全 文 ：TheprotectiveefectsofShexiangXingnaoningon
globalcerebralischemiareperfusioninjury
WangYang, LiWeizu, YinYanyan, etal
(DeptofPharmacology, AnhuiMedicalUniversity, Hefei　230032)
Abstract　Objective　TostudytheprotectiveefectsofShexiangXingnaoning(SXN)onglobalcerebralischemia/
reperfusioninjuryanditsmechanism.Methods　Theglobecerebralischemia/reperfusionexperimentinducedby
fourvesselsocclusion(4VO)for10minandreperfusionfor24 hwasperformedtosurveytheinfluencesofSXNon
therecoverytimeofrightingreflexandelectricalactivityofbrain, thewatercontentandcerebralindex, theactivity
ofSOD, LDHandNOSandthecontentofMDA, LDinbraintissueandETinhippocampus.Results　Compared
withmodelgroup, SXN(80, 160 mg/kg)significantlypromotedtherecoveryofelectroencephalogramandrighting
reflex.SXN(40, 80 , 160 mg/kg)couldreducethebrainedemaandbrainindexobviously.SOD, LDHactivitiesin-
creased, NOSactivityinhibitedandMDA, LDcontentdecreasedinbrainhomogenateinratstreatedbySXN(80,
160mg/kg).AndSXNmightbeinhibitedETcontentinhippocampalhomogenateinrats.Conclusion　SXNtakes
protectiveefectonglobecerebralischemiainjury.Theroleofantioxidation, decreasingNOSactivityandETcon-
tentmightbecontributedtoitsneuroprotectiveefects.
MeSH　brainischemia;reperfusioninjury;freeradicals
Freeword　ShexiangXingnaoning
天然植物黄蜀葵提取物对变形链球菌生长及产酸的抑制作用
张红艳 1 ,董六一 2 ,杨　柳1 ,黄升海 3 ,李　颂 1
摘要　目的　研究黄蜀葵花总黄酮(TFA)对变形链球菌
(MS)生长及产酸的影响 , 为临床龋病预防提供实验基础。
方法　采用二倍稀释法观察不同浓度的 TFA对 MS生长的
影响 , 测定该药物的最小抑菌浓度(MIC);以低于 MIC的 4
个浓度梯度配置含 TFA的 TPY液体培养基 , 接种 MS, 厌氧
培养 48h,测定在不同培养时间段各浓度 TFA溶液实验前
后的 pH值。结果　一定浓度的 TFA能够抑制 MS的生长 ,
最小抑菌浓度(MIC)为 2.5 g/L;在低于 MIC的 4个浓度梯
度条件下 , 随着 TFA浓度的升高 , 各浓度组在不同培养时间
段 pH值逐渐增高 ,各个浓度组与对照组的 pH变化值差异
均有显著性 (P<0.01), 各浓度组在各个时问段与对照组之
间差异均有显著性 (P<0.01)。结论　TFA影响变形链球
菌的生长代谢 , 使 MS产酸减少。
主题词　植物提取 /药理学;链球菌 ,变异 /药物作用
2009-04-09接收
基金项目:安徽省自然科学基金资助项目(编号:070413141),安徽
省教育厅教研基金资助项目(编号:2006jq1090)
作者单位:安徽医科大学 1口腔医学院 , 2药理学教研室 , 3 微生物学
教研室 ,合肥　230032
作者简介:张红艳 ,女 ,硕士 , 讲师 , 责任作者 , E-mail:toothyan@ 126.
com
自由词　黄蜀葵;细菌生长;细菌产酸
中图分类号　R378.12;R282.7
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2009)04-0479-03
　　龋病是严重危害人类口腔健康的一种疾病 ,变
形链球菌(mutansstreptococci, MS)是口腔中重要的
致龋菌之一[ 1] ,它通过黏附到牙釉质表面的获得性
膜而形成牙菌斑并持续产酸 [ 2] ,在酸的积累作用下
导致牙釉质表面局部脱矿形成龋坏。因此 ,控制致
龋菌的产酸可以减少龋病的发生 、发展 。
黄蜀葵为锦葵科秋葵属植物 ,其主要药用部分
为黄蜀葵花 , 黄蜀葵花总黄酮(totalflavoneofabel-
moschusmanibotmedicm, TFA)是从黄蜀葵的花中提
取的有效成分 ,性甘寒 ,具有清热解毒 、润燥滑肠及
非特异性免疫调节之功效。体外实验表明 TFA有
一定的抗菌作用[ 3] ,但对 MS生长 、产酸作用有无影
响尚不明确。本研究测定了不同浓度的 TFA对 MS
的生长及产酸能力的影响 ,为其应用于龋病防治奠
定实验基础。
·479·安徽医科大学学报　ActaUniversitatisMedicinalisAnhui　2009 Aug;44(4)
1　材料与方法
1.1　材料　TFA:由安徽省医学研究所植化室提
供 ,批号 20010624;TPY培养基;MS国际标准株
ATCC25175由安徽医科大学口腔医学院中心实验
室提供 。
1.2　菌液制备 　将复苏 48 h的 MS菌株接种于
TPY液体培养基中 , 80%N2、20% CO2 , 37℃下厌氧
培养 24 h,经涂片检查后调节菌液浓度达 0.5麦氏
点 ,即菌液浓度 1.5 ×108 CFU/ml,备用 。
1.3　抗菌药物配制　称取 1 gTFA加入无菌生理
盐水 5 ml,充分混匀后制成混悬液 ,调节药液 pH达
7.0, 100℃灭菌 10 min。检菌试验阴性后 4℃保存
备用。
1.4　TFA对 MS最低抑菌浓度(MIC)测定
1.4.1　采用液体试管法测定 MIC　将 MS设 8个
稀释度 ,每个稀释度设 4个复管。同时第 9孔管作
细菌对照 ,第 10孔管作培养基对照。先用 TPY培
养基把 TFA调至 40 g/L。然后用 TPY培养液将
TFA等量(2倍)稀释为 20.00、10.00、5.00、2.50、
1.25…… 0.16 g/L,分别置于试管中(1ml/管 ),每
管加 0.05 ml菌液 ,充分摇均后 80% N2、20% CO2 ,
37℃下厌氧培养 24 h,观察结果。
1.4.2　结果判定　凡药物浓度管外观浑浊者为有
菌生长 ,记为(+);外观清晰者为无菌生长 ,记为
(-),即待测细菌的 MIC,以 g/L表示 。
1.5　TFA对 MS的产酸抑制作用　采用酸度计将
已配制好 TFA溶液和对照组调定初始 pH值为
7.4,实验组按菌液和 TFA1∶10比例接种 MS, 80%
N2和 20% CO2 、37℃条件下分别厌氧培养 6、12、
24、48 h,测定上清液 pH值。实验共分 5组 ,即 4个
不同浓度的实验组和 1个对照组 ,每组 4个平行管 。
每管测定 3次 ,结果取平均值。对照组:TPY液体培
养基(不含 TFA溶液)。
1.6　统计学处理　各浓度药物对细菌产酸抑制作
用的研究数据采用 SPSS10.0统计软件分析 ,选用
单因素方差分析及趋势性检验。
2　结果
2.1　TFA的体外抑菌作用　由表 1可知 , TFA对
MS的 MIC为 2.50 g/L。
表 1　不同浓度 TFA对 MS生长的影响
项　目 组　别
1 2 3 4 5 6 7 8
TFA浓度(g/L) 20.00 10.00 5.00 2.50 1.25 0.63 0.32 0.16
观察结果 - - - - ± + + +
2.2　不同浓度 TFA对 MS产酸抑制作用　在不同
时间间隔测定各浓度组 TFA溶液 MS终末 pH值 ,
见表 2。结果显示 ,随着 TFA浓度降低 ,对 MS产酸
抑制作用逐渐减弱 ,不同 TFA浓度组与对照组相
比 ,差异均有统计学意义(P<0.01)。重复测量数
据的方差分析结果显示 ,不同时间段各浓度组的 pH
值呈逐渐降低的趋势。
3　讨论
龋病是在以细菌为主的多种因素影响下 ,牙体
硬组织发生慢性进行性破坏的一种疾病 ,菌斑微生
物对龋病的发生发展起着决定性作用 [ 4] 。牙菌斑
内的细菌代谢食物中的糖 ,在短时间内产生大量的
乳酸等有机酸 ,使牙釉质中的无机盐发生溶解 ,是龋
病发生的直接原因 。 MS是牙菌斑中最主要的致龋
菌 ,对龋病的发生 、发展起着决定性的作用 。MS可
代谢产生乳酸 、乙酸等多种酸类 ,使菌斑 pH值持续
低于临界 pH值(5.0 ～ 5.5)以下 ,导致牙体硬组织
酸蚀脱矿 、有机物分解 ,最终导致龋病的形成和进一
步发展[ 5] 。抑制致龋菌的产酸 ,则可以阻止其对牙
体硬组织的脱矿 ,从而具有防龋作用。
表 2　不同时间间隔各浓度 TFA溶液对 MS产酸抑制作用
组别 TFA浓度(g/L) 终末 pH值
6h 12h 24h 48h
TFA 1.25 6.99±0.16★★ 6.12±0.14★★ 5.06±0.20★★ 4.38±0.09★★
0.63 6.71±0.13★★ 5.62±0.22★★ 4.55±0.15★★ 4.07±0.11★★
0.32 6.47±0.15★★ 5.20±0.18★★ 4.30±0.09★★ 3.82±0.17★★
0.16 6.14±0.12★★ 4.88±0.17★★ 4.04±0.06★★ 3.57±0.22★★
对照 - 5.86±0.16 4.35±0.19 3.70±0.19 3.29±0.15
　　与对照组比较:★★P<0.01
·480· 安徽医科大学学报　ActaUniversitatisMedicinalisAnhui　2009 Aug;44(4)
　　天然植物资源丰富 ,使用上相对安全而有着良
好的应用前景 ,从天然植物中可以获得较为理想的
防龋制剂。近年来许多学者致力于从天然植物中分
离提取天然抗菌斑和抗龋药物 ,并已初获成效 。如
Nakaharaetal[ 6]研究发现茶中以鞣酸为主的酚类化
合物可抑制 MS的生长及葡糖基转移酶活性 ,减少
酸的产生 ,可用于龋病的预防。国内谢倩 等 [ 7]研究
发现中药五倍子提取物对 6种主要致龋菌(MS、血
液链球菌 、唾液链球菌 、内氏放线菌 、粘性放线菌 、乳
酸杆菌)都有一定的抑制作用 。但是由于天然植物
具有较强的地域特性 ,成分错综复杂 ,这在一定程度
上影响了其有效成分的分离纯化以及作用机制的深
入研究 。
本研究将不同浓度的 TFA与 MS共同培养 ,结
果表明一定浓度的 TFA能够抑制 MS的生长和产
酸 , MIC为 2.5 g/L,且抑菌作用呈现明显的浓度依
赖性。随着 TFA浓度降低 ,对 MS产酸抑制作用逐
渐减弱 ,各溶液 pH值呈逐渐降低的趋势 , pH值的
变化值与 TFA的浓度之间呈剂量依赖性相关;经统
计分析 ,各浓度组与对照组 、TFA各浓度组之间差异
均具有统计学意义(P<0.01)。
黄蜀葵花在我国分布广泛 、来源丰富 ,如何利用
现代科学技术 ,分离纯化鉴定该药用植物的有效成
分 ,深入研究其防龋机制是未来的主攻方向。本研
究表明天然植物黄蜀葵提取物 TFA对 MS的生长和
产酸具有一定的抑制作用。
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生长的影响 [ J] .华西口腔医学杂志 , 2005, 23(1):82-4.
Theexperimentalstudyoftotalflavoneofabelmoschusmanihot(L.)
medicusonthegrowthandacidproductionofS.Mutans
ZhangHongyan1 , DongLiuyi2 , YangLiu1 , etal
(1StomatologyColege, 2DeptofPhamacology, AnhuiMedicalUniversity, Hefei　230032)
Abstract　Objective　Tostudytheefectoftotalflavoneofabelmoschusmanihot(L.)medicus(TFA)onthe
growthandacidproductionofS.Mutans, thustoprovideexperimentalstudybasisforpreventionofcaries.Methods
　ObservingtheefectofdiferentconcentrationTFAonthegrowthofS.Mutans, wedeterminedminimalinhibitory
concentration(MIC)bydoubledilutionmethod.TheefectsofTFAonacidproductionofS.mutanswereexamined
byusingTPYmediawithfourdiferentconcentrationsoftheTFA(2.50, 1.25, 0.63, 0.32 , 0.16 g/L)andanaero-
biccultivatingrespectively.ThepHvalueofthemediumsweremeasured.Results　AcertainconcentrationsofTFA
couldinhibitthegrowthofS.Mutans.TheMICofTFAis2.5g/L.TFAinhibitedthegrowthofthebacteriadose-
dependentlyandThepHvaluewasdescendingwhentheconcentrationsofTFAwasadvancing.Conclusion　TFA
extractscandeterminateinhibitedingefectonthegrowthandacidproductionofS.Mutans.
MeSH　plantextracts/pharmacology;streptococcusmutans/drugefects
Freewords　abelmoschusmanihotLmedic;bacterialgrowth;acidproduction
·481·安徽医科大学学报　ActaUniversitatisMedicinalisAnhui　2009 Aug;44(4)