
(1．安徽科技学院 食品药品学院，安徽 凤阳 233100;2．上海中医药大学 药学院，上海 200032)
摘 要:目的:为选出一种比较准确、方便测定凤尾草多糖的方法。方法:通过热浸法提取凤尾草中多糖，
采用蒽酮 －硫酸法、苯酚 －硫酸法两种方法进行含量测定比较。结果:蒽酮 －硫酸法和苯酚 －硫酸法的稳
定性实验 RSD分别为 1． 56 %和 0． 68 %，精密度实验 RSD分别为 9． 35 %和 2． 28 %，回收率平均值分别
91． 71 %和 99． 23%。结论:苯酚 －硫酸法具有稳定性好、精密度高，而且回收率实验也较为理想，是测定
凤尾草多糖含量较为理想的方法。
关键词:凤尾草;多糖含量;苯酚 －硫酸法;蒽酮 －硫酸法;紫外分光光度法
中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1673 － 8772(2012)05 － 0038 － 05
Comparison of Two Determination Methods for
Polysaccharide Content in Pteris multifida Poir
ZHOU Guo － liang1，BAO Bin2，YU Hao1* ，ZHANG Xiao － lin1，LIU Han － zhen1，SHI Wei － jing1
(1． College of Food and Drug，Anhui Science and Technology University，Fengyang 233100，China;
2． Shanghai Traditional Chinese Medicine University，Shanghai 200032，China)
Abstract:Objective:In order to select an accurate，convenient method of Pteris multifida Poir polysaccharide de-
termination． Methods:This experiment by hot leaching extracted polysaccharide，the methods of Phenol － sulfuric
acid method and Anthrone － sulfuric acid method were compared． Results:The results showed the RSD value of
the two methods were 1． 56% and 0． 68% in stability experiment，9． 35% and 2． 28% in accuracy experiment，
the average recovery was 91． 71 % and 99． 23% respectively． Conclusion:The experimental design of Phenol －
sulfuric acid method is simple，reliable and highly predictive and the result of recovery experiment was more sat-
isfactory． So the better method to determine Pteris multifida polysaccharide content was Phenol － sulfuric acid
method．
Key words:Pteris multifida Poir;Polysaccharide content;Anthrone － sulfuric acid method;Phenol － sulfuric acid
method;Uv － spectrophotometry
凤尾草为凤尾蕨科植物凤尾草(Pteris multifida Poir)的全草［1］，具有清热解毒，凉血止血，消肿解毒功
效。凤尾草中含黄酮类，萜类化合物，甾醇类等生物活性成分［2］，具有广谱抗菌，抗肿瘤，抗病毒作用。凤
尾草多糖是从凤尾草中提取的植物多糖。研究表明，凤尾草多糖具有增强免疫力，降血脂，血糖，解毒，抗
菌，抗辐射等作用［3 － 4］。多糖的测定方法主要有蒽酮 －硫酸法和苯酚 －硫酸法测定法。本研究通过两种
方法测定凤尾草多糖的含量，采用统计学方法比较确定两种方法对测定凤尾草多糖含量的影响，为中药凤
尾草多糖的研究提供参考依据。
1 仪器与试剂
1． 1 仪器
TU1810SPC型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器公司) ;KQ － 250DE 型数控超声波清洗器(昆
山市超声仪器有限公司) ;HH －6 型数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司) ;FA2104B 型电子天平(上
海民桥精密科学仪器有限公司) ;ZK －82B型电热真空干燥箱(上海实验仪器厂有限公司) ;DL － 5 型低速
大容量离心机;JFSD －100 型粉碎机(上海嘉定粮油仪器有限公司)。
1． 2 材料与试剂
95%乙醇(AR) ;苯酚(AR) ;蒽酮(AR) ;硫酸(AR) ;氯仿(AR) ;正丁醇(AR) ，葡萄糖标准品(中国药
品生物制品检定所，批号:110833 － 201004)。凤尾草(Pteris multifida Poir)购于安徽亳州沪谯饮片厂(批
号:20110615) ，经安徽科技学院刘汉珍副教授鉴定为正品。
2 方法
2． 1 样品中多糖的提取
将凤尾草在 60℃电热烘箱中连续干燥 3h后放置在干燥器中冷却至室温，采用粉碎机粉碎后过 20 目
筛，称取粉碎样品 8 份，每份 5． 00g，将 8 份药材分别放置于 500mL 烧杯中，提取方法参照杨联，吴建平
等［5］提取多糖方法提取多糖溶液，将提取液液转移至 100mL容量瓶中定容，得多糖提取液。
2． 2 蒽酮 －硫酸法对多糖的测定
2． 2． 1 蒽酮 －硫酸溶液的配制 取蒽酮 0． 1g 在冰水浴中加浓硫酸缓慢溶解后，置 50mL 容量瓶中定容
备用，配置溶液需当天配用。
2． 2． 2 葡萄糖标准液制备 称取 50mg葡萄糖于 105℃下干燥 4h 至恒重后置干燥器中冷却。精密称取
10mg干燥后的葡萄糖，在 100mL容量瓶中定容得 1mg /mL标准葡萄糖溶液。
2． 2． 3 线性关系考察 分别精密量取 0． 00、0． 10、0． 20、0． 40、0． 60、0． 80mL 葡萄糖标准溶液(1mg /mL)
放置在 6 个 100mL容量瓶中，定容后分别精密量取 2． 00mL不同浓度的葡萄糖标准溶液于具塞试管中，分
别加入蒽酮 －硫酸溶液 4． 00mL混匀，沸水浴 10min 后采用冰水浴冷却 5min，放置室温 10min 后在 500 ～
700nm范围内进行扫描，扫描结果在 620nm 处有最大吸光度，用紫外分光光度计在 620nm 波长处以吸光
度值(A)为纵坐标，浓度值(C)为横坐标作回归方程 A = 0． 0078C － 0． 0055，R2 = 0． 9995，表明在 10 ～
80mg /mL浓度范围内浓度与吸光度呈良好的线性关系。
2． 2． 4 多糖提取液的测定 精密吸取多糖提取液 0． 20mL，蒸馏水 0． 80mL 于试管中，加入 4． 00mL 蒽酮
－硫酸溶液混匀，沸水浴 10min后冰水浴冷却 5min，放置室温 10min 后用分光光度计在 620nm 处测定吸
光度(A) ，根据回归方程计算样品多糖含量。
2． 2． 5 稳定性实验［6］ 采用同一份多糖样品，分别在 0、0． 5、1． 0、1． 5、2． 0 h 测定其吸光度值，并计算其
RSD值。
2． 2． 6 精密度实验 采用同一份多糖样品吸取 5mL 置于 50 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，按照
2． 2． 3 项下测定吸光度(A) ，连续测定 8 次，计算 RSD值。
2． 2． 7 加样回收率实验 精密吸取已知浓度的多糖提取液 6 份，分别加入葡萄糖标准品溶液(1mg /mL)
0． 3mL，按照 2． 2． 3 项下方法测定吸光度，计算回收率。
2． 3 苯酚 －硫酸法对多糖的测定
2． 3． 1 苯酚溶液的配制 取苯酚加铝片 0． 2g，碳酸氢钠 0． 1 g于沸水上蒸馏，收集蒸馏液，取液化后的苯
酚 5mL置于 100mL容量瓶中，加蒸馏水定容，备用。
2． 3． 2 线性关系考察 分别精密量取 0． 00、0． 10、0． 20、0． 40、0． 60、0． 80mL 葡萄糖标准溶液(1mg /mL)
放置在 6 个 100mL容量瓶中，定容后分别精密量取 2． 00mL不同浓度的葡萄糖标准溶液于具塞试管中，然
后分别加入苯酚溶液各 1． 0mL，摇匀，加浓硫酸 5． 0mL，置沸水浴 10min 后冰水浴冷却 5min，放置室温
10min后在 400 ～ 600nm范围内进行扫描，在 490nm处有最大吸光度，用紫外分光光度计在 490nm波长处
93第 26 卷第 5 期 周国梁，等 凤尾草多糖两种测定方法的比较
的吸光度(A) ，以吸光度值(A)为纵坐标，浓度值(C)为横坐标得回归方程 A = 0． 0151C － 0． 0229，R2 = 0．
9994，表明在 10 ～ 80mg /mL浓度范围内浓度与吸光度呈良好的线性关系。
2． 3． 3 多糖提取液的测定 精密吸取多糖提取液 0． 2mL与 0． 8mL蒸馏水，置于具塞试管中，加苯酚溶液
1mL，摇匀，加浓硫酸 5． 0mL，置沸水浴 10min后冰水浴冷却 5min，放置室温 10min 后于 490nm 处比色，测
定吸光度(A) ，根据回归方程计算样品多糖含量。
2． 3． 4 稳定性实验 采用同一份多糖样品，分别在 0、0． 5、1． 0、1． 5、2． 0 h 测定其吸光度值，并计算其
RSD值。
2． 3． 5 精密度实验 采用同一份多糖样品中吸取 5mL 置于 50 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，测
定吸光度(A) ，连续测定 8 次，计算 RSD值。
2． 3． 6 加样回收率实验 精密吸取已知浓度的多糖提取液 6 份，分别加入葡萄糖标准品溶液(1mg /mL)
0． 3mL，按照 2． 3． 2 项下方法测定吸光度，计算回收率。
3 结果与分析
3． 1 蒽酮 －硫酸法测定样品吸光度及含量
采用蒽酮 －硫酸法测定凤尾草提取液体中多糖的吸光度及含量，结果见表 1。
表 1 蒽酮 －硫酸法测定多糖样品吸光度及含量
Table 1 The absorbency and content of Polysaccharide sample by Anthrone － sulfuric acid method
样品序号 吸光度(A) 含量(%)
1 0． 449 2． 243
2 0． 462 2． 312
3 0． 451 2． 257
4 0． 447 2． 236
5 0． 478 2． 374
6 0． 452 2． 259
7 0． 457 2． 284
8 0． 461 2． 306
3． 2 苯酚 －硫酸法测定样品吸光度及含量
采用苯酚 －硫酸法测定凤尾草提取液体中多糖的吸光度及含量，结果见表 2。
表 2 苯酚 －硫酸法测定多糖样品吸光度及含量
Table 2 The absorbency and content of Polysaccharide sample by Phenol － sulfuric acid method
样品序号 吸光度(A) 含量(%)
1 0． 850 2． 549
2 0． 875 2． 626
3 0． 856 2． 569
4 0． 885 2． 656
5 0． 881 2． 644
6 0． 876 2． 629
7 0． 866 2． 598
8 0． 845 2． 534
3． 3 两种方法测定的结果比较
采用 t检验对多糖样本进行检验，结果 P ＜ 0． 05，表明差异有统计学意义。从表 3 可以看出，蒽酮 －硫
酸法测得的凤尾草多糖含量显著低于苯酚 －硫酸法(P ＜ 0． 05) ，蒽酮 －硫酸法测得样品重复间的相对标
04 安徽科技学院学报 2012 年
准差低于苯酚 －硫酸法，说明采用蒽酮 －硫酸法测定凤尾草多糖含量具有更高的稳定性［7 － 8］。
表 3 两种方法测定凤尾草多糖含量的结果比较
Table 3 The comparison of results between two determination methods
方法 样本 平均值(%)
蒽酮 －硫酸法 8 2． 28 + 0． 38a
苯酚 －硫酸法 8 2． 60 + 0． 72b
3． 4 两种方法测定稳定性、精密度的比较
从表 4 可以看出，稳定性和精密度实验中，苯酚 －硫酸法测定凤尾草多糖的 RSD 值分别为 0． 68 %、
2． 28 %，均小于蒽酮 －硫酸法的 RSD值 1． 56 %、9． 35 %，说明苯酚 －硫酸法较蒽酮 －硫酸法实验结果精
密，各重复间误差小。
表 4 两种方法的稳定性、精密度实验结果
Table 4 Results of stability and precision experiments by two methods
方法 稳定性 RSD(%) 精密度 RSD (%)
蒽酮 －硫酸法 1． 56 9． 35
苯酚 －硫酸法 0． 68 2． 28
3． 5 两种方法测定回收率的比较
由表 5 可见，两种测定方法的回收率均低于 100%，蒽酮 －硫酸法的回收率低于苯酚 －硫酸法;蒽酮
－硫酸法与苯酚 －硫酸法的相对标准差分别为 4． 99% 和 4． 12%，比较而言，苯酚 －硫酸法回收率较高。
表 5 两种方法测定回收实验结果
Table 5 Results of adding standard sample experiments by two methods
方法 样品编号
已知量
(ug)
添加量
(ug)
实测值
(ug)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
相对标准差
(%)
蒽酮 －硫酸法
1 23． 385 1 23． 685 97． 13
2 23． 385 2 24． 136 95． 08
3 23． 385 4 25． 037 91． 43
4 23． 385 6 26． 688 90． 82
5 23． 385 8 26． 388 84． 08
91． 71 4． 99
苯酚 －硫酸法
1 19． 695 1 20． 097 97． 11
2 19． 695 2 20． 701 95． 42
3 19． 695 4 22． 914 96． 70
4 19． 695 6 26． 133 101． 70
5 19． 695 8 29． 151 105． 26
99． 23 4． 12
4 讨论
4． 1 显色剂浓度对试验结果具有较大的影响，本试验在测定过程中采用 5%的苯酚溶液和 0． 2%的蒽酮
－硫酸溶液与很多文献报道相符［9 － 10］，但在测定多糖含量过程中，蒽酮 －硫酸法要求蒽酮 －硫酸显色液
现配现用，操作过于繁琐，试验条件要求较高，因此在试验中的稳定性和精密度较差。
4． 2 蛋白对多糖测定中影响很大，主要是因为在测定过程中蛋白在测定波长范围内具有一定的吸光度，
因此采用上述两种方法测定凤尾草多糖含量必须除蛋白，尤其在采用蒽酮 －硫酸法中影响较大。本试验
过程中采用 Sevag 法多次萃取除蛋白，取得了较好的效果，因此在测定多糖中具有高蛋白含量的样品，应
增加萃取次数。
14第 26 卷第 5 期 周国梁，等 凤尾草多糖两种测定方法的比较
4． 3 蒽酮 －硫酸法和苯酚 －硫酸法测得的凤尾草多糖含量分别为 2． 28%和 2． 60%，结果表明有显著性
差异(P ＜ 0． 05) ，苯酚 －硫酸法测定凤尾草多糖的稳定性、精密度 RSD值分别为 0． 68 %、2． 28 %，均小于
蒽酮 －硫酸法的 RSD值 1． 56 %、9． 35 %，苯酚 －硫酸法和蒽酮 －硫酸法回收率分别为 99． 23%和 91． 71%，
结果表明苯酚 －硫酸法测定凤尾草多糖含量灵敏度更高。
致谢:本实验的进行中得到了上海中医药大学中药学专业刘飞等的大力支持和帮助，在此一并表示感谢!
参考文献:
［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典 2010 年版一部［S］． 北京:中国医药科技出版社，2010:174．
［2］王文蜀，王志骞，周亚伟．凤尾草化学成分研究［J］． 中药材，2008，31(8) :1165 － 1166．
［3］舒积成，潘景行，张锐，等．凤尾草中倍半萜类成分研究［J］． 中成药，2011，33(12) :2104 － 2106．
［4］王刚，张利敏，余有贵，等．凤尾草提取物的抗肿瘤活性的研究［J］． 邵阳高等专科学校学报，2001(3) :199 － 203．
［5］杨联，吴建平，张利平，等．两种测定苜蓿芽多糖方法的比较［J］． 甘肃农业大学学报，2006，2(41) :88 － 91．
［6］王守现，刘宇，赵爽，等．白灵菇菌丝体多糖两种测定方法的比较［J］． 食品研究与开发，2011，32(9) :162 － 164．
［7］刘敏，高岚．紫外分光光度法测定灵芝孢子子粉胶囊中灵芝多糖含量［J］． 现代中药研究与实践，2005，19(4) :34．
［8］杨丽娥，胡雪华，程美蓉．苜蓿多糖提取工艺研究［J］． 上海交通大学学报，2002，20(12) :6 － 10．
［9］赵大云，杨丽娥．苜蓿多糖提取及测定方法的比较［J］． 上海交通大学学报，2004，22(3) :256 － 260．
［10］王署秀，温远影，王雷，等．芦荟多糖的研究［J］． 植物学报，1989，31(5) :389 － 392．
(责任编辑:李孟良)
24 安徽科技学院学报 2012 年