全 文 :单胃动物营养
饲料研究 FEED RESEARCH NO. 19,2015 49
收稿日期:2015 - 04 - 16
第一作者:岳远西,E - mail:yueyuanxi2013@ 163. com
通信作者:史彬林,E - mail:shibinlin@ aliyun. com
黑沙蒿水提物对肉仔鸡免疫及
抗氧化功能的影响
岳远西 史彬林 闫素梅 李 昆 李宗楠 佟满满 苏俊玲 李倜宇
内蒙古农业大学动物科学学院,呼和浩特 010018
摘 要 试验旨在研究黑沙蒿水提物对肉鸡免疫及抗氧化功能的影响。选用 160 只 1 日龄 AA 肉仔鸡,
预饲基础日粮 2 周后随机分为 5 组,每组 4 个重复,每重复 8 只。对照组饲喂基础饲粮,处理组分别饲喂在
基础饲粮中添加质量浓度为 250、500、1 000 和 2 000 mg /kg 黑沙蒿水提物的试验饲粮,试验期 28 d。结果
表明:随着黑沙蒿水提物添加量的增加,试验 14 d时胸腺指数呈趋于显著的一次线性(P = 0. 066)或极显著
的二次曲线(P = 0. 004)剂量依赖关系;试验 28 d时法氏囊指数呈显著的二次曲线(P = 0. 040)增加。试验 14
和 28 d时血清免疫球蛋白 M(IgM)呈显著(P = 0. 035)或趋于显著(P = 0. 055)的二次曲线增加,试验 28 d 时
血清 IgG呈显著的二次曲线(P = 0. 013)增加。试验 28 d时血清总抗氧化能力(T - AOC)和过氧化氢酶(CAT)
呈趋于显著(P = 0. 064)或显著(P = 0. 012)的二次曲线增加,丙二醛(MDA)呈显著的二次曲线(P = 0. 040)
降低。由此可见,日粮中添加适宜剂量的黑沙蒿水提物对肉仔鸡的免疫功能和抗氧化功能均有一定的促进
作用。
关键词 黑沙蒿水提物;肉仔鸡;免疫功能;抗氧化功能
中图分类号:S 831. 5 文献标志码:A 文章编号:1002 - 2813 (2015)19 - 0049 - 05
DOI编号:10. 13557 / j. cnki. issn1002 - 2813. 2015. 19. 013
抗生素能有效地促进动物生长,增强机体免疫
力,但长期使用易造成药物残留和环境污染等问
题。蒿属植物种类繁多,是药用植物中的大类,其
植株粉或提取物等植物性产品含有多糖、黄酮类、
挥发油、萜类、色原酮类和香豆素类等活性成分
(张婉等,2009) ,是天然的中草药饲料添加剂,具
有天然、无害、无残留及高效廉价的特点,可作为
抗生素的替代品。国内外研究表明,蒿属植物可防
治疾病,增强畜禽免疫功能,并且具有极强的自由
基清除能力,可改善抗氧化功能(Ho - Chan 等,
2003;Khalaji等,2011)。黑沙蒿作为菊科蒿属半灌
木植物,主要分布于我国北部及西北部沙地草原,
资源充足,富含黄酮类及有机酸等活性物质,全草
可入药(张继等,2003) ,极具开发前景。然而,关
于蒿属植物对畜禽影响的研究报道较多集中在艾蒿
和青蒿上,而关于黑沙蒿对畜禽影响的报道极为罕
见。因此,试验旨在通过研究日粮中添加不同剂量
黑沙蒿水提物(AOE)对肉仔鸡免疫及抗氧化功能的
影响,为 AOE 在肉仔鸡生产中的合理应用提供
依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验所用黑沙蒿采自内蒙古自治区鄂尔多斯境
内的沙地草原,为 8 月花期,全株收割,阴干后经
加水煮沸提取、浓缩及冻干制成干粉。
1.2 试验设计及饲养管理
试验采用完全随机设计,选取 160 只 1 日龄爱
拔益加(AA)肉仔鸡,用基础日粮预饲 2 周,于 15
日龄时随机分为 5 个日粮处理组,每处理 4 个重
复,每重复 8 只鸡。每重复放在一个鸡笼内饲养,
共 20 个鸡笼。试验开始时各处理间体质量差异不
显著(P >0. 05)。对照组饲喂基础日粮,试验组分别饲
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喂在基础日粮中添加 250、500、1 000 和 2 000 mg /kg
AOE的试验日粮。饲养试验在内蒙古农业大学动物
科学学院试验鸡舍进行,为期 28 d,分为试验前期
和试验后期,各 14 d。饲养过程中各处理组自由采
食和饮水,光照、温度和免疫接种按常规程序进
行。每天观察试验鸡生长健康状况,并记录试验
数据。
1.3 基础日粮组成及营养水平
基础日粮为玉米 -豆粕型日粮,参照美国 NRC
(1994)营养需要配制,为粉状配合饲料,其组成及
营养水平见表 1。
表 1 基础日粮组成及营养水平(风干基础)
项目 试验前期 试验后期
日粮组成 /%
玉米 51. 68 58. 49
豆粕 41. 00 34. 30
大豆油 3. 00 3. 00
磷酸氢钙 1. 90 1. 80
石粉 1. 10 1. 20
食盐 0. 37 0. 37
98%赖氨酸 0. 05 0. 03
蛋氨酸 0. 19 0. 10
预混料 0. 71 0. 71
营养水平
代谢能 /(MJ·kg - 1) 12. 62 12. 87
粗蛋白 /% 21. 84 19. 95
钙 /% 1. 00 1. 00
有效磷 /% 0. 48 0. 46
赖氨酸 /% 1. 40 1. 20
蛋氨酸 /% 0. 56 0. 44
胱氨酸 /% 0. 40 0. 37
注:预混料为每千克全价料提供维生素 A 6 141. 5 和维生素 D3 1
789. 2 IU;维生素 E 7. 99、维生素 K 1. 82、维生素 B1 0. 65、维生素 B2
3. 93、维生素 B6 2. 08、维生素 B12 0. 01、烟酸 18. 06、泛酸钙 6. 65、叶
酸 0. 59、生物素 0. 07、胆碱 332. 28、铁 60. 91、铜 6. 01、锌 65. 75、锰
62. 3、碘 0. 9和硒 0. 21 mg。营养水平中粗蛋白为实测值,其余均为计
算值。
1.4 测定指标及方法
1.4.1 免疫器官指数
试验第 14 天和第 28 天,从每处理组中随机选
取 8 只鸡,每重复 2 只。屠宰后摘取胸腺、脾和法
氏囊,测定免疫器官指数。
1.4.2 血清免疫指标
试验第 14 天和第 28 天,从每处理组中随机选
取 8只鸡,每重复 2只。颈静脉采血,室温静置 1 h,
4 000 r /min离心 15 min,将上层血清分装入 1 mL
离心管中,于 - 20 ℃冰柜中冷冻保存,用于测定血
清中可溶性 CD4、CD8(sCD4 及 sCD8)、免疫球蛋
白 A、免疫球蛋白 G 和免疫球蛋白 M(IgA、IgG 及
IgM)。
1.4.3 血清抗氧化指标
采用 1. 4. 2所制备血清,测定总抗氧化能力(T -
AOC)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶
(GSH - Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛
(MDA)含量。
血清指标均采用 ELISA试剂盒测定,由南京建
成生物技术研究所提供,测定仪器为 STATFAX2100
全自动酶标仪。
1.5 数据处理
试验数据经 Excel整理后,利用 SAS9. 0 软件进
行回归分析。P < 0. 01 表示回归关系极显著,P <
0. 05 表示回归关系显著,P < 0. 10 表示回归关系趋
于显著。
2 结果与分析
2.1 黑沙蒿水提物对肉仔鸡免疫器官指数的影响
从表 2 可见:随着 AOE 添加量的增加,试验
14 d时胸腺指数呈趋于显著的一次线性(P = 0. 066)
或极显著的二次曲线(P = 0. 004)剂量依赖关系,而
脾指数和法氏囊指数未呈现显著的剂量依赖关系;
试验 28 d 时法氏囊指数呈显著的二次曲线(P =
0. 040)增加,而其他 2 项免疫器官指数均没有明显
变化。
表 2 黑沙蒿水提物对肉仔鸡免疫器官指数的影响
项目
黑沙蒿水提物添加量 /(mg·kg - 1)
0 250 500 1 000 2 000
标准
误
P
线性 二次
试验 14 d
胸腺指数 4. 73 5. 38 5. 35 5. 31 4. 33 0. 251 0. 066 0. 004
脾指数 0. 86 0. 88 0. 97 0. 89 0. 85 0. 067 0. 713 0. 621
法氏囊指数 1. 93 2. 04 2. 33 1. 99 1. 90 0. 201 0. 582 0. 649
试验 28 d
胸腺指数 5. 51 5. 55 5. 42 5. 69 5. 65 0. 341 0. 727 0. 939
脾指数 0. 95 0. 90 0. 97 1. 13 1. 01 0. 090 0. 421 0. 392
法氏囊指数 1. 23 1. 47 1. 85 1. 77 1. 65 0. 161 0. 217 0. 040
注:P < 0. 01表示回归关系极显著,P < 0. 05 表示回归关系显著,
P < 0. 10表示回归关系趋于显著。
2.2 黑沙蒿水提物对肉仔鸡血清免疫指标的影响
从表 3 可见:各处理组 IgG 及 IgM 含量均高于
对照组,IgA含量均低于对照组。从回归统计结果
看,随着 AOE添加量的增加,试验 28 d时 IgG呈显
著的二次曲线(P =0. 013)增加,试验 14 和 28 d 时
IgM呈显著(P = 0. 035)或趋于显著(P = 0. 055)的
二次曲线增加;试验全期的 IgA 和前期的 IgG 与
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AOE添加量间均未表现出显著的剂量依赖关系。
此外,各处理组的血清 sCD4 含量均高于对照
组,sCD8 含量均低于对照组,但从统计结果看,
添加 AOE对二者均没有显著影响(P > 0. 05)。
2.3 黑沙蒿提取物对肉仔鸡血清抗氧化指标的影响
从表 4 可见:随着 AOE 添加量的增加,试验
28 d时 T - AOC 和 CAT 呈趋于显著(P = 0. 064)或
显著(P = 0. 012)的二次曲线增加,而 MDA 呈显著
的二次曲线(P = 0. 040)降低;其他各期各项抗氧化
指标均未表现出显著的剂量依赖关系。
3 讨论
3.1 AOE对肉仔鸡免疫器官指数的影响
动物免疫器官是免疫细胞发育及增殖的场所,
其状态决定着机体免疫功能的高低。胸腺主要参与
机体细胞免疫,产生 T 淋巴细胞及单核巨噬细胞。
脾是禽类最大的外周免疫器官,参与机体体液免
疫,能产生大量的淋巴细胞和 B 淋巴细胞。法氏囊
是家禽特有的中枢免疫器官,主导体液免疫,是形
成血清抗体系统的细胞成长和分化的部位。胸腺、
脾和法氏囊的生长发育状态在一定程度上反映着整
个机体免疫水平的高低。Gholamrezaie 等(2013)研
究表明,饲喂肉仔鸡黄花蒿(Artemisia annua)提取
物或干粉均能显著增加其脾指数和法氏囊指数(P <
0. 05)。吴有华等(2014)研究发现,在肉鸡日粮中
添加艾叶粉对肉仔鸡免疫器官的发育均有显著促进
作用,尤其是对法氏囊发育的促进作用最为显著。
试验结果表明,饲喂肉仔鸡 AOE 后,显著增加肉
仔鸡胸腺指数和法氏囊指数(P < 0. 05) ,对脾指数
表 3 黑沙蒿水提物对肉仔鸡血清免疫指标的影响
项目
黑沙蒿水提物添加量 /(mg·kg - 1)
0 250 500 1 000 2 000
标准误
P
线性 二次
IgA /(ng·mL -1)
试验 14 d 60. 00 44. 11 40. 50 51. 333 50. 667 7. 759 0. 899 0. 794
试验 28 d 174. 54 134. 89 126. 41 157. 06 160. 53 24. 839 0. 666 0. 814
IgG /(ng·mL -1)
试验 14 d 779. 35 907. 22 858. 72 845. 83 817. 19 39. 467 0. 839 0. 547
试验 28 d 325. 60 660. 30 549. 97 590. 96 459. 10 47. 772 0. 743 0. 013
IgM /(μg·mL -1)
试验 14 d 9. 52 13. 22 12. 70 12. 17 10. 48 0. 766 0. 662 0. 035
试验 28 d 7. 43 8. 70 8. 11 9. 10 8. 11 0. 362 0. 560 0. 055
sCD4 /(U·mL -1)
试验 14 d 2. 30 2. 41 2. 68 2. 48 1. 83 0. 254 0. 205 0. 158
试验 28 d 1. 94 2. 01 2. 00 2. 11 1. 87 0. 184 0. 878 0. 787
sCD8 /(U·mL -1)
试验 14 d 18. 38 17. 67 17. 30 16. 16 17. 80 0. 906 0. 580 0. 323
试验 28 d 38. 51 32. 88 30. 39 34. 14 35. 63 2. 500 0. 857 0. 481
注同表 2。
表 4 AOE对肉仔鸡血清抗氧化指标的影响
项目
AOE添加量 /(mg·kg - 1)
0 250 500 1 000 2 000
标准误
P
线性 二次
T - AOC / (U·mL -1)
试验 14 d 4. 99 6. 11 5. 67 5. 08 5. 95 0. 359 0. 555 0. 740
试验 28 d 2. 81 3. 71 3. 97 3. 96 3. 10 0. 383 0. 968 0. 064
CAT / (pg·mL -1)
试验 14 d 32. 36 48. 73 55. 98 45. 70 42. 73 5. 299 0. 796 0. 171
试验 28 d 21. 07 31. 95 34. 55 31. 68 28. 07 2. 246 0. 562 0. 012
MDA / (mmol·mL -1)
试验 14 d 17. 76 17. 48 15. 41 16. 15 16. 55 1. 066 0. 607 0. 556
试验 28 d 16. 25 15. 30 13. 25 11. 92 14. 09 1. 199 0. 032 0. 040
GSH - Px / (pg·mL -1)
试验 14 d 21. 21 33. 52 29. 95 22. 67 21. 29 2. 901 0. 412 0. 388
试验 28 d 44. 99 41. 71 38. 43 42. 89 38. 63 2. 450 0. 370 0. 669
SOD / (ng·mL -1)
试验 14 d 36. 52 49. 46 51. 42 44. 42 42. 39 2. 887 0. 749 0. 301
试验 28 d 81. 92 88. 87 93. 24 87. 12 86. 60 7. 203 0. 925 0. 824
注同表 2。
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没有影响。这一结果与其他研究者结果基本一致,
其中对脾发育没有促进作用可能是由于 AOE 所含
成分与上述几种蒿属植物有差异造成的,具体原因
还需要进一步探索。
3.2 AOE对肉仔鸡血清免疫指标的影响
动物免疫力的高低直接影响其生产性能,蒿属
植物中含多种化学成分,其中多糖类能促进胸腺液
反应,有机酸类能增强巨噬细胞的吞噬功能,甙类
能加强网状内皮系统吞噬功能,并能促进抗体生
成,促进抗原抗体反应和淋巴细胞转化等功能,增
强免疫力。
体液免疫应答可防止大多数细菌及某些病毒感
染机体(Mckee等,2007)。Gholamrezaie 等(2013)研
究表明,饲喂肉仔鸡黄花蒿提取物或干粉,可显著
增加肉仔鸡血清中 IgM 和 IgG 含量(P < 0. 05)。刘
晓静等(2011)研究发现,在日粮中添加沙蒿籽粉可
显著增加肉仔鸡血清 IgG 含量(P < 0. 05) ,降低血
清 IgA含量。试验研究结果显示,饲喂添加 AOE的
日粮后,肉仔鸡血清 IgG及 IgM含量显著增加(P <
0. 05) ,IgA含量没有明显变化。这一结果与上述试
验结果基本一致,说明 AOE 对肉仔鸡的体液免疫
有一定的促进作用。
细胞免疫主要依靠 T细胞进行免疫应答,其中
辅助性 T细胞(Th,CD4 +)可促进其他免疫细胞的增
殖、分化和成熟,抑制性 T细胞(Ts,CD8 +)可分泌
T细胞抑制因子,使机体转为免疫抑制状态。二者
的协调与制约,可产生适度的免疫应答,调节机体
的免疫功能。Th和 Ts分别以 CD4 和 CD8 为主要表
面分化抗原,sCD4 和 sCD8 作为 CD4 和 CD8 的可
溶形式散布于外周血中。正常状态下,淋巴细胞自
然释放一定量的 sCD4 和 sCD8,但感染某些疾病
时,其分泌量会发生显著变化。因此,sCD4 和
sCD8 可反映 T 淋巴细胞的活化程度和作为某些疾
病或感染发生的标志,较 T细胞亚群测定更能精确
地反映机体免疫状态。刘晓静等(2011)研究发现,
在肉仔鸡日粮中添加沙蒿籽粉可显著增加血清
sCD4 含量(P < 0. 05) ,降低 sCD8 含量。王荣
(2013)研究发现绢蒿水煎剂因浓度高低可上调或下
调小鼠 CD4 +和 CD8 + T细胞的数量,说明绢蒿水煎
剂对小鼠具有双向免疫调节作用。试验中 AOE 处
理组 sCD4 含量均高于对照组,sCD8 含量均低于对
照组,但并未表现出显著的剂量依赖关系。
总体来说,AOE对肉仔鸡细胞免疫和体液免疫
都有一定的调节作用,可能是提取物中的活性物质
促进了免疫器官发育和免疫细胞分泌,从而达到调
节免疫功能的作用。
3.3 AOE对肉仔鸡血清抗氧化指标的影响
生物体在正常生理代谢过程中会产生自由基,
如超氧阴离子自由基(O2
-·)和羟自由基(·OH)
等,过多的自由基可引发生物膜多不饱和脂肪酸发
生脂质过氧化物反应,损伤膜结构及功能,自由基
还可损伤糖、蛋白质及核酸等生物大分子,导致功
能和代谢紊乱。MDA 即是细胞膜脂质过氧化的产
物,其含量可反映细胞的损伤程度。CAT、SOD 和
GSH - Px作为生物体主要的酶类抗氧化剂,有极强
的自由基清除能力,使自由基的形成与清除处于动
态平衡。T - AOC 是衡量机体抗氧化物质(抗氧化
大分子、小分子和酶等)总抗氧化能力的指标。张德
华等(2011)研究发现,在一定剂量范围内,牡蒿提
取物有降低小鼠肝组织中 MDA 含量、增加 GSH -
Px 和 SOD 含量的作用。Cherian 等(2013)研究发
现,在日粮中添加黄花蒿叶粉可极显著地降低肉仔
鸡胸肌和腿肌中的MDA含量(P < 0. 01)。试验结果
表明,饲喂肉仔鸡 AOE 可显著增加血清 CAT 含量
(P < 0. 05) ,降低 MDA 含量,增强 T - AOC。AOE
中多种活性成分有明显的抗氧化作用,其增强肉仔
鸡体内抗氧化酶活性和清除自由基的能力可保护动
物机体组织细胞免受破坏。
4 结论
日粮中添加适宜剂量的 AOE 可促进肉仔鸡免
疫器官发育,显著增加血清 IgM、IgG 及 CAT 含量
(P < 0. 05) ,降低MDA含量,对肉仔鸡的免疫和抗
氧化功能均有一定的促进作用。
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306 号内蒙古农业大学动物科学学
院 010018
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
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4 结论
从 30 株供试乳酸菌经初筛及复筛得到 1 株能
够有效分解葡聚糖及木聚糖产酸的菌株 ZZU 360,
经鉴定为戊糖片球菌。
ZZU 360 该菌株的特性表现为能够抑制 G +及
G -菌,对环境条件如温度、pH及 NaCl质量分数均
具有较好的生长耐受性,能够利用纤维二糖和密二
糖等碳源,对苜蓿粉、饲料桑粉及饲料槐粉酸化效
果明显,因此 ZZU 360 菌株在可溶性糖短缺的饲料
作物青贮中具有潜在的应用价值。
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