全 文 ：　　大量实验表明 ,脂肪组织在胰岛素抵抗和 2-DM
的发病机制中占有重要地位[ 4] 。脂肪组织是胰岛素敏
感的重要靶组织 ,也是最早胰岛素抵抗的部位 。ADRP
是一种存在于灵长类脂肪细胞的相对分子量为 53 000
的蛋白质 ,在脂肪细胞分化的早期 , ADRP就有表达
(早于脂肪酸结合蛋白 、脂蛋白酯酶), ADRP高水平的
表达出现在成熟的脂肪细胞[ 5] 。 ADRP基因表达的蛋
白质 adipophilin是形成细胞内脂质小滴囊泡的主要成
分 ,也是巨噬细胞 、脂肪细胞内脂质沉积的标志 [ 6] 。
Adipophilin可促进脂肪酸的吸收 ,最终导致细胞质内
自由脂肪酸增多 。自由脂肪酸增多可造成胞内长链脂
肪酰辅酶 A堆积 ,浓度增加 ,可直接影响胰岛细胞对葡
萄糖刺激下的胰岛素释放反应。 ADRP基因表达受过
氧化物酶增值体激活的受体 PPARγ、PPARα、PPARδ
调控 ,脂肪酸经由 PPAR介导促进 adipophilin的高表
达 [ 7] ;Adipophilin还能通过增加胰岛 β细胞 、肌肉和脂
肪细胞内的脂肪积聚 ,引起胰岛素分泌异常和胰岛素
抵抗。另外阻止蛋白激酶 C的活性 ,将导致 PPAR基
因的高表达和细胞内脂滴增多 、变大 ,使用药物使
PPAR基因表达下降时 ,将使脂滴融解 、消失 [ 8] 。
本实验观察到 , 2-DM大鼠大网膜脂肪组织 ADRP
基因 mRNA的表达明显增加 ,葛根素治疗后 ,高 、中剂
量药物组 ADRP的表达显著降低。说明葛根素通过下
调脂肪组织 ADRP基因的表达 ,降低胰岛素抵抗水平 ,
从而降低 2-DM大鼠血糖和改善体内脂代谢紊乱 ,达
到治疗糖尿病的目的 。但其确切的作用机制尚有待于
进一步研究。
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豨莶草促进皮肤创伤愈合的实验研究
罗　琼 1 ,汪建平 2 ,阮金兰 2 , 陈延安 2 ,李艳艳 2
(1.武汉市第一医院病理科 , 430022;2.华中科技大学同济医学院药学院 , 武汉　430030)
[摘　要 ] 　目的　研究豨莶草(SiegesbeckiaorientalisL.)甲醇提取物对成纤维细胞增殖及对大鼠创伤的修复作用。
方法　体外培养乳鼠真皮成纤维细胞 ,加入不同浓度的豨莶草提取物 , MTT法观察其对细胞增殖的影响;制备大鼠切除
伤模型 , 观察豨莶草提取物对大鼠实验性创伤的修复作用。结果　浓度为 50 ～ 200 μg· mL-1的豨莶草提取物对成纤维
细胞的增殖作用显著;豨莶草甲醇提取物外涂对实验性大鼠皮肤损伤有加速修复作用。结论　豨莶草具有促伤口愈合
作用 , 其促修复作用可能与促进成纤维细胞增殖有关。
[关键词 ] 　豨莶草;成纤维细胞;创伤愈合
[中图分类号 ] 　R285.5　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2008)10-1161-03
PromotionoftheCutaneousWoundHealingbySiegesbeckiaorientalisL.
LUOQiong1 , WANGJian-ping2 , RUANJin-lan2 , CHENYan-an2 , LIYan-yan2(1.DepartmentofPathology,
theFirstHospitalofWuhanCity, 430022, China;2.SchoolofPharmacy, TongiMedicalColege, Huazhong
UniversityofScienceandTechnology, Wuhan430030, China)
·1161·医药导报 2008年 10月第 27卷第 10期
ABSTRACT　Objective　TostudytheefectsofSiegesbeckiaorientalisL.ontheproliferationoffibroblastsandwound
healinginrats.　Methods　Purifieddermalfibroblastswerederivedfromneonaterats, thenincubatedwiththemethanolextracts
ofSiegesbeckiaorientalisL.andweremeasuredforproliferationbyMTTmethod.Themodelofcutaneouswoundwassetupandused
toevaluatetheeffectsofS.orientalisinrats.　Results　50 -200 μg· mL-1ofextractsfromS.orientalissignificantlypromoted
fibroblastsproliferation, andexternalapplicationofwhichacceleratedcutaneouswoundhealing.　Conclusion　Siegesbeckia
orientalisL.couldenhancecutaneouswoundhealing, whichmaybecontributetostimulatingfibroblastsproliferation.
KEYWORDS　SiegesbeckiaorientalisL.;Fibroblasts;Woundhealing
　　豨莶草(SiegesbeckiaorientalisL.)为常用中药 ,具
有祛风湿 、利关节 、抗炎 、降血压等功效[ 1] ,民间广泛
用于创伤的治疗与修复 ,国内外尚未见有其促进创伤
愈合的研究报道 。本实验中 ,笔者制备豨莶草的甲醇
提取物 ,考察其对体外培养的成纤维细胞(fibroblas,
FB)增殖活性影响 ,同时考察其对大鼠切除伤的创伤
修复作用 ,从而为临床应用豨莶草促进创伤愈合提供
实验依据。
1　材料与方法　
1.1　实验动物　健康雄性 Wistar大鼠 ,体重(170±
20)g, 3日龄 Wistar乳鼠 ,由华中科技大学同济医学院
实验动物中心提供 ,许可证号:SCXK(鄂)2004-0007。
1.2　仪器与试剂　酶标仪(美国 BioRad3550)、CO2培
养箱(FormaSientificlnc)、培养板(美国 Coming);BX50
光学显微镜(日本 Olympus);胰蛋白酶 、四甲基偶氮唑
盐(MTT)、二甲亚砜(DMSO)均为 Sigma公司产品。
1.3　豨莶草提取物的制备　豨莶草于 2006年秋采收
于主产区江西省九江地区 ,经华中科技大学同济医学
院药学院张长弓副教授鉴定为菊科(Compositae)植物
(SiegesbeckiaorientalisL.),凭证标本存放于药学院标
本室(标本号:0020060911)。取干燥豨莶草粗粉 500
g,加甲醇 10倍量冷浸 2周 ,回收甲醇 ,残渣真空干燥 ,
用前以 0.9%氯化钠溶液配制并进行倍量稀释[ 2] 。
1.4　豨莶草对成纤维细胞增殖的影响　
1.4.1　大鼠皮肤成纤维细胞的培养 、传代　参照文献
[ 3]方法 ,采用贴壁法培养 3日龄 Wistar乳鼠背部皮肤
成纤维细胞 ,培养液为含 10%胎牛血清的 RPMI1640(含
青霉素 100 U· mL-1 ,链霉素 100 μg· mL-1)在 37 ℃、
5%二氧化碳 孵育箱中培养 ,细胞生长融合成片后 ,消
化 、传代 ,实验用第 3代成纤维细胞。
1.4.2　MTT法检测豨莶草对 FB细胞增殖的影响　
参照文献 [ 4]方法 。取对数生长期的成纤维细胞接种
于 96孔培养板 (细胞数为每孔 5 ×104个 , 每孔
100μL),加入不同浓度的豨莶草提取物溶液 ,使其终
[收稿日期 ] 　2007-12-10
[作者简介 ] 　罗　琼(1976-), 女 , 湖北武汉人 , 医师 , 学
士 , 主要从事临床病理诊断与研究。电话:027-85332610, E-
mail:soulfish30@yahoo.com.cn。
浓度分别为 0.1 , 1.0, 50.0, 100.0, 200.0 μg· mL-1 ,
最后用培养基补充至每孔 200 μL, 5%二氧化碳 孵箱
中培养 72h后每孔加入 MTT溶液(5 g· L-1)20 μL,
继续培养 4 h后 , 1 000 r· min-1 ,弃去孔内培养基 ,每
孔加入 DMSO150 μL, 37℃温摇 10 min。使其充分溶
解 ,酶联检测仪 490 nm波长处测定吸光度(A值),以
无豨莶草提取物组为对照(n=6)。
1.5　豨莶草对大鼠皮肤创伤愈合的影响　
1.5.1　大鼠皮肤切除伤模型的建立　参照文献 [ 5]
方法。健康雄性 Wistar大鼠 ,以 3%戊巴比妥钠(30
mg·kg-1)腹腔注射麻醉 ,背部脱毛 ,常规消毒。在脊
柱两侧 , 用角膜环钻各切取半径为 1.6 cm, 面积为
400mm2的圆形皮肤组织 ,创面深度达到筋膜下 。造
模后大鼠伤口暴露 ,单笼饲养。
1.5.2　分组及给药　大鼠随机分为 5组 ,每组 6只 ,
涂药量均为 100 μL· d-1 , bid。空白对照组创伤面涂
无菌 0.9%氯化钠溶液;阳性对照组创伤面涂重组牛
碱性成纤维细胞生长因子(bFGF,珠海东大生物制药
有限公司 , 120AU);豨莶草高 、中 、低剂量组分别给予
豨莶草 (溶于 0.9%氯化钠溶液 )1.5, 1.0 , 0.5
g· mL-1。
1.5.3　动态观测创面愈合率　从创伤第 4天起 ,每隔
4 d用透明薄膜描记创面面积 ,与原创面面积比较 ,计
算创面愈合率 。愈合率(%)=(原创面面积 -现创
面面积 )/原创面面积 ×100 % , 评价创面愈合速
度 [ 6, 7] 。
1.5.4　创面愈合时间　观察记录创面完成上皮覆盖
所需要的时间。
1.5.5　创面组织学检查　于创伤后第 16天 ,取创面
皮肤 ,置于 10%中性甲醛溶液中固定 ,常规脱水 , 石蜡
包埋 ,切成 5 μm切片 ,苏木精 -伊红(HE)染色 ,光镜
观察。
1.6　统计学方法　所有数据均用 x±s表示 ,各组间
比较采用 Student′t检验 , P<0.05为差异有显著性 。
2　结果　
2.1　豨莶草的提取物溶液对成纤维细胞增殖的影
响　将不同浓度的甲醇提取物分别与成纤维细胞作用
72 h后 ,酶联检测仪 490 nm波长处测定 A值(表 1)。
·1162· HeraldofMedicineVol.27 No.10October2008
表 1结果表明:与对照组比较 ,豨莶草提取物浓度为
50 ～ 200 μg· mL-1时 , 对成纤维细胞增殖活性显著
(P<0.05)。
　　表 1　豨莶草甲醇提取物对 FB细胞增殖的影响(n=6)
　 x±s
浓度 /
(μg· mL-1) A值
浓度 /
(μg· mL-1) A值
0.0 0.237±0.014 50.0 0.310±0.017＊1
0.1 0.253±0.021 100.0 0.396±0.021＊1
1.0 0.271±0.011 200.0 0.434±0.015＊1
　　与 0 μg· mL-1比较 , ＊1P<0.05。
2.2　豨莶草对大鼠皮肤创伤愈合的影响　
2.2.1　对创面再上皮化的影响　空白对照组大鼠完
成创面上皮化时间(27.21±1.72)d,明显长于阳性对
照组(18.81±3.21)d,差异有极显著性(P<0.01)。
豨莶草高 、中剂量组与空白对照组比较 ,创面上皮化时
间明显缩短 , 分别为 (17.31 ±0.72)和 (21.18 ±
2.62)d。中剂量组与空白对照组比较 ,差异有显著性
(P<0.05);高剂量组与空白对照组比较 ,差异有极显
著性(P<0.01)。低剂量组创面愈合时间未见缩短 ,
影响不明显 。结果见表 2。
2.2.2　对创面伤口愈合率的影响　创伤后第 4, 8,
12 , 16, 20, 24天创面愈合百分率见表 2。从第 8天开
始 ,与空白对照组在各时间点的创面愈合率比较 ,阳性
对照组 、豨莶草高 、中剂量组在各时间点均高于空白对
照组(P<0.05)。豨莶草低剂量与空白对照组在各时
间点的创面愈合率比较差异无显著性(P>0.05)。
　　　　　　　　　　　　　　　　表 2　各组大鼠创面愈合率比较　 %, x±s
组别 愈合率第 4天 第 8天 第 12天 第 16天 第 20天 第 24天
上皮化时间 /
d
低剂量组 9.26±2.35 15.35±2.25 31.58±0.54 49.38±7.38 67.49±4.54 90.0±3.47 26.84±2.48
中剂量组 11.05±5.18 32.45±0.53＊1 46.28±2.85＊1 72.41±0.73＊1 96.38±5.46＊1 100.0±0.00＊1 21.18±2.62＊1
高剂量组 0.01±2.06 37.68±1.64＊1 54.28±1.81＊1 97.40±1.45＊1 100.00±0.00＊1 100.0±0.00＊1 17.31±0.72＊2
阳性对照组 12.48±3.51 35.16±1.38＊1 57.38±2.29＊1 95.38±2.50＊1 100.00±0.00＊1 100.0±0.00＊1 18.81±3.21＊2
空白对照组 10.35±0.51 17.05±1.54 32.15±1.30 51.18±3.71 71.28±1.12 87.0±3.12 27.21±1.72
　　与空白对照组同一时间比较 , ＊1P<0.05, ＊2P<0.01
2.2.3　创面组织学检查　创伤后第 16天创面皮肤病
理组织学检查(HE×200)结果显示 ,空白对照组创面
仍有渗出反应 ,可见以中性粒细胞为主的炎症细胞带 ,
基本无表皮形成 ,肉芽组织增生 ,少量胶原形成;阳性
对照组:显示创面已基本为表皮覆盖 ,表皮下大量新生
小血管及成纤维细胞增生 ,大量胶原形成;豨莶草中 、
高剂量组:显示创面已全部为表皮覆盖 ,并有正常角质
层形成 ,表皮下大量胶原形成 ,基本与表皮平行生长(说
明创面收缩度小),成纤维细胞生长活跃 ,纤维组织增
生。豨莶草低剂量组:病检结果与空白对照组相似。
3　讨论　
成纤维细胞是结缔组织中功能最活跃的细胞 ,在
损伤的刺激下 ,受损处的成纤维细胞能够分裂增生 ,产
生基质和胶原 ,并构成肉芽组织的主要成分 ,从而促进
创伤愈合 ,在创伤愈合中起着十分重要的作用 [ 8] 。本
实验通过 MTT比色方法观察豨莶草对体外培养的 FB
增殖的影响 ,结果表明浓度为 50 ～ 200 μg· mL-1对其
增殖显著 ,随剂量增加明显增强 。
豨莶草甲醇提取物 0.9%氯化钠溶液浓度高于
1.0g· mL-1外涂时 ,能加速创伤大鼠再上皮化 ,减少创
面收缩及形成有组织的胶原沉积。
本研究结果表明:豨莶草具有促伤口愈合作用 ,其
促修复作用可能与促进成纤维细胞增殖有关 。
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·1163·医药导报 2008年 10月第 27卷第 10期