全 文 ：ＡＣＴＡ　ＥＤＵＬＩＳ　ＦＵＮＧＩ２０１２．１９（２）：８～１４
Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：Ａｐｒｉｌ　９，２０１２；　Ａｃｃｅｐｔｅｄ：Ａｐｒｉｌ　２６，２０１２
Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ（Ｎｏ．３０８００７７４）
＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ．Ｔｅｌ：＋８６－２０－８５２８０２６６　Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｕｘｕｅｆｅｎｇ＠ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
Ａ　Ｎｅｗ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌ　ｆｏｒ　ＥｘｔｒａｃｔｉｎｇＤＮＡ　ｆｒｏｍ　Ａｇａｒｉｃｕｓ
ｂｉｓｐｏｒｕｓ　Ｆｒｕｉｔ　Ｂｏｄｉｅｓ　ｗｉｔｈｏｕｔ　Ｔｈｅｒｍａｌ　Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ
ＪＩ　Ｈｏｎｇｃｈａｏ，ＷＡＮ　Ｙａｎｊｕａｎ，ＭＯ　Ｍｅｉｈｕａ，ＸＵ　Ｘｕｅｆｅｎｇ＊
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５１０６４２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ　ｎｅｗ，ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｒａｐｉｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｏｂｔａｉｎｉｎｇ　ＤＮＡ　ｆｒｏｍＡｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ　ｉｓ　ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ
ａｎｄ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｗｉｄｅｌｙ　ｕｓｅｄ　ＣＴＡＢ　ａｎｄ　ＳＤＳ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　ｔｅｒｍｓ　ｏｆ　ｙｉｅｌｄ，ＤＮＡ　ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ，
ａｎｄ　ｄｕｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ．Ｔｏｔａｌ　ＤＮＡ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｗａｓ　ｅｓｔｉｍａｔｅｄ　ｂｙ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ａｎｄ
ｂｙ　ＩＴＳ，ＩＳＳＲ　ａｎｄ　ＲＡＰＤ　ａｎａｌｙｓｅｓ　ｕｓｉｎｇ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．Ｏｕｒ　ｄａｔａ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｎｅｗ　ｍｅｔｈｏｄ
ｒｅｎｄｅｒｓ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｙｉｅｌｄｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ＤＮＡ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ，ａｎｄ　ｉｓ　ｌｅｓｓ　ｔｉｍｅ－ｃｏｎｓｕｍｉｎｇ　ｔｈａｎ　ｅｘｉｓｔｉｎｇ
ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ；ＤＮＡ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ；ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ
　　Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ， ｔｈｅ　ｗｈｉｔｅ　ｂｕｔｔｏｎ
ｍｕｓｈｒｏｏｍ，ｃｏｎｔａｉｎｓ　ｈｉｇｈ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｄｉｅｔａｒｙ　ｆｉｂｅｒ
ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｖｉｔａｍｉｎｓ　Ｃ，Ｄ　ａｎｄ
Ｂ１２，ｆｏｌａｔｅｓ　ａｎｄ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ，ｔｈａｔ　ａｒｅ　ｇｅｎｅｒａｌｙ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　 ａｓ　 ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ　 ｉｎ　 ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ
ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａｎｄ　ｄｉａｂｅｔｅｓ［１－３］． Ａ．
ｂｉｓｐｏｒｕｓ　ｉｓ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ，ａｎｄ　ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ
ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｕｎｄｅｒｔａｋｅｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｍｕｓｈｒｏｏｍ．Ｔｈｉｓ
ｒｅｑｕｉｒｅｓ　ａ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ
ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ａｎｄ， ａｌｔｈｏｕｇｈ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｒｅ　ａｖａｉｌａｂｌｅ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ
ｏｆ　ＤＮＡ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｉｓ　ｇｅｎｅｒａｌｙ　ｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙ，
ｔｈｅｓｅ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ　ａｒｅ　ｔｉｍｅ　ｃｏｎｓｕｍｉｎｇ　ａｎｄ
ｔｅｄｉｏｕｓ． Ｅｘｔｅｎｄｅｄ　 ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　 ｏｆ　 ｆｕｎｇａｌ
ｍａｔｅｒｉａｌ　ｉｎ　ｈｏｔ　ｗａｔｅｒ （６５ ℃）［４，５］ ｍａｋｅｓ　ａ
ｍｅｔｈｏｄ　ｕｎｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ａｎａｌｙｚｉｎｇ　ｌａｒｇｅ　ｎｕｍｂｅｒ
ｏｆ　ｓａｍｐｌｅｓ　ａｎｄ，ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｔｏｘｉｃ　ｃｈｅｍｉｃａｌｓ
ｓｕｃｈ　ａｓ　ｐｈｅｎｏｌ　ａｎｄ　ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　ａｒｅ　ｒｅｑｕｉｒｅｄ．
Ｌｏｓｓ　ａｎｄ　ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｃａｎ　ｅａｓｉｌｙ
ｏｃｃｕｒ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅｓｅ　ｓｔａｇｅｓ，ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ
ｕｎｄｅｓｉｒａｂｌｅ　ｗｈｅｎ　ａｔｔｅｍｐｔｉｎｇ　ｔｏ　ｉｓｏｌａｔｅ　ＤＮＡ
ｆｒｏｍ　ｓｍａｌ　ａｍｏｕｎｔｓ　ｏｆ　ｓｔａｒｔｉｎｇ　ｍａｔｅｒｉａｌ．
Ａ　ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ
ｌｏｗ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ　ｉｓ
ｎｅｃｅｓｓａｒｙ　ｆｏｒ　ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ． Ｗｈｅｎ
ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ＤＮＡ　ｆｒｏｍ　ｍｕｓｈｒｏｏｍ　ｔｉｓｓｕｅ （ｆｒｕｉｔ
ｂｏｄｉｅｓ，ｍｙｃｅｌｉｕｍ），ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｃｅｌ　ｗａｌｓ　ｉｓ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｔｏ　ｅｎｓｕｒｅ　ａ　ｈｉｇｈ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ
ｒａｔｅ．Ｓｅｖｅｒａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｅｍｐｌｏｙｅｄ　ｆｏｒ
ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ　ｃｅｌ　ｗａｌｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ　ｓｈａｋｉｎｇ
ｗｉｔｈ　ｇｌａｓｓ　ｂｅａｄｓ［６］，ｇｒｉｎｄｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ａ　ｍｏｒｔａｒ　ａｎｄ
ｐｅｓｔｌｅ， ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ　 ｈｏｍｏｇｅｎｉｚａｔｉｏｎ［７，８］，
ｓｏｎｉｃａｔｉｏｎ，ｅｎｚｙｍｉｃ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ，ｔｈｅ　Ｆｒｅｎｃｈ
ｐｒｅｓｓ［９，１０］， ａｎｄ　ｍｉｃｒｏｗａｖｅ　ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ［５，１１］．
Ａｌｔｈｏｕｇｈ　ｓｈａｋｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｇｌａｓｓ　ｂｅａｄｓ　ｉｓ　ｗｉｄｅｌｙ
ｕｓｅｄ，ｉｔ　ｉｓ　ｎｏｔ　ｖｅｒｙ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｆｏｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ
ＤＮＡ　ｆｒｏｍ　ｍｕｓｈｒｏｏｍ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ．Ｆｒｅｅｚｉｎｇ
ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ　ｗｉｔｈ　ｌｉｑｕｉｄ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｉｓ　ｖｅｒｓａｔｉｌｅ　ｂｕｔ
ｌｅａｄｓ　ｔｏ　ｓｅｖｅｒｅ　ＤＮＡ　ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ｗｈｉｌｅ
ｅｎｚｙｍｉｃ　 ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　 ｉｓ　 ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　 ｃｏｓｔｌｙ．
Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｆｒｏｍ　ｆｕｎｇａｌ
ｍｙｃｅｌｉｕｍ　ｂｙ　ｉｎｃｕｂａｔｉｎｇ　ａｔ　６５ ℃ ｉｎ　ｂｕｆｆｅｒｓ
ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｅｉｔｈｅｒ　３％ ＳＤＳ　ｏｒ　２％ ＣＴＡＢ
ｒｅｑｕｉｒｅｓ　ｓｅｖｅｒａｌ　ｓｔｅｐｓ，ｔｏｘｉｃ　ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，ａｎｄ　ｉｓ
ｔｉｍｅ　ｃｏｎｓｕｍｉｎｇ．Ｓｉｎｃｅ　ｔｈｅｒｅ　ａｒｅ　ｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓ
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｌ　ｔｈｅ　ａｖａｉｌａｂｌｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ，ｗｅ
ｈａｖｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ａ　ｎｅｗ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ　ｆｏｒ　ｉｓｏｌａｔｉｎｇ
ＤＮＡ　ｆｒｏｍ　Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ，ａｎｄ
ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｉｔ　ｗｉｔｈ　ｏｔｈｅｒ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ　ｉｎ　ｔｅｒｍｓ　ｏｆ
ｃｏｓｔ，ｒａｐｉｄｉｔｙ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｏｆ
ｔｈｅ　ＤＮＡ　ｏｂｔａｉｎｅｄ．
Ｎｏ．２ ＪＩ　Ｈｏｎｇｃｈａｏ，ＷＡＮ　Ｙａｎｊｕａｎ，ＭＯ　Ｍｅｉｈｕａ，ｅｔ　ａｌ
１　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ａｎｄ　Ｍｅｔｈｏｄｓ
１．１Ｆｕｎｇａｌ　ｍａｔｅｒｉａｌ
　　Ｆｒｅｓｈ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ　ｏｆ　Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ
ｗｅｒｅ　ｐｕｒｃｈａｓｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｊｉａｎｇｎａｎ　Ｍａｒｋｅｔ，
Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，ｗａｓｈｅｄ　ｗｉｔｈ　ｓｔｅｒｉｌｅ　ｄｉｓｔｉｌｅｄ　ｗａｔｅｒ
ａｎｄ　ｓｔｏｒｅｄ　ａｔ－８０℃．
１．２Ｒｅａｇｅｎｔｓ
　　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｂｕｆｆｅｒ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ　ｏｆ　１００ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ，５０ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｎａ２ＥＤＴＡ　ａｎｄ　５００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＮａＣｌ，ａｄｊｕｓｔｅｄ　ｔｏ　ｐＨ　８．０．ＰＣＩ［ｐｈｅｎｏｌ∶
ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ∶ｉｓｏａｍｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ（２５∶２４∶１，ｖ／ｖ／
ｖ）］，７０％ｉｓｏｐｒｏｐａｎｏｌ，ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｅｔｈａｎｏｌ，ａｎｄ
ｓｏｄｉｕｍ　ａｃｅｔａｔｅ　ｗｅｒｅ　ｆｒｏｍ　Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｊｉｎｇｋｅ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ　Ｃｏ．Ｌｔｄ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，
Ｃｈｉｎａ．
１．３ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
　　Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ　ｔｉｓｓｕｅ（０．５ｇ）ｗａｓ
ｍｉｘｅｄ　ｗｉｔｈ　ｌｉｑｕｉｄ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ａｎｄ　ｇｒｏｕｎｄ　ｕｓｉｎｇ　ａ
ｍｏｒｔａｒ　ａｎｄ　ｐｅｓｔｌｅ．Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｂｕｆｆｅｒ（０．７ｍＬ，
７０ ℃）ｗａｓ　ａｄｄｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｉｘｔｕｒｅ　ｆｕｒｔｈｅｒ
ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈａｗｉｎｇ． Ｌｙｓａｔｅ　ｗａｓ
ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ　ｔｏ　ａ　２ｍＬ　ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ　ｔｕｂｅ，
ａｎ　ｅｑｕａｌ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　ＰＣＩ　ｗａｓ　ａｄｄｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ
ｍｉｘｔｕｒｅ　ｗａｓ　ｖｏｒｔｅｘｅｄ　ｆｏｒ　２ ｍｉｎ． Ａｆｔｅｒ
ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ（１２０００　ｇ，１０ｍｉｎ，ｒｏｏｍ　ｔｅｍｐ），
ｔｈｅ　ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ　ｗａｓ　ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ　ｔｏ　ａ　ｆｒｅｓｈ
ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ　ｔｕｂｅ，ａｎｄ　ｍｉｘｅｄ　ｇｅｎｔｌｙ　ｗｉｔｈ　１／１０ｔｈ
ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　３ｍｏｌ／Ｌ　ｓｏｄｉｕｍ　ａｃｅｔａｔｅ．Ａｎ　ｅｑｕａｌ
ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　ｉｓｏｐｒｏｐａｎｏｌ　ｗａｓ　ｔｈｅｎ　ａｄｄｅｄ　ａｎｄ，
ａｆｔｅｒ　ｍｉｘｉｎｇ，ｔｈｅ　ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ　ｗａｓ　ｋｅｐｔ　ａｔ
－２０℃ ｆｏｒ　３０ ｍｉｎ　ｂｅｆｏｒｅ　ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ　ａｓ
ａｂｏｖｅ．Ａｆｔｅｒ　ｒｅｍｏｖｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ，ｔｈｅ
ＤＮＡ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｗａｓ　ｗａｓｈｅｄ　ｔｗｉｃｅ　ｗｉｔｈ　７０％
ｅｔｈａｎｏｌ，ｄｒｉｅｄ　ａｔ　ｒｏｏｍ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ
ｉｎ　４００μＬ　ｓｔｅｒｉｌｅ　ｄｉｓｔｉｌｅｄ　ｗａｔｅｒ　ａｎｄ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ
５μＬ　ＲＮａｓｅ（Ｔａｋａｒａ，１０Ｕ／μＬ）ｆｏｒ　３０ｍｉｎ　ａｔ
３７℃．Ｓｏｄｉｕｍ　ａｃｅｔａｔｅ（１／１０ｔｈ　ｖｏｌｕｍｅ，３ｍｏｌ／Ｌ）
ａｎｄ　ｔｗｏ　ｖｏｌｕｍｅｓ　ｏｆ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｗｅｒｅ　ａｄｄｅｄ，
ｔｈｅ　ｍｉｘｔｕｒｅ　ｗａｓ　ａｌｏｗｅｄ　ｔｏ　ｓｔａｎｄ　ａｔ－８０℃ｆｏｒ
１０ｍｉｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄ　ＤＮＡ　ｗａｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ
ｂｙ　ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ　ａｓ　ａｂｏｖｅ．Ｔｈｅ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｓｔｅｐ
ｗａｓ　ｒｅｐｅａｔｅｄ，ａｆｔｅｒ　ｗｈｉｃｈ　ｔｈｅ　ＤＮＡ　ｗａｓ　ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ
ｉｎ　２０－５０μＬ　ｓｔｅｒｉｌｅ　ｄｉｓｔｉｌｅｄ　ｗａｔｅｒ　ａｎｄ　ｓｔｏｒｅｄ　ａｔ
－２０℃ ｕｎｔｉｌ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｕｓｅ．ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｕｓｉｎｇ
ｔｈｅ　ＣＴＡＢ　ａｎｄ　ＳＤＳ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ
ａｓ　ｒｅｐｏｒｔｅｄ　ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ　ｂｙ　ＮＥＵＨＡＵＳＥＲ
［１２］ａｎｄ
ＥＲＮＡＮＤＥＺ［１３］，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
１．４Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ＤＮＡ
　　Ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ＤＮＡ
ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ．Ａ２６０／２８０
ａｎｄ　Ａ２６０／２３０ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｒａｔｉｏｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ／
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＤＮＡ
ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｇｅｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｏｆ
２μＬ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｏｎ　１％ａｇａｒｏｓｅ　ｇｅｌｓ．
１．５Ｐｒｉｍｅｒｓ
Ｔａｂｌｅ１　Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｆｏｒ　ＲＡＰＤ，ＩＳＳＲ　ａｎｄ　ＩＴＳ　ａｎａｌｙｓｉｓ
表１　ＲＡＰＤ、ＩＳＳＲ和ＩＴＳ分析所用引物
Ｐｒｉｍｅｒ
引物
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ（５－３）
序列
Ｕ２０ ＡＣＡＧＣＣＣＣＣＡ
Ｕ１６ ＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡ
Ｍ１７ ＣＣＧＴＧＡＣＴＣＡ
ＩＳＳＲ０１ （ＣＡ）８ＧＴ
ＩＳＳＲ０２ （ＡＣ）８Ｃ
ＩＳＳＲ０３ （ＣＡ）８Ｔ
ＩＴＳ４ ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ
ＩＴＳ５ ＧＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＧＧ
１．６ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
　　Ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ
ＤＮＡ，ａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｕｉｔａｂｉｌｉｔｙ　ｆｏｒ　ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，
ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｕｓｉｎｇ　Ｉｎｔｅｒｎａｌ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ　Ｓｐａｃｅｒ
（ＩＴＳ），Ｒａｎｄｏｍ　Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ＤＮＡ
（ＲＡＰＤ）ａｎｄ　Ｉｎｔｅｒ－Ｓｉｍｐｌｅ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ｒｅｐｅａｔ
（ＩＳＳＲ）ｐｒｉｍｅｒｓ（Ｔａｂｌｅ　１）．
１．６．１ＩＴＳ　ａｎａｌｙｓｉｓ
　 　ＤＮＡ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｗａｓ　ａｓｓｅｓｓｅｄ　ｂｙ　ＰＣＲ　ｕｓｉｎｇ
ＩＴＳ［１４，１５］ｐｒｉｍｅｒｓ　ｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｍｉｘｔｕｒｅｓ（５０μＬ　ｔｏｔａｌ
ｖｏｌｕｍｅ）ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ　ｏｆ　２．５ＵＴａｑ　ＤＮＡ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ
（Ｔａｋａｒａ），５μＬ（１０×）ＰＣＲ　ｂｕｆｆｅｒ（ｗｉｔｈ　Ｍｇ
２＋），
４μＬ　ｄＮＴＰ　ｍｉｘｔｕｒｅ（０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ　ｅａｃｈ），０．５μＬ
ｅａｃｈ　ｏｆ　ｆｏｒｗａｒｄ　ａｎｄ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｐｒｉｍｅｒｓ（１０ｍｍｏｌ／Ｌ）
（Ｔａｂｌｅ１，ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ　ｂｙ　Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ），
ａｎｄ　５０ｎｇ　ＤＮＡ．Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ：
９４℃ｆｏｒ　３ｍｉｎ，３０ｃｙｃｌｅｓ　ｏｆ　４０ｓａｔ　９４℃，４０ｓ
ａｔ　５６℃，１ｍｉｎ　ａｔ　７２℃，ｆｏｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ａ　ｆｉｎａｌ
ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ　ａｔ　７２℃ｆｏｒ　１０ｍｉｎ．
９
ＡＣＴＡ　ＥＤＵＬＩＳ　ＦＵＮＧＩ　 Ｖｏｌ．１９
１．６．２ＲＡＰＤ　ａｎｄ　ＩＳＳＲ　ａｎａｌｙｓｉｓ
　　ＤＮＡ　ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｗａｓ　ａｌｓｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＰＣＲ　ｕｓｉｎｇ
ＲＡＰＤ　ａｎｄ　ＩＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｍｉｘｔｕｒｅｓ
（５０μＬ　ｔｏｔａｌ　ｖｏｌｕｍｅ）ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ　ｏｆ　１．２５ＵＴａｑ
ＤＮＡ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，５μＬ（１０×）ＰＣＲ　ｂｕｆｆｅｒ（ｗｉｔｈ
Ｍｇ２＋），４ μＬ　ｄＮＴＰ　ｍｉｘｔｕｒｅ （０．２５ ｍｍｏｌ／Ｌ
ｅａｃｈ），０．５μＬ　ｐｒｉｍｅｒ（１０ ｍｍｏｌ／Ｌ）（Ｔａｂｌｅ
１），ａｎｄ　１０ｎｇ　ＤＮＡ
［１６］．ＲＡＰＤ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ　ｏｆ：９４ ℃ ｆｏｒ　３ ｍｉｎ，
４０ｃｙｃｌｅｓ　ｏｆ　４０ｓａｔ　９４ ℃，１ ｍｉｎ　ａｔ　５０ ℃，
１ｍｉｎ　ａｔ　７２℃，ｆｏｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ａ　ｆｉｎａｌ　ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ　ａｔ
７２℃ｆｏｒ　５ｍｉｎ．ＩＳＳＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ　ｏｆ　９４℃ｆｏｒ　３ｍｉｎ，４２ｃｙｃｌｅｓ　ｏｆ　４０ｓ
ａｔ　９４℃，４０ｓａｔ　４５℃，２ ｍｉｎ　ａｔ　７２℃，
ｆｏｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ａ　ｆｉｎａｌ　ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ　ａｔ　７２ ℃ ｆｏｒ
１０ｍｉｎ．Ａｌｉｑｕｏｔｓ （５ μＬ）ｏｆ　ｅａｃｈ　ｒｅａｃｔｉｏｎ
ｍｉｘｔｕｒｅ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｏｎ　１．２％ （ｗ／ｖ）ａｇａｒｏｓｅ
ｇｅｌｓ　ｒｕｎ　ａｔ　３ｖ／ｃｍ　ｆｏｒ　４０ｍｉｎ　ａｎｄ　ｓｔａｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ
Ｇｏｌｄ　Ｖｉｅｗ．
１．７Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ
　　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｅｎｚｙｍｅｓ　ｗａｓ
ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ＤＮＡ　ｐｕｒｉｔｙ，ｑｕａｌｉｔｙ
ａｎｄ　ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ．Ｄｉｇｅｓｔｓ （２０μＬ　ｔｏｔａｌ　ｖｏｌｕｍｅ）
ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　１μｇ　ＤＮＡ，２μＬ（１０×）ｂｕｆｆｅｒ　ａｎｄ
１μＬ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ　ｗｅｒｅ　ｉｎｃｕｂａｔｅｄ　ａｔ
３７℃ｆｏｒ　４ｈ（ＥｃｏＲＩ，ＥｃｏＲＶ　ａｎｄ　ＫｐｎＩ）ｏｒ　ａｔ
３０℃ｆｏｒ　４ｈ（ＨｉｎｄＩＩＩ）．
２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ａｎｄ　Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ
２．１Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｎ　ＤＮＡ
ｙｉｅｌｄｓ　ａｎｄ　ｑｕａｌｉｔｙ
　 　Ｓｅｖｅｒａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｒｅ　ａｖａｉｌａｂｌｅ　ｔｏ　ｉｓｏｌａｔｅ
ＤＮＡ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｍｙｃｅｌｉａ　ｏｆ　ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ　ｆｕｎｇｉ　ｂｕｔ
ｎｏｔ　ａｌ　ａｒｅ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ＤＮＡ　ｆｒｏｍ
ｍｕｓｈｒｏｏｍ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ． Ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ
ｍｅｔｈｏｄ　ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ，ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｂｕｆｆｅｒ
ａｔ　７０ ℃ ｔｏ　ｔｈｅ　ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ
ｇｒｉｎｄｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｗｉｔｈ　ｌｉｑｕｉｄ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ
ｒｅｓｕｌｔｅｄ　ｉｎ　ａ　ｓｅｒｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈａｗｉｎｇ　ａｎｄ　ｆｒｅｅｚｉｎｇ
ｐｈａｓｅｓ．Ｃｅｌ　ｗａｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｕｓｈｒｏｏｍ　ｔｉｓｓｕｅ　ｗｅｒｅ
ｔｈｅｒｅｂｙ　ｄｉｓｒｕｐｔｅｄ　ｂｏｔｈ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ　ｅｆｆｅｃｔ
ｏｆ　ｇｒｉｎｄｉｎｇ　ａｎｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｒｅｐｅａｔｅｄ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｉｃｅ　ｃｒｙｓｔａｌｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ．Ｓｏｌｕｂｉｌｉｓｉｎｇ　ｔｈｅ
ｃｒｕｄｅ　ＤＮＡ　ｉｎ　ｄｉｓｔｉｌｅｄ　Ｈ２Ｏ　ｐｒｉｏｒ　ｔｏ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ｗｉｔｈ　ＲＮａｓｅ，ｆｏｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ｒｅ－ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ
ｓｏｄｉｕｍ　ａｃｅｔａｔｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｅｔｈａｎｏｌ，
ａｌｓｏ　ｎｅｇａｔｅｓ　ｔｈｅ　ｕｓｅ　ｏｆ　ｐｈｅｎｏｌ．
Ｙｉｅｌｄｓ　ａｎｄ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　ＤＮＡ
ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ　ａｒｅ
ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　ｉｎ　Ｔａｂｌｅ　２ａｎｄ　ｃｌｅａｒｌｙ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ
ｔｈｅ　ｂｅｎｅｆｉｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎｅｗ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ．Ｂｏｔｈ　ｔｈｅ　ＳＤＳ
ａｎｄ　ＣＴＡＢ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｒｅｑｕｉｒｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｔｏ　ｂｅ
ｉｎｃｕｂａｔｅｄ　ｉｎ　ｂｏｉｌｉｎｇ　ｗａｔｅｒ　ｆｏｒ　ａｂｏｕｔ　１ｈａｎｄ
ｉｎｃｌｕｄｅ　ｓｉｘ　ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ　ｓｔｅｐｓ，ｓｏ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ
ｗｏｒｋ－ｕｐ　ｔｉｍｅ　ｉｓ　ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ　ｔｗｉｃｅ　ａｓ　ｌｏｎｇ　ａｓ
ｔｈｅ　ｎｅｗ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ．Ｔｈｅ　ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ　ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ
ｓｔｅｐｓ　ｍａｙ　ａｌｓｏ　ｒｅｓｕｌｔ　ｉｎ　ｇｒｅａｔｅｒ　ＤＮＡ　ｌｏｓｓｅｓ　ａｎｄ
ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，ｔｈｅｒｅｂｙ　ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇ　ｉｎ　ｐａｒｔ　ｆｏｒ　ｔｈｅ
ｌｏｗｅｒ　ｙｉｅｌｄｓ　ｒｅｃｏｒｄｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ
ｍｅｔｈｏｄｓ．ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｎｅｗ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ
ｇａｖｅ　Ａ２６０／２８０ｖａｌｕｅｓ　ｒａｎｇｉｎｇ　ｂｅｔｗｅｅｎ　１．８∶１ａｎｄ
２∶１，ｗｈｅｎ　ｖａｌｕｅｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　２∶１ｉｎｄｉｃａｔｅ
ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｒ　ＤＮＡ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．
Ａ２６０／２３０ｖａｌｕｅｓ＞２．０ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｌｉｔｔｌｅ
ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｉｔｈ　ｐｈｅｎｏｌ　ｏｒ
ｏｔｈｅｒ　ａｒｏｍａｔｉｃ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．Ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ　ｆｏｒ　ｐｈｅｎｏｌ　ａｎｄ　ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　ａｌｓｏ
ｍａｋｅ　ｔｈｅ　ｎｅｗ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ　ｍｏｒｅ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｙ
ｆｒｉｅｎｄｌｙ　ａｎｄ　ｌｅｓｓ　ｃｏｓｔｌｙ．
Ａｓ　ｓｈｏｗｎ　ｉｎ　Ｆｉｇ．１，ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ａｍｏｕｎｔ
ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｓａｍｐｌｅ　ｗａｓ　ａｐｐｌｉｅｄ，ＤＮＡ　ｂａｎｄｓ
ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｎｅｗ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ　ｗｅｒｅ　ｓｈａｒｐｅｒ，
ｂｒｉｇｈｔｅｒ　ａｎｄ　ｍｏｒｅ　ｕｎｉｆｉｅｄ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｔｏ　ｍａｔｅｒｉａｌ
ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ＳＤＳ　ａｎｄ　ＣＴＡＢ　ｍｅｔｈｏｄｓ，
ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ｌｏｗｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｉｎｉｍａｌ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．Ｎｏ
ＲＮＡ　ｂａｎｄｓ　ｗｅｒｅ　ｅｖｉｄｅｎｔ，ｃｏｎｆｉｒｍｉｎｇ　ｔｈａｔ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ＲＮａｓｅ　ｆｏｒ　３０ｍｉｎ　ａｔ　３７℃ ｗａｓ
ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｉｎ　ｒｅｍｏｖｉｎｇ　ｔｈｉｓ　ｍａｔｅｒｉａｌ．
０１
Ｎｏ．２ ＪＩ　Ｈｏｎｇｃｈａｏ，ＷＡＮ　Ｙａｎｊｕａｎ，ＭＯ　Ｍｅｉｈｕａ，ｅｔ　ａｌ
Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ
表２　三种ＤＮＡ提取方法的比较
Ｍｅｔｈｏｄ
方法
Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ
ｔｉｍｅ
温育
时间 （ｈ）
Ｎｏ．ｏｆ
ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎｓ
离心次数
Ｄｕｒａｔｉｏｎ时间（ｈ）
Ｎｏ　ＲＮａｓｅ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
无核糖核酸酶
处理
ＲＮａｓｅ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
核糖核酸酶
处理
Ｅｘｔｒａｃｔｅｄ
ＤＮＡ
提取 ＤＮＡ
（μｇ／μＬ）
Ｔｏｘｉｃ
ｃｈｅｍｉｃａｌｓ
有毒试剂
（ｍＬ）
Ａ２６０／２８０ Ａ２６０／２３０
Ｉｍｐｒｏｖｅｄ
新方法
０　 ３ ＜１　 ２　 ０．３１０－１．６００ ＜１．４　１．８－２．０　２．０－２．４
ＳＤＳ
十二烷基硫酸钠
１　 ６ ＞２　 ４．５　 ０．１２４－０．５８０ ＞２．８　１．７－１．９　１．６－２．０
ＣＴＡＢ
十六烷基
三甲基溴化铵
１　 ６ ＞２　 ４．５　 ０．４７５－０．６８２ ＞２．８　１．９－２．２　１．８－２．３
Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ（１μＬ）ｗａｓ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　１％ （ｗ／ｖ）ａｇａｒｏｓｅ　ｇｅｌｓ　ｉｎ　ｅａｃｈ
ｃａｓｅ．Ｌａｎｅｓ：Ｍ，Ｍ２０００ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｌａｄｄｅｒ；１，ＳＤＳ　ｍｅｔｈｏｄ；
２，Ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ；３，ＣＴＡＢ　ｍｅｔｈｏｄ
泳道Ｍ：分子量标记；泳道１：十二烷基硫酸钠方法；泳道２：新方法；
泳道３：十六烷基三甲基溴化铵方法。基因组ＤＮＡ用量为１μＬ。
Ｆｉｇ．１　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ　ｐａｔｅｒｎｓ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ
Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ　ｕｓｉｎｇ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ
图１　不同方法提取双孢蘑菇子实体ＤＮＡ电泳图
　 　Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ　ｈａｖｅ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ
ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｃａｎ，
ｗｉｔｈ　ｍｉｎｏｒ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ，ａｌｓｏ　ｂｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ
ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ　ｏｆ　ｏｔｈｅｒ　ｍｕｓｈｒｏｏｍ　ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｆｏｒ
ｅｘａｍｐｌｅ，ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｅｆｆｅｃｔｅｄ
ｆｒｏｍ　ｗｉｌｄ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ　ｏｆ　Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ　ａｕｒｉｃｕｌａ－
ｊｕｄａｅ　ｗｈｅｎ　ｈｉｇｈｅｒ　ｖｏｌｕｍｅｓ　ｏｆ　ｌｙｓｉｓ　ｂｕｆｆｅｒ　ｗｅｒｅ
ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｒｅｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ
ｃｏｌｏｉｄａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ．Ｈｉｇｈ　ｑｕａｌｉｔｙ　ＤＮＡ　ｗａｓ
ａｌｓｏ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ　ｏｆ　Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ
ｇｉｇａｎｔｅｕｍｂｙ　ｉｎｉｔｉａｌｙ　ｓｌｉｃｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓｐｏｒｏｐｈｏｒｅｓ　ｔｏ
ｒｅｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｇｒｉｎｄｉｎｇ　ｒｅｑｕｉｒｅｄ．
２．２ＰＣＲ　ａｎａｌｙｓｉｓ
　　Ａｓ　ｓｈｏｗｎ　ｉｎ　Ｆｉｇ　２，ｔｈｅ　ｔａｒｇｅｔ　ＰＣＲ　ｂａｎｄｓ
ｗｅｒｅ　ａｌ　ｏｆ　ｅｘｃｅｌｅｎｔ　ｑｕａｌｉｔｙ，ａｎｄ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ
ｄｉｓｃｅｒｎａｂｌｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｒｅｓｕｌｔｓ　ｕｓｉｎｇ　ＤＮＡ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｎｅｗ　ａｎｄ
ｔｈｅ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ．
ＩＴＳ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｕｓｉｎｇ　ＩＴＳ４／ＩＴＳ５ｐｒｉｍｅｒｓ
［１７］ｉｓ　ａ
ｐｏｐｕｌａｒ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｔｏｏｌ　ｆｏｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ　ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ
ｆｕｎｇａｌ　ｓｔｒａｉｎｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｓｅ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ａ
ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ　７５０ｂｐ　ｉｎ　ｓｉｚｅ
ｕｓｉｎｇ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ａ．
ｂｉｓｐｏｒｕｓ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｎｅｗ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ（Ｆｉｇ．２Ａ）．
Ｓｉｍｉｌａｒ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ａｌｓｏ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｕｓｉｎｇ
ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｎｅｗ　ｍｅｔｈｏｄ
ｆｒｏｍ　Ａ．ａｕｒｉｃｕｌａ－ｊｕｄａｅ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｓｐｅｃｉｅｓ（ｄａｔａ
ｎｏｔ　ｓｈｏｗｎ）．
ＲＡＰＤ　ａｎａｌｙｓｉｓ， ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｗｉｔｈ　Ａ．
ｂｉｓｐｏｒｕｓ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｎｅｗ
ｐｒｏｔｏｃｏｌ　ｕｓｉｎｇ　ｐｒｉｍｅｒｓ　Ｍ１７，Ｕ２０ａｎｄ　Ｕ１６，
ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｒａｎｇｉｎｇ　ｆｒｏｍ　１５０ｂｐ　ｔｏ＞
２．５ｋｂ　ｉｎ　ｓｉｚｅ（Ｆｉｇ．２Ｂ）．
ＩＳＳＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ
ｓｅｖｅｒａｌ　ｅｄｉｂｌｅ　ｆｕｎｇｉ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｄｅｌｉｎｅａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｗｉｌｄ　ａｎｄ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　ｈｏｍｏｋａｒｙｏｔｉｃ
ｓｔｒａｉｎｓ　ｏｆ　Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ［１８］．Ｔｈｅ　ＩＳＳＲ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ
ｉｓ　ｍｏｒｅ　ｅｃｏｎｏｍｉｃａｌ　ｔｈａｎ　ｏｔｈｅｒ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄｓ （ｉ．ｅ．ＲＦＬＰ，ＡＦＬＰ，
ＳＳＣＰ，ｏｒ　ＳＳＲ）ａｎｄ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ
ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＤＮＡ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｎｅｗ
ｐｒｏｔｏｃｏｌ（Ｆｉｇ．２Ｃ）．Ｐｒｉｍｅｒｓ　ＩＳＳＲ１，ＩＳＳＲ２ａｎｄ
ＩＳＳＲ３ｗｅｒｅ　ｃｈｏｓｅｎ　ａｔ　ｒａｎｄｏｍ，ａｎｄ　ｆｒａｇｍｅｎｔ
ｓｉｚｅｓ　ｒａｎｇｉｎｇ　ｆｒｏｍ　３００ｂｐ　ｔｏ ＞３．０ｋｂ　ｗｅｒｅ
ｏｂｔａｉｎｅｄ．
１１
ＡＣＴＡ　ＥＤＵＬＩＳ　ＦＵＮＧＩ　 Ｖｏｌ．１９
Ｆｉｇ．２　ＰＣＲ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ
图２　新方法提取基因组ＤＮＡ的不同引物扩增结果
Ａ　ＩＴＳ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｌａｎｅｓ：Ｍ，２０００ｂｐ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｌａｄｄｅｒ
Ｂ　ＲＡＰＤ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｎｅｗ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｒｅｅ　ｒａｎｄｏｍ　ｐｒｉｍｅｒｓ；Ｌａｎｅｓ：１，Ｐｒｉｍｅｒ　Ｍ１７；２，ｐｒｉｍｅｒ　Ｕ２０；
３，ｐｒｉｍｅｒ　Ｕ１６；Ｍ，５０００ｂｐ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｌａｄｄｅｒ
Ｃ　ＩＳＳＲ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｎｅｗ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｒｅｅ　ｕｎｉｖｅｒｓａｌ　ｐｒｉｍｅｒｓ；Ｌａｎｅｓ：１，ＩＳＳＲ０１；２，ＩＳＳＲ０２；３，
ＩＳＳＲ０３；Ｍ，５０００ｂｐ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｌａｄｄｅｒ
Ａ　ＩＴＳ扩增，泳道 Ｍ：分子量标记；Ｂ不同引物ＲＡＰＤ分析，泳道１：引物 Ｍ１７；泳道２：引物Ｕ２０；泳道３：引物Ｕ１６；泳道 Ｍ：分子量标记；
Ｃ不同引物ＩＳＳＲ分析，泳道１ＩＳＳＲ０１；泳道２ＩＳＳＲ０２；泳道３，ＩＳＳＲ０３；泳道 Ｍ：分子量标记
２．３Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ
　 　 Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｅｎｚｙｍｅｓ　ｗａｓ
ａｄｏｐｔｅｄ　ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｐｕｒｉｔｙ，ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ
ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ＤＮＡ．ＬＯＰＥＺ　ｕｓｅｄ
ＥｃｏＲⅠ ａｎｄ　ＨｉｎｄⅢ ｔｏ　ａｎａｌｙｓｅ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ
ＤＮＡ　 ｆｒｏｍ　 ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　 ｙｅａｓｔｓ［１９］， ｗｈｉｌｅ
ＡＢＯＬＦＡＺＬ　ｕｓｅｄ　ｔｈｅｓｅ　ｔｗｏ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｅｎｚｙｍｅｓ
ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ
ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｃｏｎｉｆｅｒｏｕｓ　ｔｉｓｓｕｅ ［２０］． Ｂａｎｄ
ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｆｏｌｏｗｉｎｇ　ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ
ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ＤＮＡ　ｕｓｉｎｇ　ＥｃｏＲ Ⅰ，ＥｃｏＲ Ⅴ，
ＨｉｎｄⅢ ａｎｄ　ＫｐｎⅠ ａｒｅ　ｓｈｏｗｎ　ｉｎ　Ｆｉｇ．３．Ａｌ
ｆｏｕｒ　ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ　ｄｉｇｅｓｔｅｄ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ
ＤＮＡ， ｗｉｔｈ　ＥｃｏＲ Ⅰ ａｎｄ　ＥｃｏＲ Ⅴ ｅａｃｈ
ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　ｆｏｕｒ　ｂａｎｄｓ（ｌａｎｅｓ　１ａｎｄ
２）．Ｏｕｒ　ｄａｔａ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ
ｂｙ　ｔｈｅ　ｎｅｗｌｙ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｏｆ
ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ　ｈｉｇｈ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｆｏｒ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｅｎｚｙｍｅ
ａｎａｌｙｓｉｓ．
Ｆｉｇ．３　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ
ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｂｙ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ
图３　核酸内切酶酶切ＤＮＡ电泳
Ｌａｎｅｓ：１－４，ＤＮＡ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＥｃｏＲⅠ，ＥｃｏＲⅤ，ＨｉｎｄⅢａｎｄ
ＫｐｎⅠ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；５，ｕｎｔｒｅａｔｅｄ　ＤＮＡ （ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ）；
Ｍ，１００００ｂｐ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｌａｄｄｅｒ
泳道１－４分别为：ＥｃｏＲⅠ，ＥｃｏＲⅤ，ＨｉｎｄⅢ ａｎｄ　ＫｐｎⅠ处理
ＤＮＡ；５未酶切ＤＮＡ（对照）
２１
Ｎｏ．２ ＪＩ　Ｈｏｎｇｃｈａｏ，ＷＡＮ　Ｙａｎｊｕａｎ，ＭＯ　Ｍｅｉｈｕａ，ｅｔ　ａｌ
３　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
　　Ｉｎ　ｓｕｍｍａｒｙ，ｗｅ　ｈａｖｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ａ　ｎｅｗ
ｐｒｏｔｏｃｏｌ　ｆｏｒ　ｉｓｏｌａｔｉｎｇ　ＤＮＡ　ｆｒｏｍ　Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ
ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｏｔｈｅｒ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ
ｉｔ　ｈａｓ　ｓｅｖｅｒａｌ　ａｄｖａｎｔａｇｅｓ　ｉｎ　ｔｅｒｍｓ　ｏｆ　ｃｏｓｔ，
ｒａｐｉｄｉｔｙ，ｌｏｗｅｒ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｉｍｐａｃｔ，ａｎｄ　ｔｈｅ
ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＤＮＡ　ｏｂｔａｉｎｅｄ．
Ａｃｋｎｏｗｌｅｄｇｅｍｅｎｔ： Ｗｅ　ｔｈａｎｋ　Ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ
Ｊｉａｎｇ　Ｚｉｄｅ　ｆｏｒ　ａｃｃｅｓｓ　ｔｏ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ，
ａｎｄ　ｍｅｍｂｅｒｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｆｕｎｇａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｓｏｕｔｈ
Ｃｈｉｎａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｆｏｒ　ａｓｓｉｓｔａｎｃｅ．
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ
［１］ＬＯ　Ｈ，ＴＳＡＩ　Ｆ，ＷＡＳＳＥＲ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｉｎｇｅｓｔｅｄ
ｆｒｕｉｔｉｎｇ　ｂｏｄｉｅｓ，ｓｕｂｍｅｒｇｅｄ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｂｉｏｍａｓｓ，ａｎｄ　ａｃｉｄｉｃ
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｇｌｕｃｕｒｏｎｏｘｙｌｏｍａｎｎａｎ　ｏｆ　 Ｔｒｅｍｅｌａ
ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃａ　Ｒｅｔｚ：Ｆｒ　ｏｎ　ｇｌｙｃｅｍｉｃ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ
ａｎｄ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ，２００６，７８（１７）：
１９５７－１９６６．
［２］ＫＯＹＹＡＬＡＭＵＤＩ　Ｓ，ＪＥＯＮＧ　Ｓ，ＳＯＮＧ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．
Ｖｉｔａｍｉｎ　Ｄ２ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　ｆｒｏｍＡｇａｒｉｃｕｓ
ｂｉｓｐｏｒｕｓ　ｂｕｔｔｏｎ　ｍｕｓｈｒｏｏｍｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ
ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ａｇｒｉｃ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ，２００９，５７（８）：
３３５１－３３５５．
［３］ＳＡＮＧ　Ｃ，ＹＯＮＧ　Ｔ，ＢＹＵＮＧ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｗｈｉｔｅ　ｂｕｔｔｏｎ
ｍｕｓｈｒｏｏｍ （Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ）ｌｏｗｅｒｓ　ｂｌｏｏｄ　ｇｌｕｃｏｓｅ
ａｎｄ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ａｎｄ　ｈｙｐｅｒ－
ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉｃ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｎｕｔｒ　Ｒｅｓ，２０１０，３０（１）：
４９－５６．
［４］ＺＥＬＡＹＡ－ＭＯＬＩＮＡ　ＬＸ，ＯＲＴＥＧＡ　ＭＡ，ＤＯＲＲＡＮＣＥ
ＡＥ．Ｅａｓｙ　ａｎｄ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ　ｆｏｒ　ｏｏｍｙｃｅｔｅ　ＤＮＡ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ
［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　Ｌｅｔｔ，２０１１，３３（４）：７１５－７２０．
［５］ＯＲＳＩＮＩ　Ｍ，ＲＯＭＡＮＯ－ＳＰＩＣＡ　Ｖ．Ａ　ｍｉｃｒｏｗａｖｅ－
ｂａｓｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ
ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｓａｍｐｌｅｓ［Ｊ］．Ｌｅｔｔ　Ａｐｐｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，
２００１，３３（１）：１７－２０．
［６］ＧＲＩＦＦＩＮ　Ｄ，ＫＥＬＬＯＧＧ　Ｃ，ＰＥＡＫ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ａ
ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ＤＮＡ　ｆｒｏｍ
ｆｕｎｇｉ［Ｊ］．Ｌｅｔｔ　Ａｐｐｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００２，３４（３）：
２１０－２１４．
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３１
ＡＣＴＡ　ＥＤＵＬＩＳ　ＦＵＮＧＩ　 Ｖｏｌ．１９
ｆｒｏｍ　ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　ｙｅａｓｔｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｆｏｏｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００１，
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Ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　ｓｉｍｐｌｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　ｆｏｒ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｇｈ
ｑｕａｌｉｔｙ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ｆｒｏｍ　ｃｏｎｉｆｅｒｏｕｓ　ｔｉｓｓｕｅｓ（Ｔａｘｕｓ
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一种不经热浴从双孢蘑菇子实体中提取ＤＮＡ的新方法
姬宏超，万艳娟，莫美华，徐学锋＊
（华南农业大学食品学院，广东广州５１０６４２）
摘　要：介绍一种不经热浴快速从双孢蘑菇子实体中提取ＤＮＡ的新方法，并与传统的ＣＴＡＢ和ＳＤＳ法相比
较，结果显示：该方法得到的ＤＮＡ完整性好，时间短，步骤少，有毒试剂用量少，在提取ＤＮＡ的质量、得率、时
间及完整性等方面都优于传统的ＣＴＡＢ和ＳＤＳ法，为食药用菌子实体ＤＮＡ的提取参考。
关键词：双孢蘑菇；ＤＮＡ提取；内切酶消解
［本文编辑］　王瑞霞
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