全 文 :中国农学通报 2014,30(13):299-303
Chinese Agricultural Science Bulletin
0 引言
随着嘉兴市农村产业化结构的调整,食用菌所带
来的巨大经济效益被人们逐步认可。双孢蘑菇
(Agaricus bisporus)是当今世界上第一大宗食用菌,约
占世界食用菌总产量的 40%左右,其人工栽培迄今已
有 300多年的历史[1]。目前,嘉兴市的双孢蘑菇大多
采用开放式发酵料栽培,管理相对于其他食用菌比较
粗放,病害发生机会多。而疣孢霉病就是一种在蘑菇
栽培中发生最普遍、最严重的真菌性病害,它严重影响
着蘑菇的产量和效益[2]。当前疣孢霉病的药剂防治主
要采用单一的化学制剂,由于其频繁使用使致病菌产
生了一定的抗药性。疣孢霉首先在1885年被Magn发
现,并于1887年定名为Hypormyces pernicioca Magn.,
后又由 Delaer 在 1890 年将其更名为 Mycogone
perniciosa (Magn.)[3]。该病的药剂防治研究始于 1928
年,美国学者Charler和 Popowae采用甲醛熏蒸法、来
基金项目:嘉兴市科技局科技计划项目“双孢蘑菇疣孢霉综合防治技术的研究与应用示范”(2010AY1014)。
第一作者简介:范建奇,男,1964年出生,浙江嘉兴人,副教授,农学学士,主要从事食品微生物与食用菌生产方面的教学与研究。通信地址:314036
浙江省嘉兴市昌盛南路1123号,E-mail:fjqchina04@163.com。
收稿日期:2013-08-14,修回日期:2013-10-21。
复配杀菌剂对双孢蘑菇疣孢霉病的防治研究
范建奇,何 蕾,柳赵虹,张俐勤,何文辉
(嘉兴职业技术学院,浙江嘉兴 314036)
摘 要:为了解决单一药剂的长期使用使致病菌产生抗药性及复配剂对双孢蘑菇疣孢霉病的防治问题,
以双孢蘑菇疣孢霉为检测菌,对21种复配杀菌剂进行了实验室平板药效检测试验,并筛选对疣孢霉抑
制力强的药剂组合进行菇床应用验证。结果显示,对疣孢霉病的防治效果和对双孢蘑菇生长的影响,不
同复配杀菌剂存在很大差异,其中用 4000倍与 4800倍的复配杀菌剂(25%腐霉·福美双可湿性粉剂+
70%百菌清可湿性粉剂,体积比1:1)和4000倍的复配杀菌剂(40%多·福可湿性粉剂+70%百菌清可湿
性粉剂,体积比1:1)处理覆土材料,对防治疣孢霉病均有较好的实效,且对蘑菇的菌丝生长与子实体发
育无不良影响,生产上值得推广。
关键词:复配杀菌剂;双孢蘑菇;疣孢霉病;防治
中图分类号:S436.46+1 文献标志码:A 论文编号:2013-2185
Study on Prevention of Bactericide on Agaricus bisporus Mycogone peniciosa Magn.
Fan Jianqi, He Lei, Liu Zhaohong, Zhang Liqin, He Wenhui
(Jiaxing Technical and Vocational College, Jiaxing Zhejiang 314036)
Abstract: In order to solve the long- term use of single agents make the pathogen produced prevention
resistance and compound on Agaricus bisporus Mycogone peniciosa Magn, Agaricus bisporus Mycogone for
detection of bacteria, the laboratory efficacy test plate on 21 kinds of bactericide, and screening of fungicides
combination on the wart Neurospora self- control ability of the mushroom bed application verification. The
results showed, control effect against Mycogone peniciosa mildew and influence on the growth of Agaricus
bisporus, different bactericide has the very big difference, bactericide which used 4000 times and 4800 times
(25% procymidoneo thiram WP + 70% chlorothalonil WP, the volume ratio of 1:1) and compound bactericidal
agent 4000 times (40% carbendazimo thiram WP +70% chlorothalonil WP, the volume ratio of 1:1) treatment
of covering materials, to prevent Mycogone peniciosa Magn had good effect, and the mushroom hypha growth
and fruit body development without adverse effects. The production is worth promoting .
Key words: compound bactericide; Agaricus bisporus; Mycogone peniciosa Magn; prevention
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苏乐防治,取得较好效果[4]。20世纪 40年代问世了有
机硫杀菌剂,代森锌、代森锰取而代之,后又发展到多
菌灵、甲基托布津,然而因抗药性问题,目前大多采用
特克多 [5]。在中国,疣孢霉病首先见于由朱慧贞在
1982年报道的北京白蘑菇病害中 [6],首次发现是在
1987年由福建省农科院植保所于福建仙游地区,随后
各地相继出现并开展积极防治研究,1992年由福建省
宁德市农业科学研究所罗仰奋等[7]研制出了防治疣孢
霉病特效药“克疣灵”,目前生产上使用较多的单剂是
多菌灵、施保功、特克多等,但国内由于菇农长期、广
泛、大量、连续地不合理使用已造成病菌菌株的抗药性
不断增强,形成施药量与病害相互递增的不良循环,使
菇产品中农药残留量增加,对当地生态环境的平衡与
人畜安全造成威胁,再加国内生产的双孢蘑菇多数出
口,其农药残留标准要求高,这使得菇农对药剂的使用
与选择受到极大的限制。为此,近几年,福建农科院食
用菌研究所廖剑华[8]、四川大学生命科学学院龙章富[9]
等进行了杀菌剂的复配防治试验,取得较好实效,但因
地域不同,长三角地区在这方面的研究尚属空白,因此
启动了本项研究。笔者在单剂防治研究基础上[10],通
过对几种有一定防治效果的化学杀菌剂进行混合复配
试验,并对复配试验中表现突出的复配剂在双孢蘑菇
栽培中作进一步认证,旨在筛选出防治疣孢霉病较理
想的复配剂,为疣孢霉病的防治药剂选择及复配药剂
的开发应用提供参考。
1 材料与方法
1.1 供试材料
1.1.1 蘑菇菌株 As2796,福建轻工业研究所提供。
1.1.2 疣孢霉病 菌盖疣孢霉菌,福建农科院食用菌研
究所提供。
1.1.3 培养基 PDA培养基。
1.1.4 参试药剂 7种药剂,均为市场常规药剂,详见表1。
表1 参试药剂
商品名
腐霉·福美双
波尔·锰锌
喷克
多·福
硫磺·多菌灵
富利霜
百菌清
主要有效成分
25%腐霉·福美双可湿性粉剂
78%波尔·锰锌可湿性粉剂
80%喷克可湿性粉剂
40%多·福可湿性粉剂
50%硫磺·多菌灵可湿性粉剂
69%富利霜可湿性粉剂
70%百菌清可湿性粉剂
生产商
山东鲁抗生物农药有限责任公司
美国仙农有限公司
美国仙农有限公司
山东曹达化工有限公司
江苏无锡市锡南农药有限公司
青岛奥迪斯生物科技有限公司
山东曹达化工有限公司
1.2 试验设置
1.2.1 平板测试复配药剂的抑菌效果
(1)选择复配药剂与浓度设定。复配药剂是在单
一化学药剂防治疣孢霉病的实验室平板抑菌初试基础
上设定的[10],采用其中表现抑制力强的药剂进行编号
与复配组合(见表2),复配时均按体积比1:1进行混合
配比,无菌水作对照,然后进行抑菌效果初试,再对初
试中表现抑制力较强的组合进行每递增800倍(1600、
2400、3200、4000、4800)的稀释与复试。
(2)复配药剂抑菌测定。方法参见文献 [10]。
④菌悬液的配制与涂布。在实验室超净台内无菌制作
约含 105~106个/mL的疣孢霉孢子菌悬液 15 mL,并各
取菌悬液 0.1 mL均匀涂布于直径 9 cm的刚制成冷凝
的PDA平板培养基表面,倒置待用;④参试药剂浓度
稀释与放置。选择初试中抑菌效果显著的几种药剂进
行 1:1600、1:2400、1:3200、1:4000、1:4800的梯度浓度
稀释,并在超净台内用灭菌干燥直径为 6 mm的滤纸
片浸润各药剂,至滤片湿透不滴水后移入上述平板表
面,1皿3点,3点1片,并在25℃下的培养箱中培养5天,
观察并测量抑菌圈直径;④抑菌圈测定。用十字交叉
法测量其大小,若>20 mm,则为强抑制 (+ + + );
10~20 mm间为中等抑制(+ +);<10 mm为弱抑制(+);
无抑制作用(-);④处理设置。某一药剂的某一浓度处
理均设3次重复,并以无菌水做公共对照[11]。
编号
A
B
C
D
E
F
G
药剂名称
25%腐霉·福美双可湿性粉剂
78%波尔·锰锌可湿性粉剂
80%喷克可湿性粉剂
40%多·福可湿性粉剂
50%硫磺·多菌灵可湿性粉剂
69%富利霜可湿性粉剂
70%百菌清可湿性粉剂
药剂组合
AB、AC、AD、AE、AF、AG
BC、BD、BE、BF、BG
CD、CE、CF、CG
DE、DF、DG
EF、EG
FG
—
表2 药剂编号及药剂组合
··300
范建奇等:复配杀菌剂对双孢蘑菇疣孢霉病的防治研究
1.2.2 菇床验证 依据实验室复配组合平板抑菌测试结
果,同时考虑菇农的实际操作,为降低药剂残留,故采
用 3200倍中表现较强以上抑菌作用的复合药剂作为
菇床供试药剂,再分别依次稀释成 4000倍、4800倍稀
释液处理双孢蘑菇覆土,进行菇床验证。本验证设置
6种药剂组合,各组合均设 3个浓度与 3次重复,另加
无菌水的3个公共对照,共计54个处理进行单因素随
机区组排列。
(1)蘑菇栽培与覆土材料处理。方法参见文献
[10]。双孢蘑菇培养料按常规方法进行堆料、发酵、装
框(45 cm× 30 cm× 25 cm,料厚 20 cm)、播种与发菌。
待菌丝吃料 1/3时备好覆土,待菌丝吃料 2/3时,进行
覆土,覆土厚度为4 cm。覆土后用蚊虫喷雾器均匀喷
雾接种50 mL疣孢霉菌孢子悬液(105~106个/mL)于每
个处理小区(1筐)中,以确保在正常条件下覆土带菌,
且能发生疣孢霉病。
(2)药剂处理覆土对疣孢霉病的防治效果试验。
双孢蘑菇栽培覆土后按正常的管理方法进行调水,在
调水的最后1次喷水时,分别用复试3200倍中抑制力
较强以上的供试药剂组合配成 3200、4000、4800倍的
各种浓度进行覆土喷雾处理,每处理(1筐0.135 m2)定
量喷施药液0.25 kg。接着同常规管理,直到头潮菇结
束,这期间对蘑菇的菌丝爬土时间、着生情况、子实体
的数目以及生长状况进行定期观察,统计各处理的病、
健菇数,计算发病率(P)和防治效果(PE)[12]。
P=(nl/n2)×100% ……………………………… (1)
PE=[(1-P1)/P2]×100% ………………………… (2)
式中:nl为病菇数,n2为总菇数;P1为处理发病率、
P2为对照发病率。
2 结果与分析
2.1 初试
21种药剂复配组合对疣孢霉抑制作用的测试结
果见表3。从表3看出,800倍浓度下能显示出强抑制
作用的复配组合有AC、AD、AF、AG、DG、FG,稍强抑
制的有AB、CD、CF、CG、EF,弱抑制的有BC、BD、BF、
DE、EG。
表3 复配杀菌剂稀释800倍对疣孢霉的抑制作用
药剂
组合
AB
AC
AD
AE
AF
AG
BC
BD
BE
BF
BG
抑制圈
>20 mm
+++
+++
+++
+++
抑制圈
10~20 mm
++
抑制圈
<10 mm
+
+
+
无抑制
作用
–
–
–
药剂
组合
CD
CE
CF
CG
DE
DF
DG
EF
EG
FG
对照
抑制圈
>20 mm
+++
+++
抑制圈
10~20 mm
++
++
++
++
抑制圈
<10 mm
+
+
无抑制
作用
–
–
–
注:+++强抑制;++中等抑制;+弱抑制;-无效。下同。
2.2 复试
在初试基础上,选择了中等抑制(++)以上的AB、
AC、AD、AF、AG、CD、CF、CG、DG、EF、FG复配组合
进行复试,结果见表4,可看出稀释1600倍时AC、AD、
AF、AG、CF、DG、EF有很强的抑制作用;稀释 2400倍
时AD、AF、AG、DG有很强的抑制作用;稀释 3200倍
时 AD、AG、DG有很强的抑制作用;稀释 4000倍时
AD、AG、DG有很强的抑制作用;稀释 4800倍时AG、
DG有很强的抑制作用。
2.3 复配药剂处理覆土材料对疣孢霉病的防治效果
调查统计复配药剂处理覆土对双孢蘑菇疣孢霉病
的防治效果见表5。从表5可以看出,蘑菇疣孢霉病的
防治效果与不同浓度的药剂组合存在明显差异。其中
AD的 3200倍液与AG的 3200、4000、4800倍液和DG
的3200、4000倍液,均表现出较好的防治效果,其防治
效果分别为 80.1%、94.2%、85.4%、80.8%、90.6%、
84.3%,均在 80%以上。其次为AD的 4000倍液、DG
的 4800倍液,其防治效果分别为 70.3%、79.5%,尤其
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是DG的4800倍液也接近80%。
2.4 复配药剂处理覆土对双孢蘑菇菌丝和子实体生长
的影响
复配药剂处理覆土后,定期观察和调查双孢蘑
菇的菌丝爬土、生长与子实体生长发育情况,结果见
表 6。
药剂组合
AB
AC
AD
AF
AG
CD
CF
CG
DG
EF
FG
对照
1:1600
++
+++
+++
+++
+++
++
+++
++
+++
+++
++
–
1:2400
+
++
+++
+++
+++
++
++
++
+++
++
++
–
1:3200
–
++
+++
++
+++
+
++
–
+++
–
+
–
1:4000
–
+
+++
++
+++
+
–
–
+++
–
+
–
1:4800
–
+
++
–
+++
–
–
–
+++
–
–
–
表4 不同浓度的复配组合药剂对疣孢霉的抑制作用
药剂组合
AC
AC
AC
AD
AD
AD
AF
AF
AF
AG
AG
AG
CF
CF
CF
DG
DG
DG
对照
稀释倍数
3200
4000
4800
3200
4000
4800
3200
4000
4800
3200
4000
4800
3200
4000
4800
3200
4000
4800
-
健康菇数/筐
11.5
9
4.6
18.5
14.9
13.3
15.8
13.2
5.2
21.1
21.6
24.4
11
4.1
3.6
21.3
20.9
20.9
0
病菇数/筐
9.2
13.9
19
4.6
6.3
12.7
9.4
15.2
23.9
1.3
3.7
5.8
11.6
22.7
21.1
2.2
3.9
5.4
24.6
防治效果/%
55.6
39.3
19.5
80.1
70.3
51.2
62.7
46.5
17.9
94.2
85.4
80.8
48.7
15.3
10.5
90.6
84.3
79.5
0
表5 复配药剂处理覆土对蘑菇疣孢霉病的防治效果
注:健康菇数、病菇数取3个重复的平均值。
表6 复配药剂处理覆土对双孢蘑菇的菌丝和子实体生长的影响
药剂组合
AC
AC
AC
AD
AD
AD
AF
AF
AF
AG
AG
AG
CF
CF
CF
DG
DG
DG
对照
稀释倍数
3200
4000
4800
3200
4000
4800
3200
4000
4800
3200
4000
4800
3200
4000
4800
3200
4000
4800
-
子实体数量/框
20.7
22.9
23.6
23.1
21.2
26
25.2
28.4
29.1
22.4
25.3
30.2
22.6
26.8
24.7
23.5
24.8
26.3
24.6
子实体色泽
洁白
洁白
洁白
洁白
洁白
洁白
洁白
洁白
洁白
洁白
洁白
洁白
洁白
洁白
洁白
洁白
洁白
洁白
洁白
子实体菇形
园整
园整
园整
园整
园整
园整
园整
园整
园整
园整
园整
园整
园整
园整
园整
园整
园整
园整
园整
菌丝生长情况
爬土慢2 d,出菇慢2 d
同对照
同对照
爬土慢3 d,出菇慢3 d
爬土慢2 d,出菇慢2 d
同对照
爬土慢2 d,出菇慢2 d
同对照
同对照
爬土慢2 d,出菇慢2 d
同对照
同对照
爬土慢2 d,出菇慢2 d
爬土慢1 d,出菇慢1 d
同对照
爬土慢2 d,出菇慢2 d
同对照
同对照
-
··302
范建奇等:复配杀菌剂对双孢蘑菇疣孢霉病的防治研究
从表 6可以看出,菌丝生长与子实体发育影响因
不同复配药剂及不同浓度而有明显差异。在菌丝生
长、出菇数量、子实体形态方面,AC、AF、AG、DG的
4000、4800倍 2个浓度和AD、CF的 4800倍浓度与对
照无明显差异,而 AC、AF、AG、DG的 3200倍液和
AD、CF的3200、4000倍液均产生不同程度的影响,主
要表现为菌丝爬土与出菇时间比对照推迟 1~3天左
右,出菇量也有所减少。
另外看子实体的外观,所有处理与对照无异样,均
表现为色泽洁白、菇形圆整,且不同浓度之间菇体大小
无规律可循,可见处理覆土的所用复配药剂对子实体
的品质没有显著影响。
3 结论与讨论
本研究采用的杀菌剂均为市场上常见的化学药
剂,在单一化学药剂防治筛选的基础上,对防治效果比
较好的药剂进行复配,然后通过初试、复试和菇床验
证,其实验室平板抑菌测试结果与菇床验证实际效果
基本一致。本研究表明,用4000倍与4800倍的复配杀
菌剂AG(25%腐霉·福美双可湿性粉剂+70%百菌清
可湿性粉剂,体积比 1:1)和 4000倍复配杀菌剂 DG
(40%多·福可湿性粉剂+70%百菌清可湿性粉剂,体
积比 1:1)处理覆土材料,对防治疣孢霉病均有较好的
实效,且对蘑菇的菌丝生长与子实体发育无不良影响,
是较理想的防治双孢蘑菇疣孢霉病的复合杀菌剂,可
在生产中示范和应用。
本次试验的处理覆土只是用了不同复配药剂的相
同浓度组合,用不同浓度组合及直接喷施法治疗发病
蘑菇的防治效果还待研究。另外复配药剂处理覆土
后,出菇方面部分浓度会比对照推迟,前期产量方面部
分浓度会比对照提高,具体原因也有待进一步研究。
虽然本试验没有做发病后的喷药治疗试验,但从
已有研究文献看,覆土是疣孢霉病的主要传染源[13],认为
覆土的药剂消毒防效明显高过得病后喷药的疗效[2]。
因此要降低疣孢霉病的危害,应在栽培的覆土调水阶
段,喷洒各种有效杀菌剂,如除轮流使用有效的单剂
外,更应合理地使用复配剂,以达到更好的防治效果和
降低病原菌株产生耐药性的风险。
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