全 文 ：［收稿日期］ 20130222(008)
［基金项目］ 国家自然科学基金地区科学基金项目(81060344) ;广西自然科学基金创新研究团队项目(2011GXNSFF018006)
［第一作者］ 郑锡任，在读研究生，从事药品质量控制方法的研究，Tel:13557116814，E-mail:409218101@ qq． com
［通讯作者］ * 陈勇，教授，硕士生导师，从事中药及其制剂质量分析的教学与科研，Tel:18978947922，E-mail:cy6381@ 163． com
·化学与分析·
不同采收期山绿茶药材绿原酸和芦丁的含量比较
郑锡任，张龙，陈勇* ，农莉，刘鼎，李怡萱
( 广西中医药大学药学院，南宁 530001)
［摘要］ 目的:考察不同采收期山绿茶药材中绿原酸和芦丁的含量及其变化规律，为探索山绿茶最佳采收期提供依据。
方法:从 2011 年 7 月至 2012 年 5 月，每隔单月采摘药材 1 次，共 6 次。采用 HPLC 测定，Phenomenex Gemini C18色谱柱 (4. 6
mm × 250 mm，5 μm) ，以乙腈和 0. 1%磷酸进行梯度洗脱，检测波长 330 nm，柱温 30 ℃，流速 1. 0 mL·min －1。结果:绿原酸和
芦丁分别在 0. 10-2. 00 μg，0. 25 ～ 5. 00 μg 峰面积与进样量呈良好的线性关系，回归方程分别为 Y = 4 027X + 5. 262 (r =
1. 000 0) ，Y = 1 258X － 1. 406 (r = 1. 000 0) ，平均回收率分别为 97. 18%和 99. 36%，ＲSD 分别为 1. 27%和 1. 91%。1 月份采
收的山绿茶药材绿原酸和芦丁含量较高，7 月份采收的山绿茶药材绿原酸和芦丁含量较低，山绿茶药材的合理采收时间可定
为 1 月。结论:HPLC测定山绿茶中的绿原酸和芦丁含量的方法分离度良好，快速、准确、稳定、重复性好，可用于山绿茶药材
及其炮制品的质量控制。山绿茶在生长发育过程中，绿原酸和芦丁含量会发生变化且有一定规律。
［关键词］ 山绿茶;绿原酸;芦丁;采收时间;含量测定
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)18-0065-03
［doi］ 10． 11653 /syfj2013180065
Chlorogenic Acid and Ｒutin Content Comparison of
Ilex hainanensis Collected in Different Periods
ZHENG Xi-ren，ZHANG Long，CHEN Yong* ，NONG Li，LIU Ding，LI Yi-xuan
(Faculty of Pharmacy Guangxi Traditional Chinese Medicine University，Nanning 530001，China)
［Abstract］ Objective:Changing regularity of chlorogenic acid and rutin content were detected from Ilex
hainanensis gathered in different periods by HPLC in order to decide the best gathering time． Method:Six samples
of I． hainanensis were collected from July 2011 to May 2012 at every two months． ＲP-HPLC was used to determine
the content of chlorogenie acid and rutin in different periods of I． hainanensis with the chromatographic conditions
of Phenomenex Gemini C18 column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，detected at the wavelength of 330 nm，gradient
elution of acetonitrile-0. 1% phosphoric acid solution as the mobile phase，column temperature of 30 ℃，the flow
rate was 1 mL·min －1 ． Ｒesult:The linearity of chlorogenic acid and Ｒutin were good in the range of 0. 10-2. 00 μg
and 0. 25-5. 00 μg，regress equation were Y = 4 027X + 5. 262 (r = 1. 000 0)and Y = 1 258X- 1. 406 (r =
1. 000 0) ，the average recovery was 97. 18% and 99. 36%，ＲSDs were 1. 27%，1. 91% ． The content of
Chlorogenic acid and Ｒutin were higher in I． hainanensis collected in January，and the content of Chlorogenie acid
and Ｒutin were lower in I． hainanensis collected in July． So the collection time could be set at January．
Conclusion:The determination method of chlorogenic acid and rutin in I． hainanensis is good at resolution and
reproducibility，quickly analysis，accurate and stable，which can be used for the quality control of I． hainanensis．
There are some changing regulations of chlorogenic acid and rutin in llex hainanensis during its growing development
period． The content of chlorogenic acid and rutin will help us to decide the best gathering time for I． hainanensis．
［Key words］ Ilex hainanensis;chlorogenic acid;rutin;gathering time;determination
·56·
第 19 卷第 18 期
2013 年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 18
Sep．，2013
山绿茶为冬青科植物海南冬青的干燥叶，主要
分布于海南、广西、广东等地，已收载于《广西中药
材标准》(1990 年版)［1］和《广西壮药质量标准》(第
1 卷 2008 年版)［2］，具有清热解毒、平肝潜阳、活血
化瘀的功效，民间用于治疗咽喉肿痛等呼吸系统炎
症。近年来研究表明，山绿茶具有明显的降血压、降
血脂作用［3-4］，临床上用于治疗高血压病。山绿茶
含黄酮类、三萜酸类、绿原酸、鞣酸等成分。目前对
山绿茶的研究主要集中在炮制与临床研究等方
面［3-11］，有关不同采收期山绿茶药材中绿原酸和芦
丁的含量测定研究尚未见报道。叶类药材一般是在
植物生长旺盛时和花朵初开时采收，采摘过早，叶片
正在增大，产量、质量都较低;采摘过迟，叶中贮藏的
有效成分转移到花或果实中，产量和质量也会偏低，
故适时采收和药材质量有密切关系［12-13］。本实验
采用高效液相色谱法测定山绿茶中绿原酸和芦丁含
量，通过考察广西上林县 1 ～ 11 月采收的山绿茶中
绿原酸和芦丁含量的动态变化，为确定山绿茶的最
佳采收时间提供实验依据。
1 材料
山绿茶药材采自广西上林县，从 2011 年 7 月至
2012 年 5 月，每隔单月采摘 1 次，共 6 次，经广西中
医药大学陈勇教授鉴定，符合广西中药材标准(1990
年版)山绿茶项下药材品种，鉴定为冬青科冬青属植
物海南冬青 Ilex hainanensis Merr的干燥叶。
绿原酸对照品(上海融禾医药科技发展有限公
司，批号 111231，供含量测定用) ，芦丁对照品(上海
融禾医药科技发展有限公司，批号 120115，供含量
测定用)。
Agilent 1260 型高效液相色谱仪，Agilent 1260
series色谱工作站(美国安捷伦科技公司) ，LG16-
WA型高速微量离心机(北京京立离心机有限公
司) ，KQ5200B型超声清洗器(昆山市超声仪器有限
公司) ，Millipore Simplicity-185 型超纯水器(美国密
理博公司) ，BP211D 型电子分析天平(德国赛多利
斯) ，AE100S型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器
上海有限公司) ，101A-3E 型电热鼓风干燥箱(上海
实验仪器厂有限公司)。
乙腈为色谱纯(Fisher公司) ，水为超纯水，其他
试剂均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司)。
2 方法和结果
2. 1 色谱条件 Phenomenex Gemini C18色谱柱
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相乙腈(A)-0. 1%
磷酸(B) ，按表 1 进行梯度洗脱，检测波长 330 nm，
流速 1. 0 mL·min －1，柱温 30 ℃，进样量 10 μL，理论
塔板数以绿原酸峰计不低于3 000。绿原酸主峰与
前后相邻两峰的分离度不 ＜ 1. 5。液相色谱条件见
表 1，样品及混合对照品溶液色谱图见图 1。
表 1 流动相洗脱程序
t /min 流动相 A /% 流动相 B /%
0 9 91
20 15 85
50 25 75
1. 绿原酸;2. 芦丁
图 1 样品(A)及混合对照品(B)溶液 HPLC
2. 2 混合对照品溶液的制备 取干燥至恒重的绿
原酸对照品 2. 0 mg 和芦丁 5. 0 mg，精密称定，置
10 mL量瓶中，用 50%乙醇溶解并稀释至刻度，摇
匀。精密吸取上述溶液 5 mL，置 10 mL 量瓶中，加
50%乙醇至刻度，摇匀，即得含绿原酸 0. 10 g·L －1和
芦丁 0. 25 g·L －1的混合对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取山绿茶药材干燥粉末
(过 40 目筛)2. 0 g，精密称定，置 100 mL锥形瓶中，
精密加入 50%乙醇 40 mL，称定质量，水浴加热回流
提取 30 min，放冷，用 50%乙醇补足减损的质量，滤
过，取续滤液约 2 mL，离心 10 min(10 000 r·
min －1) ，取上清液作为供试品溶液。
2. 4 线性关系考察 精密吸取经稀释的混合对照
品溶液(含绿原酸 0. 10 g·L －1和芦丁 0. 25 g·L －1)
1，4，8，12，15，20 μL，分别注入高效液相色谱仪测
定，以对照品进样量(μg)为横坐标(X) ，峰面积为
纵坐标(Y) ，绘制标准曲线，计算回归方程 Y绿原酸 =
4 027X +5. 262 (r = 1. 000 0) ，表明绿原酸对照品在
0. 10 ～2. 00 μg与峰面积呈良好的线性;Y芦丁 = 1 258
X －1. 406 (r = 1. 000 0) ，表明芦丁对照品在 0. 25 ～
5. 00 μg与峰面积呈良好的线性关系。
2. 5 方法学考察
2. 5. 1 精密度试验 精密吸取同一混合对照品溶
液 10 μL，重复进样 6 次，分别测定绿原酸与芦丁峰
面积。绿原酸平均峰面积值为 4 005. 97，ＲSD
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第 19 卷第 18 期
2013 年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 18
Sep．，2013
0. 04%(n = 6) ;芦丁平均峰面积为 3 137. 77，ＲSD
0. 10%(n = 6) ，表明仪器精密度较好。
2. 5. 2 稳定性试验 精密吸取同一批供试品溶液
10 μL，在 0，2，4，8，12，24 h 内分别测定峰面积。在
24 h 绿原酸平均峰面积值为1 329. 62，ＲSD 0. 20%
(n = 6) ;芦丁平均峰面积值为 923. 60，ＲSD 1. 81%
(n = 6)。说明供试品溶液在 24 h内稳定。
2. 5. 3 重复性试验 取同一批供试品，精密称取
2. 0 g，共取 6 份，按供试品溶液制备项下方法制备，
进样测定。绿原酸平均含量为 0. 631 3 mg·g －1，
ＲSD 0. 33%;芦丁平均含量为 1. 441 9 mg·g －1，ＲSD
0. 86%。说明供试品溶液重复性良好。
2. 5. 4 加样回收试验 取已知含量(绿原酸含量
为 0. 86 mg·g －1，芦丁 1. 24 mg·g －1)山绿茶(2011-
09)干燥粉末 6 份，每份 1 g，精密称定，分别加入一
定量绿原酸对照品溶液(0. 504 0 g·L －1)和芦丁对
照品溶液(0. 499 6 g·L －1) ，按 2. 3 项下供试品溶液
制备方法处理，按上述色谱条件测定，计算回收率，
结果见表 2。
表 2 绿原酸、芦丁加样回收率测定
成分
原有量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
ＲSD
/%
绿原酸 0. 860 4 0. 680 0 1. 518 8 96. 82 97. 18 1. 27
0. 860 4 0. 680 0 1. 526 8 97. 99
0. 860 3 0. 850 0 1. 676 9 96. 07
0. 860 3 0. 850 0 1. 682 6 96. 73
0. 860 7 1. 020 0 1. 873 3 99. 28
0. 860 5 1. 020 0 1. 841 6 96. 18
芦丁 1. 241 6 0. 992 0 2. 201 3 96. 74 99. 36 1. 91
1. 241 6 0. 992 0 2. 240 2 100. 66
1. 242 2 1. 240 0 2. 491 9 100. 78
1. 242 4 1. 240 0 2. 454 6 97. 76
1. 242 7 1. 488 0 2. 711 9 98. 74
1. 242 0 1. 488 0 2. 751 7 101. 46
3 含量测定
取不同采收期山绿茶药材，按 2. 3 项下制备供试
品溶液，精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μL，
进样，测定峰面积，用外标法计算各样品中绿原酸和
芦丁的含量，结果见表 3。
表 3 不同采收期山绿茶药材中绿原酸和芦丁含量测定g·L －1
采收时间 绿原酸 芦丁
2012-01 0. 959 1 1. 859 2
2012-03 0. 681 6 1. 713 4
2012-05 0. 584 3 1. 703 1
2011-07 0. 279 0 1. 437 6
2011-09 0. 639 0 1. 574 4
2011-11 0. 678 2 1. 559 1
4 讨论
采用回流法，长时间加热回流提取可能会使绿
原酸受热分解而导致含量下降［13］，因此提取时间不
宜过长，本实验以回流提取 30 min为宜。
在流动相的选择中，经过反复摸索选择酸性流
动相，原因可能为绿原酸是有机酸，酸性条件可抑制
其电离，使峰形稳定，分离度更好。
采用 HPLC测定不同采收期山绿茶药材绿原酸
和芦丁的含量，分离度良好，快速、准确、稳定、重复
性好，可用于山绿茶药材及其炮制品的质量控制。
不同采收时期山绿茶，绿原酸芦丁含量有较大
变化。其中 1 月份采收的山绿茶药材绿原酸和芦丁
的含量最高，7 月份采收的山绿茶药材绿原酸和芦
丁含量较低，提示 1 月份采收山绿茶药材比较适宜，
具体原因还有待进一步研究。
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［责任编辑 顾雪竹］
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