全 文 ：书食用菌学报２０１４．２１（３）：１～５
收稿日期：２０１４－０６－１０原稿；２０１４－０８－０２修改稿
基金项目：福建省省属公益类科研院所基本科研专项（编号：２０１１Ｒ１０２２－３）、福建省农业科学院科技创新团队项目
（编号：ＣＸＴＤ－１－１３０９）和现代农业产业技术体系建设专项资金（编号：ＣＡＲＳ２４）资助
作者简介：蔡志欣（１９８３－），男，２００９年毕业于福建农林大学微生物学专业，硕士，助理研究员，主要从事食用菌生
物信息学和分子生物学研究。
＊本文通讯作者　Ｅ－ｍａｉｌ：ｉｅｆ．ｆａａｓ＠１８９．ｃｎ
文章编号：１００５－９８７３（２０１４）０３－０００１－０５
双孢蘑菇颜色基因分子标记的初步筛选
蔡志欣，陈美元，廖剑华，李洪荣，郭仲杰，蔡丹凤，王泽生＊
（福建省农业科学院食用菌研究所，特色食用菌繁育与栽培国家地方联合工程研究中心，福建福州３５００１４）
摘　要：以４个白色和４个棕色双孢蘑菇（Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ）菌株，对其５００个随机扩增多态性 ＤＮＡ
（ｒａｎｄｏｍ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ＤＮＡ，ＲＡＰＤ）随机引物进行筛选，筛选出的Ｓ３３、Ｓ４３８、Ｓ４８５　３个引物在棕色
菌株组能扩增出４个特异条带（大小３００～２０００ｂｐ），将特异片段回收，克隆测序，将合成的４对特征序列扩增
区域（ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｒｅｇｉｏｎｓ，ＳＣＡＲ）标记引物对４８个菌株进行验证，结果表明：仅
ＳＣＡＲ４１２００在２４个棕色菌株的２２个中能扩增出特异条带，而所有白色菌株中都没有此条带，表明该标记与棕
色菌株的棕色基因相关。
关键词：双孢蘑菇；子实体颜色基因；随机扩增多态性ＤＮＡ；特征序列扩增区域
　　双孢蘑菇（Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ）是世界人工
栽培最广泛、产量最高、消费量最大的食用菌
之一，具有重要的经济价值［１］。目前，中国双
孢蘑菇主栽品种单一，当家品种 Ａｓ２７９６从育
种至今已使用２０年，面临退化问题，再加上
产业持续健康发展需要，亟须选育适合不同
用途的专用优良新菌株，但野生菌株中很大
一部分为棕色［２］，在利用其进行杂交选育的
过程中如何对杂交后代进行颜色性状筛选是
育种工作面临的重要问题。传统筛选手段需
出菇，工作量巨大。近年来发展的 ＤＮＡ分子
标记辅助育种技术是食用菌定向辅助育种的
重要 方 向，特 征 序 列 扩 增 区 域 （ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｒｅｇｉｏｎｓ，ＳＣＡＲ）标 记
因方便、可靠，可快速检测大量个体等众多优
点已成为目前分子标记在育种实践中直接应
用 的 首 选［３］。笔 者 采 用 随 机 扩 增 多 态 性
ＤＮＡ （ｒａｎｄｏｍ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ＤＮＡ，
ＲＡＰＤ）开展双孢蘑菇颜色相关基因的分子
标记研究，以期获得与颜色性状相关标记，并
转化为能在杂交育种中直接利用的ＳＣＡＲ标
记，这对缩短育种周期、提高育种效率及定向
筛选具有重要意义。
１　材料与方法
１．１菌株
　　本研究供试菌株均为福建省农业科学院食
用菌研究所保藏。所有菌株子实体颜色的基因
型都已经过农艺性状出菇确定。
１．１．１ＲＡＰＤ引物筛选菌株
　　棕 色 菌 株 组：Ｓ６００、ＭＰ９９－１、ＭＣ４４１、
ＡＲＰ０６５；
白色菌株组：Ａｓ２７９６、０２、８２１３、Ａｓ４６０７。
１．１．２ＳＣＡＲ标记验证菌株
　　ＳＣＡＲ标记验证菌株共４８株（表１）。
１．２方法
１．２．１菌丝体培养
　　菌种接入常规ＰＤＡ斜面培养基（２００ｇ马铃
薯，２０ｇ葡萄糖，２０ｇ琼脂，１０００ｍＬ水），２４℃培
养２１ｄ。
１．２．２总ＤＮＡ提取
　　按文献［４］进行。
１．２．３ＲＡＰＤ扩增
　　按文献［５］进行。
DOI:10.16488/j.cnki.1005-9873.2014.03.003
食　用　菌　学　报 第２１卷
表１　ＳＣＡＲ标记验证菌株
Ｔａｂｌｅ　１　Ｓｔｒａｉｎｓ　ｔｅｓｔｅｄ　ｆｏｒ　ＳＣＡＲ　ｍａｒｋｅｒ　ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
编号
Ｎｕｍｂｅｒ
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
编号
Ｎｕｍｂｅｒ
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
１ Ｃ９　 ２５　 ８２１１
２ Ｃ４５　 ２６ Ｗ１９２
３ ＭＳＢ　 ２７ Ｗ２０００
４ ＦＳ－８　 ２８　 ０１
５ Ａｇ７８１３１６　 ２９　 ３８
６ Ａｇ７８１３１５　 ３０　 １１１
７ Ａｇ７８２１　 ３１　 １０７
８ Ａｇ７８３３１１　 ３２　 １２６
９ Ａｇ７８３３１　 ３３ 闽轻Ａ－１（Ｍｉｎｑｉｎｇ　Ａ－１）
１０ Ａｇ７８３３８　 ３４　 ５０
１１ Ａｇ７８３１７　 ３５　 １５
１２ Ａｇ７８３３５　 ３６　 ３３Ｗ
１３ Ａｇ７８３３４　 ３７　 １３Ｄａ
１４ Ａｇ７８３３２　 ３８ 荷兰９２（Ｈｅｌａｎ　９２）
１５ Ａｇ７８３３６　 ３９　 １１９
１６ Ａｇ７８１３１０　 ４０ 沪１０１（Ｈｕ　１０１）
１７ Ａｇ７８１３９　 ４１　 １１７
１８ Ａｇ７８１３１７　 ４２ Ａｇ１８
１９ Ａｇ７８１３２　 ４３ Ａｇ２２
２０ Ａｇ７８１３１　 ４４　 ７０１
２１ Ａｇ７８１３１３　 ４５ 虹桥２２－２（Ｈｏｎｇｑｉａｏ　２２－２）
２２ Ａｇ７８１３１４　 ４６　 １７６
２３ Ａｇ７８１３８　 ４７ ＭＥ
２４ Ａｇ７８１３５　 ４８ 台农 （Ｔａｉｎｏｎｇ）
１～２４基因型为棕色；２５～４８基因型为白色。１～４和２５～４８为栽培菌株；５～２４为野生菌株
Ｓｔｒａｉｎｓ　１－２４：ｂｒｏｗｎ　ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ；ｓｔｒａｉｎｓ　２５－４８：ｗｈｉｔｅ　ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ．Ｓｔｒａｉｎｓ　１－４ａｎｄ　２５－４８ａｒｅ　ｃｕｌｔｉｖａｒｓ，ｓｔｒａｉｎｓ　５－２４ｗｅｒｅ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｗｉｌｄ
１．２．４ＲＡＰＤ产物克隆
　　 将 目 的 条 带 用 手 术 刀 切 出，根 据 美 国
Ｐｒｏｍｅｇａ公司生产的胶回收试剂盒（Ｇｅｌ　ａｎｄ
ＰＣＲ　Ｃｌｅａｎ－ｕｐ　Ｓｙｓｔｅｍ）回收，按照试剂盒说明操
作，将回收片段与ｐＧＥＭ－Ｔ载体相连接转化Ｅ．
ｃｏｌｉ　ＤＨ５ａ，涂平板（含５０μｇ／ｍＬ氨苄青霉素），
蓝白斑筛选。
１．２．５测序及ＳＣＡＲ标记引物合成
　　委托生工生物工程（上海）股份有限公司对重
组质粒的插入片段两端测序。根据片段的碱基序
列设计并合成ＳＣＡＲ标记引物。
ＳＣＡＲ　１（Ｆ：５′－ＣＴＣＴＴＡＴＡＣＣＣＡＴＡＣＴＣ－
ＴＣＡ－３′ Ｒ：５′－ＧＧＡＴＣＴＡＣＡＧＡＣＧＡＧＴＣ－
ＡＡＡ－３′）
ＳＣＡＲ　２（Ｆ：５′－ＧＧＴＴＴＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴ－
ＣＡＡＡＧ－３′Ｒ：５′－ＡＴＣＡＣＡＡＡＣＡＡＧＧＡＡＧ－
ＡＣＡＴ－３′）
ＳＣＡＲ　３（Ｆ：５′－ＴＴＧＣＴＴＣＣＧＡＣＣＡＧＣＡ－
ＡＡＣＧ－３′Ｒ：５′－ＧＴＡＴＴＡＡＧＡＡＡＣＣＡＡＡＧ－
ＴＧＡ－３′）
ＳＣＡＲ　４（Ｆ：５′－ＣＡＡＧＴＡＣＴＧＡＡＡＧＴＧ－
ＴＡＣＴＡ－３′Ｒ：５′－ＧＡＧＣＣＴＴＴＣＣＡＴＧＴＧＣＴ－
ＣＡＣ－３′）
１．２．６ＳＣＡＲ标记引物ＰＣＲ扩增
　　总体积２０ｕＬ扩增体系：菌株基因组总ＤＮＡ
３０ｎｇ，引物１３０ｎｇ，引物２３０ｎｇ，ｄＮＴＰｓ　０．１ｍｍｏｌ／Ｌ，
ＭｇＣｌ２ ．５ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶１Ｕ，１×
ＰＣＲ缓冲液。扩增条件：９４ ℃预变性５ｍｉｎ；
９４℃变性３０ｓ，６０℃退火３０ｓ，７２℃延伸１ｍｉｎ，
扩增３５个循环；７２ ℃延伸１０ｍｉｎ。扩增产物
２０μＬ进行１．５％琼脂糖凝胶电泳。核酸染料
Ｇｅｎｅ　Ｆｉｎｄｅｒ染色并使用ＢＩＯ－Ｖ蓝盾６２１拍照。
２
第３期 蔡志欣，等：双孢蘑菇颜色基因分子标记的初步筛选
２　结果与分析
２．１ＲＡＰＤ扩增与特异条带
　　以８个引物筛选菌株为一组，从５００个的
ＲＡＰＤ随机引物中筛选出Ｓ３３、Ｓ４３８、Ｓ４８５　３个
引物，这些引物在棕色菌株组能扩增出４个特异
条带（大小３００～２０００ｂｐ）（图１）。
２．２ＳＣＡＲ标记验证
　　将图１中箭头标示的４个特异扩增片段回
收，克隆测序，依次命名为Ｓ１～Ｓ４，将合成的４对
ＳＣＡＲ标记引物对４８个菌株进行验证，结果表
明，仅ＳＣＡＲ４１２００在２４个棕色菌株的２２个中能扩
增出特异条带，而所有白色菌株中都没有此条带
（图２），表明该标记与棕色菌株的棕色基因相关。
Ｍ：Ｌａｍｂｄａ　ＤＮＡ／ＥｃｏＲＩ＋ＨｉｎｄＩＩＩ　Ｍａｒｋｅｒｓ，１～８、９～１６、１７～２４分别对应８个菌株，依次为Ｓ６００、ＭＰ９９－１、ＭＣ４４１、ＡＲＰ０６５、Ａｓ２７９６、
０２、８２１３、Ａｓ４６０７；Ｂ：棕色，Ｗ：白色。白色箭头：特异片段。Ｓ３３、Ｓ４５、Ｓ３７６、Ｓ４０８、Ｓ４３８和Ｓ４８５为引物编号
Ｌａｎｅ　Ｍ：Ｌａｍｂｄａ　ＥｃｏＲＩ＋ＨｉｎｄＩＩＩ　ＤＮＡ　Ｍａｒｋｅｒｓ；Ｌａｎｅｓ　１－８，９－１６ａｎｄ　１７－２４：ＲＡＰＤ　ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｓｔｒａｉｎｓ　Ｓ６００，ＭＰ９９－１，
ＭＣ４４１，ＡＲＰ０６５，Ａｓ２７９６，０２，８２１３ａｎｄ　Ａｓ４６０７，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｂｙ　ｐｒｉｍｅｒｓ　Ｓ３３，Ｓ４５，Ｓ３７６，Ｓ４０８，Ｓ４３８ａｎｄ　Ｓ４８５．Ｂ：Ｂｒｏｗｎ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ，
Ｗ：Ｗｈｉｔｅ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ．Ａｒｒｏｗｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｂａｎｄｓ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｔｏ　ｂｒｏｗｎ　ｇｅｎｏｔｙｐｅ　ｓｔｒａｉｎｓ
图１　８个菌株的ＲＡＰＤ引物Ｓ３３、Ｓ４５、Ｓ３７６、Ｓ４０８、Ｓ４３８和Ｓ４８５的扩增图谱
Ｆｉｇ．１　ＲＡＰＤ　ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｅｉｇｈｔ　ｔｅｓｔ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｕｓｉｎｇ　ｒａｎｄｏｍ　ｐｒｉｍｅｒｓ　Ｓ３３，Ｓ４５，Ｓ３７６，Ｓ４０８，Ｓ４３８ａｎｄ　Ｓ４８５
３
食　用　菌　学　报 第２１卷
Ｍ：Ｌａｍｂｄａ　ＤＮＡ／ＥｃｏＲＩ＋ＨｉｎｄＩＩＩ　Ｍａｒｋｅｒｓ；泳道１～４８代表表１中的１－４８号菌株；Ｂ：棕色，Ｗ：白色
Ｍ：Ｌａｍｂｄａ　ＤＮＡ／ＥｃｏＲＩ＋ＨｉｎｄＩＩＩ　Ｍａｒｋｅｒｓ；Ｌａｎｅｓ　１－４８：ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｏｆ　４８ｔｅｓｔ　ｓｔｒａｉｎｓ（１－４８ｉｎ　Ｔａｂｌｅ　１）；Ｂ：Ｂｒｏｗｎ
ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ，Ｗ：Ｗｈｉｔｅ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ
图２　引物ＳＣＡＲ４的扩增图谱
Ｆｉｇ．２　ＳＣＡＲ　ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　４８ｔｅｓｔ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｕｓｉｎｇ　ＳＣＡＲ　４ｐｒｉｍｅｒｓ
３　讨论
　　在双孢蘑菇的辅助杂交育种上，与性状相关
的ＳＣＡＲ标记可以直接运用于菌株特性预测和
遗传筛选。双孢蘑菇重要性状的分子标记如产
质量［６－７］、性亲和［８］、丛生［９］、耐热［１０］及退化［１１］等
都已开展了研究，但真正应用到育种中的标记很
少，其中耐热性状标记片段已成功用于转基因育
种［１２］。在双孢蘑菇子实体颜色性状及相关基因
和分子标记上，先前学者也开展了一些研究工
作。ＣＡＬＬＡＣ等［１３］研究发现，在子实体颜色性
状中，白色为隐性性状并受 ＰＰＣ１ （ｐｉｌｅｉ－ｐｅｌｉｓ
ｃｏｌｏｒ　１）基因单一位点控制，研究还发现ＰＰＣ１
位点与乙醇脱氢酶（ＡＤＨ）基因位点紧密连锁，并
提出ＰＰＣ１ 位点位于中心粒与 ＡＤＨ位点之间
的观点。ＭＯＱＵＥＴ 等［１４］通过数量性状座位
（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｔｒａｉｔ　ｌｏｃｕｓ，ＱＴＬ）定位的方法研究
了双孢蘑菇褐斑病的抗病性状，连锁分析发现，
抗病性状与ＰＰＣ１ 棕色等位基因明显连锁，并推
测ＰＰＣ１ 基因本身可能就是抗性相关基因。
ＬＯＦＴＵＳ等［１５］找到了一个与双孢蘑菇子实体颜
色白色性状连锁的 ＲＡＰＤ标记 Ａ１６１７００，并转化
成ＳＣＡＲ标记Ｌ４３，但该标记的有效性需与限制
性片段长度多态性（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｌａｎｇｔｈ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＲＦＬＰ）相结合，加大了应用的繁
琐度，并且在部分菌株中出现标记与性状分离的
情况。
本研究通过几百个ＲＡＰＤ随机引物的筛选，
获得了与子实体颜色棕色等位基因相关的分子标
记ＳＣＡＲ４１２００，全模板验证表明该标记与子实体棕
色性状紧密连锁。下一步笔者将对该标记在杂交
后代中的分离情况进行验证，该标记有望作为杂交
育种中子实体棕色性状的定向筛选标记。
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［１３］ＣＡＬＬＡＣ　Ｐ，ＭＯＱＵＥＴ　Ｆ，ＩＭＢＥＲＮＯＮ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．
Ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ＰＰＣ１ ，ａ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｉｌｅｉ－
ｐｅｌｉｓ　ｃｏｌｏｒ　ｏｆ　Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ　ｆｒｕｉｔｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．
Ｆｕｎｇａｌ　Ｇｅｎｅｔ　Ｂｉｏｌ，１９９８，２３（２）：１８１－１８８．
［１４］ＭＯＱＵＥＴ　Ｆ，ＤＥＳＭＥＲＧＥＲ　Ｃ，ＭＡＭＯＵＮ　Ｍ，
ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｔｒａｉｔ　ｌｏｃｕｓ　ｏｆ　Ａｇａｒｉｃｕｓ
ｂｉｓｐｏｒｕｓ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｔｏｌａａｓｉ　ｉｓ
ｃｌｏｓｅｌｙ　ｌｉｎｋｅｄ　ｔｏ　ｎａｔｕｒａｌ　ｃａｐ　ｃｏｌｏｒ［Ｊ］．Ｆｕｎｇａｌ
Ｇｅｎｅｔ　Ｂｉｏｌ，１９９９，２８（１）：３４－４２．
［１５］ＬＯＦＴＵＳ　Ｍ，ＢＯＵＣＨＴＩ－ＫＩＮＧ　Ｌ，ＲＯＢＬＥＳ　Ｃ．
Ｕｓｅ　ｏｆ　ａ　ＳＣＡＲ　ｍａｋｅｒ　ｆｏｒ　ｃａｐ　ｃｏｌｏｒ　ｉｎ　Ａｇａｒｉｃｕｓ
ｂｉｓｐｏｒｕｓ　 ｂｒｅｅｄｉｎｇ　 ｐｒｏｇｒａｍｓ ［Ｍ］／／ＶＡＮ
ＧＲＩＥＮＳＶＥＮ．Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｄｉｂｌｅ
Ｆｕｎｇｉ．Ｒｏｔｔｅｒｄａｍ：Ｂａｌｋｅｍａ，２０００：２０１－２０５．
ＰｒｉｍａｒｙＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｍａｒｋｅｒｓ　Ｒｅｌａｔｅｄ
ｔｏ　Ｆｒｕｉｔ　ＢｏｄｙＣｏｌｏｒ　ｉｎ　Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ
ＣＡＩ　Ｚｈｉｘｉｎ，ＣＨＥＮ　Ｍｅｉｙｕａｎ，ＬＩＡＯ　Ｊｉａｎｈｕａ，ＬＩ　Ｈｏｎｇｒｏｎｇ，ＧＵＯ　Ｚｈｏｎｇｊｉｅ，
ＣＡＩ　Ｄａｎｆｅｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｚｅｓｈｅｎｇ＊
（Ｎａｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ　Ｌｏｃａｌ　Ｊｏｉｎｔ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ　＆Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｅａｔｕｒｅｄ　Ｅｄｉｂｌｅ　Ｆｕｎｇｉ；
Ｅｄｉｂｌｅ　Ｆｕｎｇｉ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｆｕｊｉａｎ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ　３５００１４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｒａｎｄｏｍ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｔｅｎｔａｔｉｖｅｌｙ　ｉｄｅｎｔｉｆｙ　ＤＮＡ
ｍａｒｋｅｒｓ　ｌｉｎｋｅｄ　ｔｏ　ｃａｐ　ｃｏｌｏｒ　ｉｎ　ｆｏｕｒ　ｗｈｉｔｅ　ａｎｄ　ｆｏｕｒ　ｂｒｏｗｎ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｏｆ　Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ．Ｔｈｒｅｅ　ｒａｎｄｏｍ　ｐｒｉｍｅｒｓ
（Ｓ３３，Ｓ４３８ａｎｄ　Ｓ４８５）ｔｈａｔ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｆｏｕｒ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｂａｎｄｓ（３００～２０００ｂｐ　ｉｎ　ｓｉｚｅ）ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ｂｒｏｗｎ　ｔｅｓｔ
ｓｔｒａｉｎｓ　ｂｕｔ　ｎｏｔ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ｗｈｉｔｅ　ｔｅｓｔ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｏｕｔ　ｆｒｏｍ　５００ｒａｎｄｏｍ　ｐｒｉｍｅｒｓ．Ａｆｔｅｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ
ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｔｈｅｓｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｂａｎｄｓ，ｆｏｕｒ　ＳＣＡＲ（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ　Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　Ｒｅｇｉｏｎｓ）ｐｒｉｍｅｒ　ｐａｉｒｓ　ｗｅｒｅ
ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇｌｙ　ａｎｄ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ＳＣＡＲ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｙ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｂｒｏｗｎ　ｃａｐ　ｃｏｌｏｒ　ａｍｏｎｇ　４８
（２４ｂｒｏｗｎ，２４ｗｈｉｔｅ）Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ　ｓｔｒａｉｎｓ．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ＳＣＡＲ４
ｐｒｉｍｅｒ　ｐａｉｒ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ａ　ｂａｎｄ　ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ　１２００ｂｐ　ｉｎ　ｓｉｚｅ（ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ　ＳＣＡＲ４１２００）ｉｎ　２２ｏｆ　ｔｈｅ　２４ｂｒｏｗｎ
ｓｔｒａｉｎｓ　ｔｈａｔ　ｗａｓ　ａｂｓｅｎｔ　ｆｒｏｍ　ａｌ　ｔｈｅ　２４ｗｈｉｔｅ　ｓｔｒａｉｎｓ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ｔｈａｔ　ＳＣＡＲ４１２００ ｗａｓ　ｃｌｏｓｅｌｙ　ｌｉｎｋｅｄ　ｔｏ　ａｌｅｌｅｓ
ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｂｒｏｗｎ　ｃａｐ　ｃｏｌｏｒ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ；ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ　ｃｏｌｏｒ；ｒａｎｄｏｍ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ＤＮＡ；ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ
ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｒｅｇｉｏｎ
［本文编辑］　马丹丹
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