全 文 ：灯台叶中鸭脚树叶碱化学对照品的制备＊
孙　赟 1, 4 , 惠婷婷 1, 4 , 朱丽萍 2 , 郭　文 2 , 罗晓东 3 , 饶高雄 1, 4■
(1.云南中医学院 , 云南昆明　650200;2.昆明振华制药厂有限公司 , 云南昆明　650034;
3.中国科学院昆明植物研究所 , 云南昆明　650204;4.云南省农业科学院药用植物研究所 , 云南昆明　650231)　①　
　　摘　要:目的:以灯台叶为原料 , 研究鸭脚树叶碱对照品的制备与分析技术 。方法:用溶剂法提取灯台叶中
生物碱 , 通过色谱方法分离主要成分鸭脚树叶碱 , 用光谱方法鉴定其结构 , 并用 TLC、 HPLC方法检查纯度和标
定含量 。结果:鸭脚树叶碱对照品经 TLC检查无杂质斑点 , 二维及三维 HPLC检查为单一成分 , 峰纯度因数
999.878 , 含量为 99.35%.结论:鸭脚树叶碱对照品已达到中药质量标准用化学对照品技术要求 。
　　关键词:灯台叶;鸭脚树叶碱;对照品;制备方法
　　中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1000—2723(2007)06— 0001— 04
　　傣药灯台叶为夹竹桃科植物灯台树 Alstonia
scholaris(L.)R.Bro.的干燥叶片 , 傣医称为 “买
担别”, 主治 “乃多皇迈唉列习特来 ” (肺热咳嗽
痰多)等[ 1] ;中草药应用称为 “理肺散”, 亦主治
肺热咳嗽痰多等 , 已载入 《云南省药品标准 》 和
《中国药典 》[ 2 ～ 4] 。以其为原料开发了 “灯台叶颗
粒 ” 等制剂 , 是我省 “云药 ” 发展战略的重要品
种之一。但在质量标准方面 , 灯台叶药材执行
《中国药典》 1977年版 , 制剂执行 1997年间颁布
的卫生部标准[ 3 ～ 5] , 相关的质量控制项目及方法均
很简单 , 没有化学成分的定性或定量检测项。
图 1　鸭脚树叶碱
生物碱和黄酮是灯台叶的主要成分 , 目前以
生物碱的研究比较深入 , 是灯台叶重要的活性物
质。其中以鸭脚树叶碱 (picrinine)的含量最高 。
从云南 、 广西 , 以及越南 、 泰国 、 菲律宾 、 马来
西亚 、澳大利亚等产地灯台叶中均分离得到过鸭
脚树叶碱 , 鸭脚树叶碱是台灯叶的标识性成
分[ 6 ～ 8] 。经过研究比较 , 我们研究建立了鸭脚树叶
碱对照品的制备方法 , 为灯台叶及其制剂质量标
准的提高研究打下了基础 , 现将其系统的制备和
检查分析方法报道如下 。
1　仪器和材料
熔点用 Yanaco显微熔点仪测定 , 温度未校正;
旋光用 Jasco-20C旋光仪测定;IR用 Bio-Rad
FTS-135红外光谱仪测定 , KBr压片;UV用岛津
UV-2450紫外光谱仪测定;MS用 VGAutoSpec-
3000质谱仪测定;NMR用 BrukerAM-400核磁共
振仪测定 , TMS为内标。元素分析用 VARIOELⅢ
全自动元素分析仪 。
HPLC分析用岛津 LC-10Avp及安捷伦 Angi-
lent1100液相色谱仪 , 分析柱用十八烷基键和硅胶
柱 (LunaC-18和 PurospherStarC-18, 150mm×
4.6, 5μm)。硅胶及硅胶 G薄层板为青岛海洋化
工厂分厂产品 , 氧化铝为上海陆都化学试剂厂产
品 , 十八烷基键合硅胶为富士硅公司产品 , 葡聚
糖凝胶 LH-20为 Pharmacia公司出品 。乙醇 、 氯
1
第 30卷第 6期　　　　　　　　　　　　　　　　云南中医学院学报　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol. 30No. 6
　 2007年 12月　　　　　　　　　　　JournalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine　　　　　　　　　　　　　12. 2007　
①＊基金项目:昆明市科技计划 (昆科计字 06S111103)和云南省自然科学基金重点项目 (2004C0009Z)资助 。
作者简介:孙赟 (1982 ～ ), 女 , 云南昆明人 , 本院 2005级硕士研究生 , 研究方向:中药化学及中药质量控制研究 。 ■通
讯作者:饶高雄 , Tel:0871-6212194;E-mail:raowufam@vip.sohu.com
仿 、氨水 、 碘化铋钾等试剂用化学纯或分析纯试
剂 , 高效液相色谱流动相用色谱纯溶剂。
灯台叶药材由昆明振华制药厂提供 , 产于云南
省思茅市 , 经郭文主任药师鉴定为夹竹桃科植物灯
台树 Alstoniascholaris(L.)R.Bro.的干燥叶片。
2　提取分离
2.1　提取
干燥的灯台叶药材 50kg切碎 , 分别加入 8倍 、
6倍水煮提二次 , 合并煮提液 , 减压浓缩为浸膏
(约 7kg)。浸膏加水搅散后用浓氨水调 pH为 8 ,
氯仿萃取 , 萃取液加无水硫酸钠干燥 , 回收氯仿
后得浸膏 372g。将其以 5L甲醇热溶 , 加入适量粉
末活性碳回流脱色 , 趁热过滤 , 减压回收甲醇 ,
得灯台叶总生物碱 258g(Fr-A)。
2.2　分离
Fr-A(总生物碱)100g用丙酮溶解后以适量
氧化铝拌样 , 再以 3 000g氧化铝柱色谱分离 , 用
环己烷 -乙酸乙酯溶剂系统梯度洗脱 (100∶0 ～ 100
∶50), 得含鸭脚树叶碱的部分 35g(Fr-B)。 Fr-
B以硅胶柱色谱分离 , 用氯仿 -甲醇溶剂系统梯度
洗脱 (100∶0 ～ 100∶15), 得鸭脚树叶碱粗品约 19g
(Fr-C, 浅黄色固体物)。 Fr-C以十八烷基键合
硅胶柱色谱分离 , 用水 -甲醇溶剂系统梯度洗脱
(100∶50 ～ 100∶70), HPLC检查 , 合并纯度大于
95% (峰面积归一法)的流份 , 得灰白色固体物
13g(Fr-D), 即为鸭脚树叶碱 。
2.3　纯化
Fr-D以甲醇溶解后加 0.65g粉末活性碳回流
脱色 , 趁热过滤 , 减压回收甲醇至适量体积 , 加
到葡聚糖凝胶 LH-20柱色谱上 , 甲醇缓慢洗脱 ,
HPLC检查 , 合并纯度大于 95%的流份 , 减压回收
甲醇至适量体积 , 放置后析出微黄色的针晶 7.3g。
该结晶用无水丙酮热溶 , 滤过 , 滤液滴加适量环
己烷 , 放置后析出无色针晶 4.1g, 即为鸭脚树叶
碱对照品。
3　结构鉴定
3.1　理化性质
本品为无色的针状晶体 (丙酮 -环己烷), 易
溶于甲醇 、 氯仿 、 丙酮 , 可溶于乙酸乙酯 、 乙醇 ,
不溶于水和石油醚 。易溶于 2%稀盐酸及 1%稀硫
酸 , 加碱中和后溶液变浑浊后复析出沉淀。熔点
222 ～ 224℃。比旋光度为 [ α] 25D -48 (c0.21,
CHCl3)。元素分析:C 70.83%, H 6.67%, N
8.33%, O 14.17% (计 算 值:C 71.0%, H
6.63%, N8.28%, O14.09%)。取本品适量 , 用
2%稀盐酸溶解制成约 10mg/mL的溶液 , 各吸取
3mL置于三只试管内 , 分别滴加 3 ～ 5滴改良碘化
铋钾 、苦味酸 、 硅钨酸试液 , 上述试管中分别出
现橘红色 、 黄色 、 灰白色沉淀 , 呈现生物碱阳性
反应 。
3.2　光谱分析
UVλ(CH3OH)nm:205 (31693), 235.5
(10202), 287.5 (4038), 提示其结构中有杂原子
取代的苯环 , 可能为二氢吲哚类化合物。 IRv
(KBr)cm-1: 3430, 3391 (vs, NH), 3009 -
2866 (s, C-H), 1724 (s, C=O), 1610,
1481, 1465 (s, C=C), 1203 -1167 (s, C-O
及 C-N)。提示该化合物结构中有胺基 、 苯环及
双键 、酯基等官能团 , 属生物碱类化合物。
正离子 FABMSm/z:339 [ M+1] +, 338
[ M] + , 239+。其中 m/z339为基峰 (100%), 是
该化合物吸收一个质子后呈现的准分子离子峰 ,
m/z338为分子离子峰 , 结合 NMR光谱以及元素
分析数据 , 其对应的分子式应为 C20 H22 N2O3。其
NMR(CDCl3 , 1 ×10-6)测试数据以及相关分析
归属结果如表 1 , 数据和文献报道 [ 6 ～ 8]一致 , 确证
其结构为鸭脚树叶碱 (picrinine)。
4　纯度考察及含量标定
4.1　薄层色谱分析 (TLC)
取本品溶于甲醇制成 1 ～ 3mg/mL的溶液 , 定
量吸取相当于 1, 2, 4 , 8, 16 , 32μg的量 , 点于
同一硅胶 G薄层板上 , 分别以环己烷 -丙酮 (5∶
2, 系统 A, 在双槽色谱缸中另槽用氨水饱和
15min, 以下均同 )、 氯仿 -甲醇 (15∶1, 系统
B)、乙酸乙酯 -丁酮 (8∶1, 系统 C)3种溶剂系
统展开 , 取出 , 晾干 , 分别用改良碘化铋试液 、
10%的 H2SO4 -EtOH浸板显色 。改良碘化铋试液
显色板 (图 2左)直接于日光下观察 , 10%H2SO4
-EtOH显色板 (图 2右)于 105℃烘烤至斑点清
晰 , 再于日光下观察 , 均为单一斑点 , 未见其它
杂质斑点 (图 2)。
2
2007年　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　云南中医学院学报　　　　　　　　　　　　　　　　　　第 30卷
表 1　鸭脚树叶碱的 1H-NMR和 13C-NMR数据及其归属指定
No. 1H-NMR 13C-NMR No. 1H-NMR 13C-NMR
1 5.02 , br.s ——— 12 6.73 , br.d, J=7.5Hz 127.9 (CH)
2 ——— 106.3 (C) 13 ——— 147.6 (C)
3 3.60 , br.d, J=4.2Hz 51.4 (CH) 14 1.85 , br.d, J=14Hz
2.16 , br.dd, J=14、 4.2Hz
25.9 (CH2 )
4 ——— ——— 15 3.28 , br.s 31.0 (CH)
5 4.83 , br.s 87.2 (CH) 16 2.46 , br.s 51.9 (CH)
6 3.45 , br.d, J=14Hz
2.27 , br.d, J=14Hz
40.5 (CH2 ) 17 3.10 , br.d, J=18Hz
3.79 , br.d, J=18Hz
46.3 (CH2 )
7 ——— 51.1 (C) 18 ——— 135.1 (C)
8 ——— 136.3 (C) 19 5.42 , q, J=6.9Hz 110.5 (CH)
9 7.15 , br.d, J=7.5Hz 125.0 (CH) 20 1.50 , d, J=6.9Hz 12.7 (CH3 )
10 6.80 , br.t, J=7.5Hz 120.2 (CH) 21 ——— 172.4 (C)
11 7.08 , br.t, J=7.5Hz 120.6 (CH) 22 3.66 , s 51.7 (CH3 )
图 2　鸭脚树叶碱的 TLC分析 (左:碘化铋试液显色;右:10%H2SO4 -EtOH显色)
(色谱板从左至右分别用溶剂系统 A-C展开 , 各板上点样量从左至右为 1, 2 , 4 , 8, 16 , 32μg)
4.2　高效液相色谱分析 (HPLC)
色谱柱用十八烷基键合硅胶为填充剂:四氢
呋喃 -0.01%三乙胺 (35∶65)为流动相 , 流速
1mL/min, 柱温 40℃;二维谱检测波长 287nm, 理
论塔板数按照鸭脚树叶碱峰计算应不低于 5 000;
三维谱检测器用二极管阵列检测器 (DAD), 在
190nm～ 400nm波长连续扫描 。
取鸭脚树叶碱适量 , 用液相色谱流动相溶解 、
制成含量约为 1mg/mL的供试溶液 。使用时按需要
用流动相稀释。吸取供试液适量 , 注入液相色谱
仪 。二维谱中鸭脚树叶碱按照面积归一化计算含
量为 99.35% (图 3)。三维谱中除鸭脚树叶碱峰
外无任何吸收 , 鸭脚树叶碱峰纯度因数为 999.878
(图 4)。
图 3　鸭脚树叶碱的二维 HPLC分析
图 4　鸭脚树叶碱的三维 HPLC分析
上述理化检识 , 薄层色谱 (TLC)分析 、 高效
液相色谱 (HPLC)分析检查 、 测定的结果证明 ,
3
第 6期 孙赟 , 等:灯台叶中鸭脚树叶碱化学对照品的制备 　
所制备的鸭脚树叶碱峰为单体化合物 , 纯度大于
98%, 符合含量测定用中药质量标准用化学对照品
的技术要求 , 可用于中药质量标准分析检验。
5　稳定性考察
将制备的对照品按照 10mg/瓶分装于棕色玻璃
样品瓶 , 密封 , 外套纸盒。参照药品稳定性加速试
验的条件 , 将其置于 40℃、相对湿度 75%的条件下
(药品稳定性试验箱), 分别于 0, 1, 2, 3, 6个月
取样进行外观 、 熔点测定 、 TLC、 HPLC分析。结果
证明 , 鸭脚树叶碱对照品外观性状无变化;熔点未
变化;TLC检查未出现其它杂质斑点;HPLC未出
现其它物质峰 , 面积归一化计算纯度的变化 (RSD
=0.37%), 单位进样质量的峰面积响应值 (RSD=
1.29%), 均符合含量测定要求。提示鸭脚树叶碱对
照品稳定性较好 , 可以用于含量分析工作。
6　结果与讨论
针对中药所含的有效成分或标志性成分 , 建
立比较客观的定性鉴别和含量测定指标 , 提高和
完善中药质量标准 , 是中药现代化的主要标志之
一 。在此过程 , 很多质量分析工作经常因受制于
缺乏相应的化学成分对照品而难以开展 , 因此 ,
研究中药质量标准用化学对照品的制备分析方法 ,
是对中药现代化具有明确意义的应用基础研究 。
灯台叶是我省特色民族药 , 也是 “云药 ” 产
业发展的重点品种之一 , 目前已形成一定产业规
模 , 相关制剂产品均有专利和行政 (中药保护品
种)的双重保护 , 进一步提高完善标准 , 开发系
列产品 , 是灯台叶类药品发展的重点 , 也是保持
我省在灯台叶系列制剂方面技术及市场领先的重
点。我们研究建立了鸭脚树叶碱对照品的制备方
法 , 并为生产厂家和药品检验机构进行该品种的
质量研究提供了合格的对照品 。该工作对于灯台
叶系列产品质量分析与控制 , 新产品开发等 , 均
有直接的促进作用 。
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(编辑:岳胜难)
PreparationofStandardSubstanceAlkaloidfromLeaveofAlstoniascholaris(L.)R.Bro.
SUNYun1, 4 , HUITing-ting1, 4 , ZHULi-ping2 , GUOWen2 , LUOXiao-dong3 , RAOGao-xiong1, 4
(1.YunnanUniversityofTCM, KunmingYunnan650200;2.KunmingZhenhuaPharmaeuticalFactory,
KunmingYunnan650034;3.KunmigInstituteofBotany, CAS, KunmingYunnan650204;
4.InstituteofMedicinalPlant, YAAS, KunmingYunnan650231)
ABSTRACT:Objective:Tostudythepreparationandanalysistechniqueofstandardsubstancepicrinine.
Methods:ThealkaloidewereextractedwithsolventfromtheleaveofAlstoniascholaris(L.)R.Bro..Thepicri-
ninewasisolatedbychromatographerfromtheextractionanditsstructurewasidentifiedbyspectrumanalysis.The
TLCandHPLCwereemployedfordeterminingitspurityandcontent.Results:TheTLCshowedthepicrininehas
noanyimpurityspot.Two-dimensionandThree-dimensionHPLCindicatedthatitsasinglepeakwiththepurity
factor999.878anditscontentwas99.35%.Conclusion:Thepicrininehasbeenuptotherequisitetechnique
standardofstandardsubstancefortraditionalChinesemedicine.
KEYWORDS:AlstoniaScholaris(L.)R.Bro.;Picrinine;StandardSubstance;Preparation
4
2007年　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　云南中医学院学报　　　　　　　　　　　　　　　　　　第 30卷