全 文 ：瑞香狼毒提取液对大鼠肺成纤维细胞增殖的抑制与其细胞毒性作用!
杨 珺，王世岭，吴 坤，付桂英
·中医康复研究·
军事医学科学院附属医院药剂科，北京市 !#$
杨 珺!，女，!$%& 年生，山西省太原市人，汉族，’( 年军事医学科学
院毕业，硕士，主管药师，主要从事临床及中药药理学的研究。
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中图分类号：56&# 文献标识码：7 文章编号：!&%!86$’&（’6）#!8!#$8#
收稿日期9’68!8& 修回日期9’68’8!$ :’6 ; <=> ; ?@A
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G*UE0UK+NFN *- E+FNJ +-L F1C E0KC *N C-1+-4CL W*F1 F1C *-4EC+NC 0G F1C L0NC
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杨珺，王世岭，吴坤，付桂英3瑞香狼毒提取液对大鼠肺成纤维细胞增殖的抑制与
其细胞毒性作用O%P3中国临床康复，BCCD’FGHIJKIHFLMI OQQQ3R$-7S537:
目的：观察大鼠原代培养的肺成纤维细胞给予不同浓度的瑞香狼毒提
取液后，肺成纤维细胞增殖与剂量增加的效应及其对细胞产生的毒性
作用。
方法：实验于 ’#8!’ ; ’(8# 在军事医学科学院附属医院药剂科临
床药理室完成。选取纯系 X*NF+E 雌性大白鼠 ! 只，瑞香狼毒由中国人
民解放军第 #% 医院药剂科中药房提供。经过传代 6 代以后的肺成纤
维细胞大部分呈梭形，可以用于实验，# 个实验各自独立。!肺成纤维
细胞增殖检测与分组：大鼠肺成纤维细胞在正规生长培养基中传代培
养，(Y 1 后处于对数生长期，可进行增殖试验。随机分为 ! 个空白对照
组和 & 个实验组。空白对照组加入空白 BO[O，实验组分别加入浓度为
6，’6，!’6，&’26，#!2’6，!62&’6 /, ; @的瑞香狼毒提取液。应用噻唑蓝
比色法观察瑞香狼毒提取液对细胞增殖的影响。乳酸脱氢酶活性测
定与分组：随机分为 ! 个空白对照组和 6 个实验组。空白对照组加入空
白 BO[O，实验组分别加入浓度为 !’6，&’26，#!2’6，!62&’6，%2Y!# /, ; @
的瑞香狼毒提取液。全自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶活性值来观察
其细胞毒性。#细胞形态学观察与分组：随机分为 ! 个空白对照组和 &
个实验组。空白对照组加入空白 BO[O，实验组分别加入浓度为 6，
’6，!’6，&’26，#!2’6，!62&’6 /, ; @ 的瑞香狼毒提取液，显微镜下观察细
胞形态学变化。
结果：实验纳入 ! 只大鼠无脱落。!瑞香狼毒提取液对肺成纤维细胞
增殖的影响：浓度为 6，’6，!’6 /, ; @ 的瑞香狼毒提取液组吸光度值
明显低于空白对照组 :2!(^2#，2$%^2#，2!%’^2’$，2’Y6
^2!!，! _ 2!A；浓度为 &’26，#!2’6，!62&’6/, ; @ 的瑞香狼毒提取液组
吸光度值亦低于空白对照组 （2’!%^2#，2’!&^2!，2!$$^26，
2’Y6^2!!，! _ 26）。瑞香狼毒提取液对细胞的毒性作用：浓度为
!62&’6，%2Y!# /, ; @ 的瑞香狼毒提取液组乳酸脱氢酶吸光度值与空白
对照组比较，均无显著性差异（’Y2$!^2YY，’&2’%^2#!，’62$!^2#$，!
‘ 26），说明瑞香狼毒提取液在浓度为 !62&’6，%2Y!# /, ; @范围内对细
胞无毒性作用；而浓度为 !’6，&’26，#!2’6 /, ; @ 的瑞香狼毒提取液其乳
酸脱氢酶吸光度值均显著高于空白对照组:! _ 26A，且随着浓度的增
加，毒性显著增强。#瑞香狼毒提取液对肺成纤维细胞形态学的影响：
细胞传代至第 6 代以后，所得细胞已经都是梭形呈放射状的成纤维细
胞。用药前伸展良好，折光性较弱，有方向性；而加入瑞香狼毒提取液后
肺成纤维细胞数目显著减少，形状不规则，突起变短，细胞排列混乱，细
胞内代谢产物增多。
结论：瑞香狼毒提取液对大鼠原代培养的肺成纤维细胞生长增殖有较
强的抑制作用，随着给药剂量的增加，对细胞增殖抑制作用增强，呈剂
量依赖性抑制。同时在高浓度范围内瑞香狼毒提取液对细胞具有一定
的毒性作用。
主题词：细胞分裂；瑞香科；狼毒大戟；毒性试验；中药疗法；成纤维细
胞；肺
G 引言
瑞香狼毒是毒属植物瑞香科瑞香狼毒的根，有逐
水祛痰、散结杀虫之功效，为常用中药。近年发现狼毒
提取物对肿瘤细胞的异常增殖有较强的抑制活性，此
外还有抗菌和抗病毒作用，是一个理想的天然药物开
发品种。肺纤维化的主要病理特点是早期的弥漫性肺
中国临床康复 第 F卷第 HI期 ’68Y8’!出版
.#)%/0/ 1$’2%+3 $- .3)%)*+3 4/#+5)3)6+6)$%7 8’&’06 9: 9;;< =$3> ? @$>A: IHF
瑞香狼毒提取液对大鼠肺成纤维细胞增殖的抑制与其
细胞毒性作用
杨 珺，等!##$ %&’%()*+& ,$ +%(%-’. / 0!!!#$%&’(&)* ’(+,,-./-,01234&)*
泡炎和后期大量成纤维细胞的病理性增殖及基质胶
原进行性积聚并取代正常的肺组织结构。
! 材料和方法
设计：以大鼠原代培养的肺成纤维细胞为观察对
象，随机区组设计。
单位：军事医学科学院附属医院药剂科。
材料：实验于 +..1(%+ / +..-(.1 在军事医学科学
院附属医院药剂科临床药理室完成。选取纯系 234567
雌性大白鼠 %. 只（由军事医学科学院动物中心提供，
合格证号：医动字第 .%(+.+1 号），清洁级，体质量
%8.9+%. :。瑞香狼毒（中国人民解放军第 1.’ 医院药
剂科中药房提供）；噻唑蓝比色溶液（) : / ;，美国 #3:<6
公司）；=>?>、胰蛋白酶（美国 @3ABC 公司）；胎牛血清
（天津血清厂）；=>#D（美国进口分装）；正规生长培养
基：=>?> 培养液与胎牛血清 *：% 混合，再加青霉素
和链霉素使其终浓度均为 %.. E / <;；消化液：胰蛋白
酶和乙二胺四乙酸按 .!+)F和 .!.+F的量加入磷酸盐
缓冲液中溶解，用 .!++ !< 微孔滤膜过滤除菌，-G保
存；磷酸盐缓冲液：氯化钠 8 :，氯化钾 .!+ :，磷酸氢二
钠 1!& :，磷酸二氢钾 .!+- :，双蒸水 8.. <;，用 %
% ... <;。
设计、实施、评估者：实验设计为第一、二作者，干
预实施为全部作者，由第一作者进行评估。均经过系
统培训，未使用盲法评估。
方法：中草药的提取：瑞香狼毒生药 ).. :，体积
分数为 .!&的乙醇冷浸 +- K，浓缩至干，密封于灭菌安
瓿备用。
大鼠肺成纤维细胞的原代培养：取博莱霉素气管
穿刺处理后 1 周的大鼠，用 +. : / ; 异戊巴比妥钠按
*. <: / L: 腹腔注射麻醉动物，分离肺组织，置于无菌
培养皿中，去除支气管和血管，用无菌磷酸盐缓冲液
冲洗数次。在培养皿中将肺组织剪碎成小于 % <<1的
碎块，用 =>?> 培养液清洗，用少量正规生长培养基
悬浮组织碎块，将组织块悬液转移至 %.. <; 玻璃培
养瓶中，小心移走多余的培养液，使剩下的培养液刚
好能浸润组织块，并保证组织块能充分接触瓶壁，培
养瓶置于 1’ G含体积分数为 .!.) 的 ,D+ 培养箱中，
更换培养基 %9+次 /周。%周后可见组织块周围已经有
少量细胞游移出来，1 周后可见大量细胞移出并已接
近融合。用体积分数为 .!.+) 胰酶和 .!..) 乙二胺四
乙酸的消化液消化传代，经过 ) 代以后绝大部分细胞
为梭形的成纤维细胞，可以用于实验M%N+O。
肺成纤维细胞增殖检测与分组：大鼠肺成纤维细
胞在正规生长培养基中传代培养，-8 K 后处于对数生
长期，可进行增殖试验。去掉培养液，用磷酸盐缓冲液
清洗细胞表面，加消化液消化 % <3P，吸走消化液，加
新鲜的正规生长培养基终止消化，吹打细胞使之脱落，
收集细胞悬液，1 ... 7 /<3P，离心 ) <3P，去掉上清，以
正规生长培养基重新悬浮细胞并计数板下计数，调整浓
度为 )Q%.- /<;。以每孔 +.. !;，即 .!)Q%.-个细胞 /孔接
种于 *& 孔细胞培养板中，1’ G体积分数为 .!.) 的
,D+培养箱中培养 +- K，使细胞贴壁生长。去掉培养
液，换不含血清的 =>?> 培养液 +.. !;，将上述细胞
随机分为 %个空白对照组和 &个实验组。空白对照组
加入空白 =>?>，实验组分别加入浓度为 )..，+).，
%+)，&+!)，1%!+)，%)!&+) <: / ; 的瑞香狼毒提取液，1’ G
体积分数为 .!.)的 ,D+培养箱中培养 +- K。每孔吸弃
上清液 %. !;，向每孔加入噻唑蓝比色液 %. !;，继续
培养 - K，吸走含噻唑蓝的培养液，向每孔加入 =>#D
+.. !;，轻轻振摇培养板使蓝紫色结晶物充分溶解，
在波长 )’. P<的自动酶联免疫分析仪上比色。
乳酸脱氢酶活性测定与分组：以每孔 ).. !;，即
+!)Q%.-个细胞 /孔接种于 +- 孔细胞培养板中，1’ G体
积分数为 .!.)的 ,D+培养箱中培养 ’ R，1 R换液 %次。
去掉培养液，换不含血清的 =>?>培养液 +.. !;，将
上述细胞随机分为 %个空白对照组和 )个实验组。空
白对照组加入空白 =>?>，实验组分别加入浓度为
%+)，&+!)，1%!+)，%)!&+)，’!8%1 <: / ; 的瑞香狼毒提取
液，1’ G体积分数为 .!.) 的 ,D+培养箱中培养 +- K，
取上清液，用全自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶活
性值。
细胞形态学观察与分组：以每孔 ).. !;，即 +!)
Q%.- 个细胞 /孔接种于 +- 孔细胞培养板中，1’ G体
积分数为 .!.) 的 ,D+培养箱中培养 +- K，使细胞贴
壁生长。去掉培养液，换不含血清的 =>?> 培养液
).. !;，将上述细胞随机分为 % 个空白对照组和 & 个
实验组。空白对照组加入空白 =>?>，实验组分别加
入浓度为 )..，+).，%+)，&+!)，1%!+)，%)!&+) <: / ; 的瑞
香狼毒提取液，1’ G体积分数为 .!.)的 ,D+培养箱中
培养 +- K，于显微镜下观察，拍照。
主要观察指标：瑞香狼毒提取液对肺成纤维细
胞增殖的影响。#瑞香狼毒提取液对细胞的毒性作用。
$瑞香狼毒提取液对肺成纤维细胞形态学的影响。
统计学分析：由第一作者使用 >CB7I,6H D73:3P 软
件对实验数据进行统计分析，结果以 561 表示，组间行
7检验，每个实验重复 1次以检验结果的可靠性。
结果
+!% 实验动物数量分析 实验纳入 %. 只大鼠，全部
进入结果分析，中途无脱落。
+!+ 统计推断
+!+!% 瑞香狼毒提取液对肺成纤维细胞增殖的影响
噻唑蓝比色法结果显示，各实验浓度（)..，+).，%+)，
&+!)，1%!+)，%)!&+) <: / ;）的瑞香狼毒提取液的吸光度
!#
安徽中医学院第一附属医院呼吸内科，安徽省合肥市 !##$
王 胜!，男，$%&# 年生，安徽省舒城县人，汉族，$%%% 年蚌埠医学院毕
业，硕士’主治医师，主要从事呼吸系统疾病的诊治研究。
()*+$!!&,$-./01
中图分类号：23- 文献标识码：4 文章编号：$-&$53%!-（!##3）$5#$6$5#
收稿日期：!##35#$5!# 修回日期：!##35#35!# 7$!89:8;<=
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益肺健脾中药改善慢性阻塞性肺疾病患者肺功能及营养状况!
王 胜，季红燕，张念志，李泽庚
值 分 别 为 #.$#6 b#.##，#.#%& b#.##，#.$&! b#.#!%，
#.!$&b#.##，#.!$-b#.#$#，#.$%%b#.##3，与空白对照组
#.!W3b#.#$$ 比较，前 组均存在非常显著性差异（-
Z #.#$），后 组均存在明显差异（- Z #.#3）。说明瑞香
狼毒提取液对大鼠原代培养的肺成纤维细胞生长增殖
有较强的抑制作用，随着给药剂量的增加，对细胞增殖
抑制作用增强，呈剂量依赖性抑制。经 H0/B@MAK UBGNGD
软件分析细胞半数抑制浓度为 $-! 1N 8 c。
!.!.! 瑞香狼毒提取液对细胞的毒性作用 细胞中乳
酸脱氢酶活性测定显示，浓度为 $3.-!3，&.W$ 1N 8 c
的瑞香狼毒提取液其乳酸脱氢酶吸光度值分别为
!W.%$b#.WW，!-.!&b#.$，与空白对照组 !3.%$b#.% 均
无显著性差异7- d #.#3=。说明瑞香狼毒提取液在浓度
为 $3.-!3，&.W$ 1N 8 c 范围内对细胞无毒性作用，而
浓度为 $!3，-!.3，$.!3 1N 8 c 的瑞香狼毒提取液其乳
酸脱氢酶吸光度值均显著高于空白对照组7- Z #.#3=，
且随着浓度的增加，毒性显著增强，提示在高浓度范围
内瑞香狼毒提取液对细胞具有一定的毒性作用。
!.!. 瑞香狼毒提取液对肺成纤维细胞形态学的影
响 细胞形态学观察结果显示，细胞传代至第 3 代以
后，所得细胞已经都是梭形呈放射状的成纤维细胞。
用药前伸展良好，折光性较弱，有方向性；而加入瑞
香狼毒提取液后肺成纤维细胞数目显著减少，形状
不规则，突起变短，细胞排列混乱，细胞内代谢产物
增多。
B 讨论
肺纤维化的主要病理特点是早期的弥漫性肺泡炎
和后期大量成纤维细胞的病理性增生及基质胶原进行
性积聚并取代正常的肺组织结构。许多炎性递质及细
胞因子均可刺激肺成纤维细胞、成肌细胞及上皮细
胞等多种细胞过度增生，基质胶原增多，引起肺纤维
化e’6f。因此，如何抑制成纤维细胞等的异常增殖是治疗
的关键。肺成纤维细胞在肺纤维化过程中是一个十分
重要的细胞，在肺纤维化实验中倍受关注。本实验试图
从抑制成纤维细胞的增殖进而减少基质蛋白的沉积来
达到治疗肺纤维化的目的，为此选择了肺成纤维细胞
作为模型细胞。
瑞香狼毒对对大鼠肺成纤维细胞有明显抑制作
用，这可能与其抑制细胞 >94合成的作用有关；另外，
由于瑞香狼毒还有较强的抗菌活性，对于肺纤维化早
期的炎症可能也有一定的治疗作用，有待进一步观察。
C 参考文献
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中国临床康复 第 3卷第 45期 !##35#W5!$出版
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