全 文 ：· 58·(总 ) 广西中医药 2007年 10月第 30卷第 5期
HPLC法测定山绿茶不同炮制品中
绿原酸和芦丁的含量
陈 勇 谢 臻 刘 婧 李 立 潘丽娜 陆春燕
广西中医学院 530001 南宁市明秀东路 179号
摘 要 目的:建立山绿茶中绿原酸和芦丁的含量测定方法 , 选出山绿茶的最佳炮制工艺 。方法:采用
HPLC法测定山绿茶不同炮制品中绿原酸和芦丁的含量 。采用 Hipersil ODS C18柱(250mm×4.6mm ,5μm),流动相
为乙腈-0.1%磷酸溶液 (9:91～ 20:80), 检测波长为 340nm , 进样量 10μl。结果:绿原酸进样量在 0.1032 ～
0.6192μg范围内有良好的线性关系 (r=0.9998), 平均回收率98.94%, RSD=2.60%(n=6);芦丁进样量在
0.2004 ～ 1.2024μg范围内有良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率 102.31%, RSD=2.18%(n=6)。结论:该
法简便 、准确 、专属性强 ,可作为检测山绿茶中绿原酸和芦丁含量的方法。
关键词 山绿茶;绿原酸;芦丁;HPLC
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1003-0719(2007)05-0058-03
基金项目:广西科技厅科技攻关项目(桂科攻 032202424)
山绿茶为冬青科植物海南冬
青 Ilex hainanensis Merr.的叶经加
工炮制而成 , 具有清热解毒 , 消肿
止痛 , 活血通脉的功效。主要用于
降血压 、降血脂 、降胆固醇及冠心
病 、脑血管意外所致的偏瘫 , 以及
风热感冒 、肺热咳嗽 、咽喉水肿 、扁
桃体炎 、痢疾等病症[ 1]。山绿茶为
广西少数民族民间中草药 , 使用历
史悠久 , 目前主要作为生产降压制
剂(如山绿茶降压片 、双山冲剂等)
的原料药材使用。
目前对山绿茶的研究主要集
中在化学成分的提取分离与鉴定 、
药理研究等方面 [ 2 , 3]。本文考察了
多种炮制方法和工艺对山绿茶中
绿原酸和芦丁的影响:除采用清炒
和不加热直接阴干的炮制方法外 ,
还采用在烘箱中用 60℃、 70℃和
80℃烘制 1h 、1.5h和 2h , 取出放凉
的炮制方法。采用 HPLC法对山绿
茶中主要成分绿原酸和芦丁的含
量进行测定 , 选出山绿茶的最佳炮
制工艺为清炒 。现将结果报道如
下 。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent1100高效液相
色谱仪 (美国安捷伦科技有限公
司);Hipersil ODS C18柱(大连依利
特分析仪器有限公司 , 5μm , 4.6×
250mm);BP211D电子分析天平(德
国赛多利斯);AE100S电子分析天
平(梅特勒-托利多仪器上海有限
公司);Millipore simplicity -185超
纯水器 (美 国密理博公司);
SB2200-T超声波清洗器 (上海必
能信公司)。
1.2 试药 山绿茶药材采自广西
上林县;芦丁对照品 、绿原酸对照
品 (中国药品生物制品检定所提
供 , 批号 0080-9705 , 供含量测定
用);水为超纯水;甲醇 、乙腈为色
谱纯;其它试剂均为分析纯 。
2 实验方法与结果
2.1 供试品溶液的制备 取药材
粗粉 0.6g , 精密称定 , 精密加入
50%乙醇 25ml , 称定重量 , 超声处
理 40min , 放冷 , 再称定重量 , 用
50%乙醇补足减失的重量 , 摇匀 ,
于 0.46μm滤膜滤过 ,即得 。
2.2 对照品溶液的制备 精密称
取绿原酸对照品 2.58mg , 置 25ml
量瓶中 , 加 50%乙醇到刻度 , 得浓
度为 0.1032mg/ml的绿原酸对照
品溶液 。精密称取芦丁对照品
5.01mg ,置 25ml量瓶中 , 加 50%乙
醇到刻度 , 得浓度为 0.2004mg/ml
的芦丁对照品溶液 。
2.3 色谱条件 色谱柱:Hipersil
ODS C18柱(5μm , 4.6×250mm);流
动相:乙腈-0.1%磷酸溶液 (9:
91～ 20:80);检测波长:340nm;进
样量:10μl。采用梯度洗脱的方法 ,
在一个测定周期内同时测定山绿
茶中的绿原酸和芦丁的含量 , 以乙
腈为流动相 A , 以 0.1%磷酸溶液
为流动相 B , 按表 1的规定进行梯
度洗脱 。绿原酸在 11min左右出
峰 , 芦丁在 27min左右出峰 , 两者
均与相邻组分峰分离度 R>1.5 ,达
306
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2.4 线性关系考察 分别吸取上
述绿原酸对照品溶液 (0.1032mg/
ml)和芦丁对照品溶液(0.2004mg/
ml)1、2、3、4 、5 、6ml置 10ml量瓶中 ,
分别加 50%乙醇至刻度 ,各取 10μl
注入高效液相色谱议中测定 , 以进
样量 C(μg)为横坐标 , 峰面积 A为
纵坐标绘制标准曲线 , 计算回归方
程 。 绿 原酸 标准 曲线 :A =
2337.35C-7.68 , r=0.9998 ,结果表
明 绿 原 酸 对 照 品 进 样 量 在
0.1032 ～ 0.6192μg 之间与峰面积
值呈良好的线性关系;芦丁标准曲
线 A=1402.45C-2.95 , r=0.9999 ,
结果表明芦丁对照品进样量在
0.2004 ～ 1.2024μg 之间与峰面积
值呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 取供试品溶液
10μl ,连续进样 6次 ,分别测定其峰
面积 。 绿原酸平均 峰面积为
1317.6 , RSD为 0.71%(n=6);芦
丁平均峰面积为 438.1 , RSD为
0.57%(n=6), 结果表明仪器精密
度符合要求。
2.6 稳定性试验 取供试品溶液
每隔 4h分别进样 10μl ,连续进样 6
次 ,分别测定其峰面积 。在 24h内绿
原酸平均峰面积为 1319.1 , RSD为
0.83%(n=6);芦丁平均峰面积为
439.3 , RSD为 0.66%(n=6), 结果
表明供试品溶液在 24h内稳定。
2.7 重复性实验 取同一批供试
品 ,精密称取约 0.6g ,共 6份 , 按供
试品溶液制备方法制备 , 测定其含
量 。绿原酸平均含量为 2.455mg/g ,
RSD为 0.75%(n=6);芦丁平均含
量为 1.294 mg/g , RSD为 1.38%
(n=6),结果表明重复性良好。
2.8 加样回收率试验 精密称取
已知含量的供试品适量共 6份 , 分
别精密加入一定量的绿原酸对照
品 (0.1032mg/ml)和芦丁对照品
(0.2004mg/ml)溶液 ,按供试品溶液
的制备方法制备 ,进样 10μl ,记录色
谱图 ,计算回收率。结果见表 1～ 2。
表 1 流动相比例
到分离要求 , 且峰型窄无拖尾 , 能
够完全满足色谱定量要求。色谱图
见图 1～ 4。
时间(min) 流动相A(%) 流动相B(%)
0 ～ 30 9 ～ 20 91 ～ 80
30 ～ 50 20 80
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· 60·(总 ) 广西中医药 2007年 10月第 30卷第 5期
表 1 绿原酸加样回收率测定结果
表 2 芦丁加样回收率测定结果
编号 原有量(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%) RSD(%)
1 0.2509 0.3006 0.5515 100.01
2 0.2472 0.3006 0.5460 99.40
3 0.2564 0.3006 0.5645 102.50 102.31 2.18
4 0.2562 0.3006 0.5649 102.69
5 0.2534 0.3006 0.5675 104.49
6 0.2564 0.3006 0.5714 104.79
表 3 山绿茶不同炮制品含量 (n=4)
2.9 样品测定 分别精密称取山
绿茶不同炮制品约 0.6g , 按供试品
溶液制备方法制备 , 吸取供试品溶
液及对照品溶液各 10μl , 进样 , 记
录色谱图 , 以外标一点法计算各样
品中芦丁与绿原酸的含量。结果见
表 3。
3 讨 论
采用高效液相色谱法测定山
绿茶不同炮制品中绿原酸和芦丁
的含量 ,具有灵敏 、快速 、简便的优
点 , 可作为山绿茶不同炮制品的质
量控制方法。
山绿茶不同炮制品中绿原酸
及芦丁含量测定结果初步表明:以
清炒药材含量最高 , 其次分别为传
统炮制药材 、阴干药材 , 60℃、70℃
和 80℃烘制药材中绿原酸和芦丁
的含量均最低 。清炒药材含量较高
可能与炒时温度较高 , 将药材中的
酶破坏掉 , 所以绿原酸和芦丁没有
被酶分解 , 因而含量较高。阴干药
材中存在酶 , 所以绿原酸和芦丁被
酶部分分解 , 因而含量较低。而烘
制的药材可能由于温度较低 , 药材
中的酶没有被破坏 , 反而在这个温
度下产生最高的酶活性 , 所以烘制
的药材绿原酸和芦丁的含量最
低。因此认为山绿茶的炮制方法以
清炒为佳 。
通过试验测定 , 结果表明山绿
茶的烘制工艺设计还存在问题 , 在
设计上还可提高烘制的温度 , 如
100℃、120℃、150℃,甚至可以达到
200℃, 以达到快速杀酶的作用 , 这
些有待以后的试验进一步研究与
探讨 。
参考文献
[ 1] 广西壮族自治区卫生厅编 .广西中
药材标准 [S] .南宁:广西科学技术
出版社 , 1992:20 , 137-138.
[ 2] 闵知大 , 覃开活 .海南冬青中的一个
新三萜甙 [ J] .药学学报 , 1984 , 19
(9):691-696.
[ 3] 陈一等 .山绿茶的降压作用 [ J] .中
草药 , 1983 , 14(4):27-30.
(2007-09-20收稿/编辑 陈明伟)
编号 原有量(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%) RSD(%)
1 0.05924 0.0516 0.1088 96.05
2 0.05926 0.0516 0.1093 96.98
3 0.05838 0.0516 0.1114 102.75 98.94 2.60
4 0.05926 0.0516 0.1112 100.66
5 0.05857 0.0516 0.1101 99.86
6 0.05926 0.0516 0.1095 97.36
炮制品 绿原酸平均含量(mg/g) 芦丁平均含量(mg/g)
传统工艺炮制 0.937 1.060
80℃烘制2h 0.103 0.251
80℃烘制1.5h 0.111 0.254
80℃烘制1h 0.106 0.261
70℃烘制2h 0.098 0.279
70℃烘制1.5h 0.069 0.170
70℃烘制1h 0.059 0.212
60℃烘制2h 0.035 0.217
60℃烘制1.5h 0.041 0.329
60℃烘制1h 0.060 0.442
阴干药材 0.237 0.919
清炒药材 2.244 1.365
308
征订启事
《辽宁中医杂志》为月刊 , ISSN1000-
1719, CN21-1128/R。大 16开本 ,内文 144
页 ,每册定价 6.00元 ,全年 72.00元。国内
邮发代号:8-87;国外代号:M530。《辽宁
中医药大学学报》从 2008年开始调整为月
刊 , 大 16开本 , 112页, 每册定价 5.00元,
全年 60.00元。 ISSN1673-842X, CN21-
1543/R,国内邮发代号:8-179;国外代号:
M4817。《中华中医药学刊》(原:中医药学
刊)为月刊 , ISSN1673-7717 , CN21-1546/
R, 国内邮发代号:8-182;国外代号:
M1163。大 16开本 , 224页 ,每册定价 10.00
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