全 文 ：Vol.29No.5
May2013
赤 峰 学 院 学 报（自 然 科 学 版）
JournalofChifengUniversity（NaturalScienceEdition）
第 29 卷 第 5 期（上）
2013 年 5 月
山药零余子为薯蓣科多年生藤本植物薯蓣(Dioscorea
opposita Thunb.)叶腋间的珠芽[1]，俗称“山药蛋”，呈卵圆形或
椭圆形，直径在0.4-2.0cm之间，外表呈淡黄色，顶端中间略
有茎痕，质坚硬，断面灰白色至灰褐色，气味淡而不苦，口嚼
黏腻.主要含有淀粉、多糖、蛋白质、多种游离氨基酸，胆碱、
尿囊素、植酸、多种维生素、淀粉酶、山药素等物质[2].自古就是
营养价值很高的滋补食品和药用价值很好的药材，但因其
体积小、商品价值不高，每年除少量作种用外，大部分都被
白白扔掉[3].
多酚是一类广泛存在于植物体内的多羟基酚类化合物
的总称，具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、防晒美白、护肝益肾、
抗动脉硬化、防治冠心病与中风等心脑血管疾病以及抑菌
消炎抗病毒等多种生理功能[4].论文以怀山药及其零余子为
供试材料，提取多酚物质并进行含量测定、比较分析，为怀
山药零余子进一步开发利用提供理论依据.
1 材料与方法
1.1 供试材料及处理
怀山药(Dioscorea opposita Thunb.)及其零余子采集于河
南省温县，经淮北师范大学生命科学学院薛建平教授鉴定
为薯蓣科薯蓣属怀山药及其零余子.将怀山药及其零余子用
流动水冲洗，除去附着在表面的泥沙，然后将怀山药（切成
片状）和零余子放入电热鼓风干燥箱中60℃烘干至恒重，将
烘干后的怀山药和零余子粉碎放入干燥器中备用.
1.2 主要仪器
SHH·W21·420三用电热恒温水浴锅 北京东南仪诚
实验室设备有限公司生产；CP213电子分析天平 上海奥
豪斯仪器有限公司生产；RE-52AA旋转蒸发器 上海亚荣
生化仪器厂生产；FDV超微粉碎机 北京环亚天元机械技
术有限公司生产；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵 巩义市予
华仪器有限责任公司生产；755B紫外可见分光光度计，上
海菁华科技仪器有限公司生产.
1.3 主要试剂
没食子酸标准品 生工生物工程（上海）有限公司产
品；1N Folin-Ciocalteu试剂（FC试剂） 上海荔达生物科
技有限公司产品；无水碳酸钠、无水乙醇等均为国产分析纯.
1.4 没食子酸标准液的制备
精密称取干燥至恒重的没食子酸0.0500g，用超纯水溶
解并定容至 100mL，摇匀，即得标准储备液. 精密量取
1.00mL 标准储备液于 50mL 容量瓶中加超纯水定容至
50mL，摇匀，即得浓度为10μg·mL-1的没食子酸标准液，置
于冰箱中保存备用.
1.5 怀山药及其零余子样品溶液的制备
精密称取粉碎并干燥至恒重的怀山药及其零余子样品
各10.0000g，分别装入圆底烧瓶中，加入体积分数为80%乙
醇200mL，摇匀，在70℃水浴中回流提取2h，真空抽滤，洗
涤残渣2次，合并洗涤液.将乙醇提取液减压浓缩至无乙醇
气味，用蒸馏水将浓缩物溶解并定容至50mL作为储备液，
从中量取2.00mL用蒸馏水定容至50mL摇匀、备用.
1.6 Folin-Ciocalteu试剂法比色条件的研究
1.6.1 检测波长的确定
吸取没食子酸标准溶液，显色，用紫外可见分光光度计在
400～900nm范围内扫描，选定最大吸收波长为测定波长[5-6].
1.6.2 显色温度的选择
精密吸取1.00mL没食子酸标准液分别置于10mL试管
中，加入FC试剂1.0mL，摇匀，静置5min，加入质量分数为
10%Na2CO3溶液 2.0mL，摇匀.分别置于 15，20，25，30，35℃
的水浴锅中加热显色150min，在764nm波长处测定吸光值.
1.6.3 显色时间的选择
精密吸取1.00mL没食子酸标准液分别置于10mL试管
中，加入FC试剂1.0mL，摇匀，静置5min，加入质量分数为
Folin-Ciocalteu比色法测定怀山药零余子多酚含量的研究
程云环 1，滕井通 2，薛建平 2，张爱民 2,盛 玮 2
（1.淮北师范大学 化学与材料科学学院；2.淮北师范大学 生命科学学院，安徽 淮北 235000）
摘 要：以没食子酸为标准物质，研究了 Folin-Ciocalteu 试剂法测定怀山药零余子多酚含量的条件.结果表明适宜的显
色条件为:Folin-Ciocalteu 试剂用量 2.0 mL，质量分数为 10% Na2CO3溶液用量 2.0 mL，反应温度 25 ℃，反应时间 150 min，
在此显色条件下于 764mn处测定怀山药及其零余子多酚含量为 0.0447%和 0.0666%；通过加标回收实验，该测定方法的平均
回收率为 98.69 %，RSD为 1.56 %（n=5）.该方法简便、快速、准确，可用于怀山药零余子实际样品的测定.
关键词：怀山药；零余子；Folin-Ciocalteu；多酚
中图分类号：S-3 文献标识码：A 文章编号：1673-260X（2013）05-0017-03
17- -
DOI:10.13398/j.cnki.issn1673-260x.2013.09.036
10%Na2CO3溶液2.0mL，摇匀.将试管放置于25℃的恒温水
浴锅中加热显色，反应时间分别为60，90，120，150，180min，
显色后于764nm波长处测定吸光值.
1.6.4 Folin-Ciocalteu试剂用量的选择
精密吸取1.00mL没食子酸标准液分别置于20mL试管
中，加入FC试剂1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL，摇匀，静置5min，分
别加入同体积的质量分数为10%Na2CO3溶液，置于25℃的
恒温水浴锅中加热显色150min，于764nm波长处测定吸光
值.
1.6.5 Folin-Ciocalteu试剂与10%Na2CO3比例的选择
精密吸取1.00mL没食子酸标准液分别置于10mL试管
中，加入FC试剂1.0mL，摇匀，静置5min，加入不同体积质
量分数为10%Na2CO3溶液，使FC试剂与10%Na2CO3溶液
体积比分别为3∶1，2∶1，1∶1，1∶2，1∶3，置于25℃水浴
锅中加热显色150min，于764nm波长处测定吸光值.
1.7 标准曲线的绘制
分别精密吸取 0，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00mL 标
准储备液于25mL容量瓶中加入蒸馏水定容、摇匀.从上述
不同浓度的溶液中，移取5.00mL到100mL容量瓶中，分别
加入50mL蒸馏水，加入FC试剂2.0mL摇匀，静置5min，加
入质量分数为10%的Na2CO3溶液2.0mL，用蒸馏水定容，置
于25℃的恒温水浴锅中加热显色150min，以试剂空白作参
比，于最大波长处测定吸光值，以没食子酸质量浓度 W
（μg·mL-1）为横坐标，吸光值A为纵坐轴，制作标准曲线[7].
2 结果与分析
2.1 方法学考察结果
2.1.1 检测波长
扫描图谱如图1所示，标准品在400～900nm波长范围
内只有一个单峰，且最大吸收波长为 764nm，因此确定
764nm为检测波长.
2.1.2 显色温度的选择
由图2可知，随着温度升高，吸光值逐渐增大，当温度
到达25℃时，吸光值达到最大值，随后随着温度的升高而降
低，因此选择25℃作为显色温度.
2.1.3 显色时间的选择
由图3可知，随着反应时间的延长，吸光值逐渐增大，
当反应时间达到150min后增加不再明显，曲线变得平坦，
因此选择150min作为显色时间.
2.1.4 Folin-Ciocalteu试剂与10%Na2CO3比例的选择
由图4可知，随着质量分数为10%的Na2CO3溶液加入
量的增加，吸光值逐渐增加，当加入FC试剂与质量分数为
10%Na2CO3溶液的体积比为1∶1时，吸光值达到最大，因
此选择两者体积比1∶1作为显色条件.
2.1.5 Folin-Ciocalteu试剂用量的选择
由图5可知，相同条件下比色液吸光值随FC试剂用量
的增加先增加，后降低，当FC试剂的用量为2.0mL时吸光
值达到最大，因此显色时FC试剂的用量选择2.0mL.
2.1.6 线性关系
由图6可见，没食子酸在浓度为1-6μg·mL-1时，没食
子酸质量浓度与其吸光值呈良好的线性关系，在此范围内
的线性回归方程为A=0.0966W-0.0054，相关系数R2=0.9987.
2.2 总多酚含量测定方法的考察
2.2.1 精密度实验
精密吸取怀山药零余子样品溶液1.00mL置于10mL试
管中，平行5份，各加入FC试剂2.0mL，摇匀，静置5min，加
入质量分数为10%Na2CO3溶液2.0mL，置于25℃的恒温水
图4 FC试剂与10%Na2CO3试剂比例与吸光值的关系
图5 FC试剂用量与吸光值的关系图1 标准品紫外扫描图
图2 反应温度与吸光值的关系
图3 反应时间与吸光值的关系
18- -
图6 没食子酸标准曲线
浴锅中加热显色150min，以试剂空白为参比，于 764nm 波
长处测定吸光值，分别为0.506，0.511，0.513，0.509，0.508，
平均值为0.509，其RSD=0.54%（n=5），显示该方法具有较高
的精密度，能满足样品分析的要求.
2.2.2 稳定性实验
精密吸取怀山药零余子样品溶液1.00mL置于10mL试
管中，加入FC试剂2.0mL，摇匀，静置5min，加入质量分数
为10%Na2CO3溶液2.0mL，置于25℃的恒温水浴锅中加热
显色150min，显色完全后，分别放置 0，10，20，30，40min 测
定吸光值，分别为 0.514，0.513，0.510，0.508，0.504，平均值
为0.510，RSD=0.79%（n=5），表明实验稳定性良好.
2.2.3 加标回收实验
精密吸取0.10mL已知怀山药零余子多酚质量浓度为
1.00mg·mL-1的样品溶液 5 份，分别精密加入含有 40.00，
80.00，120.00，160.00，200.00μg没食子酸对照品溶液，各加
入FC试剂2.0mL，摇匀，静置5min，加入.02mL质量分数为
10%Na2CO3溶液，置于 25℃的恒温水浴锅中加热显色
150min，以试剂空白为参比，于764nm波长处测定吸光值，
序号
Number
对照品含量/μg
Content sofreference substances
测得量/μg
Measured amount
回收率/%
Recovery
平均回收率/%
Average recovery
RSD /%
1 40.00 136.27 97.34
98.69 1.56
2 80.00 177.31 98.51
3 120.00 222.74 101.25
4 160.00 256.45 98.63
5 200.00 293.19 97.73
表1 加标回收实验结果
测定结果并计算回收率及RSD，结果见表1.
2.3 样品多酚含量的测定
分别精密吸取怀山药及其零余子样品溶液1.00mL加
入试管中，各加入 FC 试剂 2.00mL，摇匀，静置 5min，加入
2.0mL质量分数为10%的Na2CO3溶液，置于25℃的恒温水
浴锅中加热显色150min，以试剂空白为参比，于 764nm 波
长处测其吸光值，平行测定3次，得怀山药零余子样品吸光
值分别为 0.509，0.510，0.509，平均值为 0.509，根据标准曲
线回归方程计算出怀山药零余子总多酚含量为0.0666%；怀
山药样品吸光值分别为0.340，0.336，0.339，平均值为0.338，
根据标准曲线回归方程计算出怀山药总多酚含量为
0.0447%.
3 结论与讨论
实验以没食子酸为标准对照品，研究了福林酚试剂法
测定多酚的条件，经试验得出测定波长为764nm，确定了福
林酚试剂的最佳用量为2.0mL、福林酚试剂与质量分数为
10%Na2CO3的最佳比例为1︰1、最佳温度为25℃、反应时
间为150min. 该测定方法的平均回收率为98.69%，RSD为
1.56%，具有较好的精密度.该方法简便、快速、准确，可用于
怀山药及其零余子实际样品的测定.
实验通过对怀山药及其零余子的多酚含量的测定，结
果表明：怀山药总多酚含量为0.0666%，怀山药零余子中总
多酚含量为0.0447%，怀山药零余子中总多酚的含量高于怀
山药.
本研究未对怀山药零余子总多酚及鞣质提取工艺进行
优化，还需进一步加强研究.
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