全 文 ：生产与科研经验
2014年第 40卷第 10期(总第 322期)137
巴西蘑菇与双孢蘑菇菌丝体抗氧化活性和多糖含量的比较
翟飞红1，王琳琳2，韩建荣1
1(山西大学 生命科学学院，山西 太原，030006)
2(北京中医药大学 东方学院渤海校区，河北 沧州，061108)
摘 要 研究了巴西蘑菇与双孢蘑菇经液态发酵后产生的菌丝球的抗氧化活性及多糖含量的差异。巴西蘑菇
菌丝球乙醇提取物的 DPPH·清除能力、还原能力、亚铁离子螯合能力以及超氧阴离子清除能力的 EC50值分别
为 4. 16 、8. 28 、6. 54 和 6. 16 mg /mL，双孢蘑菇菌丝球乙醇提取物的以上各种能力的 EC50值分别为 2. 56 、22. 48、
14. 06 和 7. 16 mg /mL，这表明巴西蘑菇菌丝球的抗氧化活性明显高于双孢蘑菇菌丝球。巴西蘑菇菌丝球多糖含
量为 9. 85%，双孢蘑菇菌丝球多糖含量为 8. 42%。
关键词 巴西蘑菇，双孢蘑菇，菌丝球，抗氧化活性，多糖
第一作者:硕士研究生(韩建荣教授为通讯作者，E-mail:hjr@
sxu． edu． cn．)。
收稿日期:2014 － 04 － 11，改回日期:2014 － 08 － 04
巴西蘑菇(Agaricus blazei) ，其商品名又为“姬松
茸”。其子实体富含多种有效成分，尤其是其子实体
多糖，具有抗病毒、抗肿瘤等作用［1 － 2］。双孢蘑菇
(Agaricus bisporus)为蘑菇属的著名食用菌，因其担子
上通常着生 2 个担孢子而得名。双孢蘑菇肉质肥厚，
味道鲜美且热能低，具有很好的医疗保健作用［3］。
巴西蘑菇与双孢蘑菇同属于蘑菇属，两者在栽培
方法和技术上基本相似。除了其子实体可以利用外，
还可以对其菌丝体的发酵产物加以利用。目前，已有
文献表明两者的子实体均有抗氧化活性［4 － 6］，对于菌
丝体的研究主要集中在液态发酵条件的摸索及氧胁
迫条件下菌丝体的生长状况［7 － 8］，而对其液态发酵菌
丝体多糖含量和抗氧化活性的研究较少。本文研究
了巴西蘑菇和双孢蘑菇经液态发酵获得的菌丝体的
多糖含量和抗氧化活性，为开发利用两种菌的菌丝体
提供理论依据。
1 材料和方法
1. 1 菌种
巴西蘑菇(Agaricus blazei)和双孢蘑菇(Agaricus
bisporus)由本实验室提供，保存于马粪琼脂培养基中。
1. 2 液态培养基［9］
采用玉米黄豆培养基，配方为:玉米粉 20. 0 g，黄
豆粉 10. 0 g，酵母粉 2. 0 g，蔗糖 20. 0 g，MgSO4·7H2O
0. 5 g，CaCO3 1. 0g，(NH4)2SO4 1. 0 g，蒸馏水1 000 mL。
1. 3 试剂
DPPH(1，1-二苯基苦基苯肼) ，由 Sigma 公司生
产;Ferrozine (菲洛嗪) ，由美国 BBI 公司生产;BHT
(2，6-叔丁基-4-甲基酚) ，由英国的 Avocado Ｒesearch
Chemicals 公 司 生 产;K3Fe (CN)6、NaH2PO4、
Na2HPO4、FeCl3、FeCl2、甲硫氨酸、氯化硝基四氮唑蓝
(NBT)、EDTA-Na2、核黄素、苯酚、酒石酸钾钠、
Na2SO3 和3，5-二硝基水杨酸(DNS) ，均为国产分析
纯。
1. 4 菌丝球的收集与处理
将贮藏的巴西蘑菇和双孢蘑菇菌种切块接种于
PDA 培养基上进行活化，将活化后的斜面菌种分别
切成 1 cm ×1 cm的小块，接种于装有 50 mL 液态培
养基的 250 mL三角瓶中，每瓶接种 5 块。接种后在
室温下放置 48 h，然后于 25 ℃、150 r /min 摇瓶培养
7 d。发酵完毕后，过滤收集菌丝球，并用蒸馏水清洗
收集到的菌丝球 2 次。然后将菌丝球置于培养皿中，
60 ℃烘干至恒重，置于密封瓶中备用。
1. 5 抗氧化性物质的提取
准确称取 10 g 干燥后的菌丝体，置于研钵中研
磨，然后分别加入 100 mL的 80%乙醇溶液，于 25 ℃、
130 r /min的摇床上提取 24 h，抽滤，取滤液，滤渣在相
同的条件下复提，合并 2次滤液。滤渣烘干后称重，计
算提取率与初始浓度;滤液在 40 ℃下旋转蒸发，得到
浓缩液，然后用体积分数 80%的乙醇溶液定容，待测。
1. 6 抗氧化性的测定
1. 6. 1 DPPH·清除能力 ［10］
DPPH·是一种稳定的自由基，其乙醇溶液为紫
色，在 517 nm 处有最大吸收峰。当往 DPPH 溶液中
加入自由基清除剂时，溶液颜色会变浅，OD 值变小。
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OD值变小的幅度与 DPPH·被清除的程度呈线形关
系，故可用于检测自由基被清除的程度。
根据文献［10］略做修改。在 2 mL 不同浓度的样
液中加入 2 mL DPPH溶液(0. 08 mol /L) ，摇匀，静置
30 min，对照用 80%的乙醇溶液代替样品，空白管为
样品加 70%的乙醇(DPPH 的溶剂)。517 nm 处测
OD值。DPPH·清除能力(W)计算:
W/% = ( 1 －
A1 － A2
A0
) × 100
式中:A0 为对照吸光度值;A1 为样品吸光度值;
A2 为空白吸光度值。
样品的 EC50值根据其 517 nm 下的样品曲线计
算，BHT用作标准。
1. 6. 2 还原力［11］
当溶液中存在还原剂时，Fe3 +和铁氰化物复合物
会接受还原剂给出的电子转化为 Fe2 + 形式的化合
物，进而两者反应生成普鲁士蓝(Fe4［Fe(CN)6］3) ，
其在 700 nm处有最强吸收峰，溶液颜色会由黄色变
成不同程度的绿色-蓝色，故测定 700 nm 处的 OD 值
即可测定 Fe2 +浓度。OD值越大，还原力越强。
根据文献［11］测定。在 1 mL 不同浓度的样液中
分别依次加入 2. 5 mL 磷酸缓冲液(50 mmol /L，pH
7. 0)和 2. 5 mL 铁氰化钾溶液(1%) ，50 ℃保温 20
min，然后迅速冷却，加入 2. 5 mL 三氯乙酸溶液
(10%) ，离心，取上清液。1. 25 mL 上清液中依次加
入 1. 25 mL蒸馏水和 0. 25 mL 氯化铁溶液(0. 1%) ，
混合均匀，静置 10 min，700 nm处测 OD值。
样品的 EC50值根据其 700 nm 下的样品曲线计
算，BHT用作标准。
1. 6. 3 Fe2 +螯合能力［12］
根据文献［12］所报道的方法进行了部分修改。在
1. 6 mL不同浓度的样液中分别依次加入 1. 6 mL 蒸
馏水、0. 4 mL FeCl2(0. 5 mmol)、0. 4 mL 菲洛嗪(0. 5
mmol /L) ，然后剧烈摇动 1 min，室温放置 20 min 后，
562 nm处测 OD 值。空白管(A0)用蒸馏水代替样
液。Fe2 +螯合能力(M)计算:
M /% =
A0 － A1
A0
× 100
式中:A1 为样品吸光度值;A0 为空白吸光度值。
样品的 EC50值根据其 562 nm 下的样品曲线计
算，EDTA用作标准。
1. 6. 4 O －2 ·的清除能力
［13］
核黄素-蛋氨酸溶液被光照激发后，核黄素会与
O2 反应生成 O
－
2 ·。此时，生成的自由基会将 NBT
还原为甲月朁(CN4H4) ，呈蓝色，在 560 nm处有特征
吸收峰。当往溶液中加入超氧阴离子自由基清除剂
时，其 OD 值会降低。因此比较加入提取液前后的
OD值的变化，可以判断提取液对超氧阴离子自由基
的清除能力。
根据文献［13］方法略做修改。1 mL 磷酸缓冲液
(50 mmol /L，pH 7. 8)中分别依次加入 0. 3 mL 甲硫
氨酸溶液(130 mmol /L)、0. 3 mL 氯化硝基四氮唑蓝
(NBT，750 μmmol /L)、0. 3 mL EDTA-Na2(100 μmol /L)、
0. 3 mL核黄素溶液(20 μmol /L) ，混匀后加入 2 mL
不同浓度的样液。在 3 000 lX 光照下放置 20 min
后，320 nm处测 OD值。O －2 ·清除能力(C)计算:
C /% =
A对照 － A样品
A对照
× 100
其中:“A样品”是指不同浓度样品的吸光度，“A对
照”是指对照的吸光度样品的 EC50根据抗氧化剂活
性比例和样品浓度图来计算。
1. 7 菌丝球多糖的提取
准确称取 3 g 干燥后的菌丝体，置于研钵中研
磨，转移至锥形瓶中，加入 60 mL NaOH(1 mol /L) ，
80 ℃ 水浴 4. 5 h，5 000 r /min 离心 10 min，取上清
液，以相同的方法对残渣进行复提。合并 2 次滤液，
70 ℃旋转浓缩，得浓缩液。向浓缩液中加入 3 倍体
积的 95%乙醇，静置 6 h，5 000 r /min 离心 10 min，取
沉淀，将沉淀用蒸馏水定容至 50 mL，备用。
1. 8 多糖含量的测定
1. 8. 1 总糖含量的测定
采用苯酚-硫酸法［14］。将定容至 50 mL 的样品
液稀释 50 倍，吸取 1 mL，然后加入 1 mL 蒸馏水，
1 mL苯酚(6. 0%)及 5 mL 浓 H2SO4，静置 10 min，摇
匀，室温下放置 20 min，490 nm 处测 OD 值。空白对
照用蒸馏水代替样品液。
1. 8. 2 还原糖含量的测定
采用 3，5-二硝基水杨酸法［15］。吸取定容至 50
mL的样品液各 2 mL，加入 1 mL 蒸馏水，3 mL DNS，
加热并煮沸 7 min，迅速用流水冷却至室温，550 nm
处测 OD值。空白对照用蒸馏水代替样品液。
1. 8. 3 多糖含量的计算
多糖含量 /% =总糖含量 /% －还原糖含量 /%
1. 9 统计学分析
实验设 3 次重复，实验结果用 SPSS 软件(版本
18. 0)Duncan多重比较法［16］进行多个均数间的两两
生产与科研经验
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比较和 T检验。
2 结果与分析
2. 1 DPPH·清除能力的比较
从图 1 可以看出，当巴西蘑菇与双孢蘑菇菌丝球
提取液的浓度从 3 mg /mL提高到 15 mg /mL时，二者
的 DPPH·清除能力也逐渐增强。当浓度为 3 mg /
mL和 6 mg /mL时双孢蘑菇菌丝球提取液的 DPPH·
清除能力要高于巴西蘑菇，且差异显著;当提取液浓
度为 9 、12 、15 mg /mL时，双孢蘑菇菌丝球提取液的
清除能力仍高于巴西蘑菇，但差异不显著，而且随着
浓度的升高，两者差异逐渐变小;当提取液浓度为 15
mg /mL时，双孢蘑菇对 DPPH·的清除率为 88. 4%，
巴西蘑菇为 86. 97%。
图 1 巴西蘑菇与双孢蘑菇菌丝球提取液的
DPPH·清除能力
注:图 1 中不同字母的数据差异显著(P ＜ 0. 05)
Fig. 1 Scavenging effect on DPPH radical of
Agaricus blazei and Agaricus bisporus’s mycelial pellets
2. 2 还原力的比较
由图 2 可以看出，当菌丝球提取液的浓度从
3 mg /mL提高到 15 mg /mL 时，二者的还原力均逐
渐增强，且巴西蘑菇的还原力高于双孢蘑菇。当
浓度较低时，两种菌的还原力差异不显著，当浓度
增加到 15 mg /mL 时，两种菌的还原力有显著性差
异。
2. 3 Fe2 +螯合能力的比较
从图 3可以看出，当菌丝球提取液浓度从 3 mg /mL
提高到 15 mg /mL 时，巴西蘑菇与双孢蘑菇菌丝球提
取液的 Fe2 +螯合能力均逐渐增强，巴西蘑菇菌丝球
提取液在各个浓度下的 Fe2 +螯合能力分别是双孢蘑
菇的 5. 18、2. 01、1. 79、1. 35、1. 28 倍。当浓度为 15
mg /mL时，巴西蘑菇菌丝球提取液的 Fe2 +螯合能力
可达到 86. 38%，而双孢蘑菇仅为 66. 56%。由此可
得，巴西蘑菇菌丝球提取液的 Fe2 +螯合能力高于双
图 2 巴西蘑菇与双孢蘑菇菌丝球提取液的还原力
Fig. 2 Ｒeducing power of Agaricus blazei and
Agaricus bisporus’s mycelial pellets
孢蘑菇，且差异极显著。
图 3 巴西蘑菇与双孢蘑菇菌丝球提取液的
Fe2 +螯合能力
Fig. 3 Ferrous Ions’chelating capacity of
Agaricus blazei and Agaricus bisporus’s mycelial pellets
2. 4 O －2 ·清除能力的比较
从图 4 可知，当菌丝球提取液浓度从 3 mg /mL
提高到 15 mg /mL 时，巴西蘑菇与双孢蘑菇的 O －2 ·
清除能力均逐渐增强;当浓度较低时，巴西蘑菇菌丝
球提取液的 O －2 ·清除能力要显著高于双孢蘑菇，当
浓度增大至 15 mg /mL时，两种菌差异不显著。由此
可得，两种菌对超氧阴离子均有一定的清除能力，而
且巴西蘑菇菌丝球提取液的 O －2 ·清除能力要高于
双孢蘑菇。
2. 5 抗氧化性各指标 EC50值的比较
由表 1 可以看出，对于还原力，巴西蘑菇的 EC50
值远低于双孢蘑菇的(仅为其 36. 8%) ;对于 Fe2 +螯
合能力，巴西蘑菇的 EC50值也明显低于双孢蘑菇，其
EC50值为双孢蘑菇的 46. 5%;对于 O
－
2 ·的清除能
力，巴西蘑菇的 EC50值略低于双孢蘑菇，其 EC50值为
双孢蘑菇的 86. 0%;而对于 DPPH·的清除能力，巴
西蘑菇的 EC50值则高于双孢蘑菇(其 EC50值为双孢
蘑菇的 1. 6 倍)。经 T 检验，巴西蘑菇与双孢蘑菇菌
丝球提取液各抗氧化活性指标的 EC50值差异显著。
食品与发酵工业 FOOD AND FEＲMENTATION INDUSTＲIES
140 2014 Vol. 40 No. 10 (Total 322)
图 4 巴西蘑菇与双孢蘑菇菌丝球提取液
O －2 ·清除能力的比较
Fig. 4 Superoxide anion’s scavenging capacity of
Agaricus blazei and Agaricus bisporus’s mycelial pellets
综上所述，巴西蘑菇菌丝球提取液的抗氧化活性要明
显高于双孢蘑菇菌丝球提取液的抗氧化活性。
表 1 巴西蘑菇与双孢蘑菇菌丝球抗氧化活性
各指标 EC50值的比较
Table 1 Comparison of EC50 index of antioxidant
activity between Agaricus blazei and Agaricus bisporus’s
mycelial pellets
样品
EC50值 /(mg·mL －1)
DPPH·
清除能力
还原力
的测定
Fe2 +
螯合能力
O －2 ·
清除
巴西蘑菇 4. 16 8. 28 6. 54 6. 16
双孢蘑菇 2. 56 22. 48 14. 06 7. 16
2. 6 多糖含量的比较
由表 2可以看出，巴西蘑菇与双孢蘑菇菌丝球的
多糖含量差异显著，巴西蘑菇菌丝球的多糖含量达到
9. 85%，而双孢蘑菇菌丝球的多糖含量为 8. 42%。巴
西蘑菇菌丝球的多糖含量要比双孢蘑菇高 16. 98%。
表 2 巴西蘑菇与双孢蘑菇菌丝球多糖含量的比较
Table 2 Comparison of polysaccharides content between
Agaricus blazei and Agaricus bisporus’s mycelial pellets
样品 总糖含量 /% 还原糖含量 /% 多糖含量 /%
巴西蘑菇 10. 32 0. 47 9. 85
双孢蘑菇 9. 72 1. 48 8. 42
3 讨论
结果表明，巴西蘑菇和双孢蘑菇菌丝球提取液均
具有一定的抗氧化活性，且巴西蘑菇的抗氧化活性和
多糖含量均明显要高于双孢蘑菇。
目前，对食用菌多糖的研究主要集中在其子实体
上，研究表明:香菇子实体为 3. 53%，大杯伞(Clito-
cybe maxima)子实体为 0. 23%，金针菇(Flammulina
velutiper)子实体为 1. 65%，茶树菇(Agrocybe aegirit)
子实体为 0. 92%，鸡腿菇(Copyinds comatus)子实体为
2. 28%［17］，巴西蘑菇子实体多糖含量为 6. 34%［18］，双
孢蘑菇多糖含量为 3. 38%［19］，而对于菌丝体多糖的研
究较少。本实验结果表明:巴西蘑菇和双孢蘑菇菌丝
体的多糖含量分别为 9. 85%和 8. 42%，均高于文献
报道的巴西蘑菇和双孢蘑菇子实体的多糖含量。巴
西蘑菇与双孢蘑菇菌丝体的多糖含量也比香菇、大杯
伞、金针菇、茶树菇和鸡腿菇等子实体的多糖含量高。
这从一个角度证明了巴西蘑菇和双孢蘑菇菌丝体具
有很好的开发利用价值。有文献报道表明采用不同
的多糖提取工艺，多糖的提取率会有较大的差异，如
平菇破碎法提取多糖得率为 11. 20%，超声法提取多
糖得率为 9. 75%，超声辅助复合酶法提取多糖得率
为 12. 05%［20］，水提法多糖得率为 6. 48%［21］，说明提
取工艺对多糖得率以及多糖含量的测定结果有较大
的影响。本实验只用一种方法对巴西蘑菇和双孢蘑
菇菌丝体的多糖进行了提取，下一步有必要借鉴对子
实体的处理方式尝试采用其他方法进行多糖提取，或
许能进一步提高两种菌丝体的多糖得率。
对于食用菌抗氧化活性的研究主要集中在子实体
及其多糖抗氧化活性上。巴西蘑菇子实体的 DPPH·
清除能力的 EC50值为 2. 378 mg /mL，还原力的 EC50值
为 2. 269 mg /mL，Fe2 +螯合能力的 EC50值为 2. 788 mg /
mL［22］，这些数据表明巴西蘑菇子实体的抗氧化性明显
高于巴西蘑菇菌丝体的抗氧化活性。一般来说，食用
菌子实体或菌丝体所含的多糖也有较高的抗氧化活
性［23 － 24］，也就是说食用菌子实体或菌丝体的抗氧化
活性会受到多糖含量的影响。对于食用菌子实体来
说，一般含有较多的活性肽、核苷酸、黄酮类、萜类物
质，而这些物质具有较强的抗氧化活性［25］，这些物质
也必然会影响到子实体的抗氧化活性。所以，如果要
彻底阐明巴西蘑菇子实体的抗氧化活性比菌丝体的
抗氧化活性更强的原因，有必要对巴西蘑菇菌丝体的
活性肽、核苷酸、黄酮类及萜类等物质进行深入分析。
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The comparison of antioxidant activity and polysaccharides content
between Agaricus blazei and Agaricus bisporus’s mycelial pellets
ZHAI Fei-hong1，WANG Lin-lin2，HAN Jian-rong1
1 (School of Life Science，Shanxi University，Taiyuan 030006，China)
2 (The Bohai Campus of Beijing University of Chinese Medicine Dongfang College，Cangzhou 061108，China)
ABSTＲACT The aim of this work was to evaluate the antioxidant activity and polysaccharides content in mycelial
pellets of Agaricus blazei and Agaricus bisporus by liquid state fermentation． The EC50 values of Agaricus blazei in scav-
enging effect on DPPH radical，reducing power，Ferrous Ions’chelating capacity and superoxide anion’s scavenging
capacity were respectively 4． 16mg /mL，8． 28mg /mL，6． 54mg /mL and 6． 16mg /mL． The EC50 values of Agaricus
bisporus in scavenging effect on DPPH radical，reducing power，Ferrous Ions’chelating capacity and superoxide ani-
on’s scavenging capacity were respectively 2． 56mg /mL，22． 48mg /mL，14． 06mg /mL and 7． 16mg /mL． These re-
sults showed that the antioxidant activity in mycelia pellets of Agaricus blazei was superior to that of Agaricus bisporus．
The polysaccharide content of Agaricus blazei was 9． 85%，while the Agaricus bisporus was 8． 42% ．
Key words Agaricus blazei，Agaricus bisporus，mycelial pellet，antioxidant activity，polysaccharide