全 文 ：收稿日期:2014-09-19
作者简介:黄涛阳(1967-)，男，副主任药师，研究方向:医院药学;Tel:020-88654690，E-mail:yang185191@ 163. com。
* 通讯作者:谢新民，Tel:020-88654187，E-mail:mm86121@ 163. com。
HPLC法同时测定榕树叶中 3 种成分含量
黄涛阳1，陈龙浩1，黄 洋2，王 晖3，翁燕君1，黄 和1，谢新民1*
(1. 广州军区广州总医院，广东 广州 510010;2. 广东药学院，广东 广州 510006;3. 广州军区联勤部药品
仪器检验所，广东 广州 510500)
摘要 目的:建立 HPLC同时测定榕树叶中苯甲酸、对羟基苯乙酸、3，5-二甲氧基-4-羟基-苯乙酮 3 种成分含量
的方法。方法:以乙腈-0. 2%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，色谱柱为 Purospher STAＲ C18柱(250 mm × 4. 6
mm，5 μm)，流速为 1. 0 mL /min，检测波长为 270 nm，柱温为 35 ℃。结果:苯甲酸、对羟基苯乙酸、3，5-二甲氧基-4-
羟基-苯乙酮分别在 0. 0121 ～ 1. 21 μg(r1 = 0. 9995)、0. 423 ～ 42. 32 μg(r2 = 0. 9999)、0. 047 ～ 4. 70 μg(r3 = 0. 9996)
范围内线性关系良好，平均加样回收率依次为 100. 7%、101. 2%、96. 5%。结论:该方法简便可行、重复性好，可用
于同时测定榕树叶中苯甲酸、对羟基苯乙酸、3，5-二甲氧基-4-羟基-苯乙酮的含量。
关键词 高效液相色谱法;榕树叶;苯甲酸;对羟基苯乙酸;3，5-二甲氧基-4-羟基-苯乙酮
中图分类号:Ｒ284. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2015)02-0327-03
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2015. 02. 030
Simultaneous Determination of Three Components in Ficus microcarpa Leaves by HPLC
HUANG Tao-yang1，CHEN Long-hao1，HUANG Yang2，WANG Hui3，WENG Yan-jun1，HUANG He1，XIE Xin-min1
(1. Guangzhou General Hospital of Guangzhou Military Command，Guangzhou 510010，China;2. Guangdong Pharmaceutical Universi-
ty，Guangzhou 510006，China;3. Guangzhou Military Logistics Department Institute for Drug and Instrument Control，Guangzhou
510500，China)
Abstract Objective:To develop an HPLC method for the content determination of benzoic acid，4-hydroxyphenylacetic acid and
acetosyringonecas in Ficus microcarpa Leaves. Methods:The determination was performed on Purospher STAＲ C18(250 mm × 4. 6
mm，5 μm). The mobile phase was consisted of acetonitrile-0. 2% phosphoric acid aqueous solution with linear gradient elution and the
flow rate of 1. 0 mL /min. The column temperature was set at 35 ℃ and the detection wavelength was 270 nm. Ｒesults:The linear range
of benzoic acid，4-hydroxyphenylacetic acid and acetosyringonecas was 0. 0121 ～ 1. 21 μg(r = 0. 9995)，0. 423 ～ 42. 32 μg(r =
0. 9999)and 0. 047 ～ 4. 70 μg(r = 0. 9996) ，respectively. The average recovery was 100. 7，101. 2 and 96. 5 respectively. Conclusion:
This method is simple，reproducible，and can be used for determination of three components of benzoic acid，4-hydroxyphenylacetic acid
and acetosyringonecas in Ficus microcarpa Leaves.
Key words HPLC;Ficus microcarpa L. f.;Benzoic acid;4-Hydroxyphenylacetic acid;Acetosyringonecas
榕树叶系桑科榕属植物榕树 Ficus microcarpa
L. f. 的叶，味淡，性凉，具有清热发表、解毒消肿、祛
湿止痛的功效，主治流感、慢性气管炎、百日咳、扁桃
体炎、目赤、牙痛、菌痢、肠炎、乳痈、烫伤、跌打损
伤〔1〕。其主要含有三萜类、酸性鞣质、黄酮类等成
分〔2〕。现有的质量标准大多是对其中的黄酮类成
分进行测定〔3，4〕，笔者对榕树叶水提物提取分离得
到多个化合物，并利用理化性质和光谱数据确定了
化合物结构，且通过 HPLC 归一化法标识了化合物
质量分数，利用谱效关系研究最终得到 3 个药效成
分(另文发表)，而相比较前人研究并未从其药效的
基础上对榕树叶药材进行质量控制，缺乏相关数据。
本文采用 HPLC法对其中 3 个药效成分(苯甲酸、对
羟基苯乙酸、3，5-二甲氧基-4-羟基-苯乙酮)进行含
量测定，以期为客观评价榕树叶质量提供可靠数据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Agilent 1200 高效液相色谱仪(美国安
捷伦科技有限公司);HH-S 型恒温水浴锅(巩义市
予华仪器有限公司);离心机(Thermo Electron corpo-
ration);AUW220D型十万分之一电子天平(日本岛
津公司);涡旋混合器(天津药典标准仪器厂制造);
电热套(海宁市新华医疗器械厂);旋转蒸发器(巩
义市英峪高科仪器厂)。水为超纯水;甲醇、乙腈为
色谱纯;磷酸为分析纯。
1. 2 材料 实验用榕树叶药材采自广州大学城穗
石村，经广东药学院中药学院刘基柱教授鉴定为桑
科榕属植物榕树 Ficus microcarpa L. f. 的叶。苯甲
酸、对羟基苯乙酸、3，5-二甲氧基-4-羟基-苯乙酮对
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照品均为笔者从榕树叶中分离得到(IＲ、NMＲ 等技
术鉴定其结构，质量分数经 HPLC 归一化法检测均
大于 99%)。
2 方法
2. 1 色谱条件 Purospher STAＲ C18色谱柱(250
mm ×4. 6 mm，5 μm);流动相:乙腈(A)-0. 2%磷酸
水溶液(B)，梯度洗脱(0 ～ 20 min，14% A;20 ～ 40
min，14% ～18% A;40 ～ 50 min，18% ～ 14% A);流
速:1. 0 mL /min;检测波长:270 nm;柱温:35 ℃;进
样量:20 μL。
2. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取对照品苯
甲酸 6. 04 mg、对羟基苯乙酸 12. 7 mg、3，5-二甲氧
基-4-羟基-苯乙酮 5. 87 mg，加甲醇溶解定容至 2
mL，作为对照品储备液。分别精密吸取各对照品储
备液适量，用甲醇定容制成苯甲酸、对羟基苯乙酸、
3，5-二甲氧基-4-羟基-苯乙酮质量浓度分别为
0. 055、2. 12、0. 24 mg /mL的混合对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取阴干后的榕树叶约
100 g，剪碎后，用 20 倍量水回流提取 3 次，每次 2
h，浓缩至适当的相对密度后，静置冷却。按部颁标
准用 95%乙醇醇沉至含醇量为 80% ～85%，慢加快
搅，静置 24 h，抽滤，回收乙醇。在旋转蒸发仪上减
压浓缩，加水形成悬浮液定容至 50 mL，即母液浓度
相当于生药量 2 g /mL，取母液 1 mL，加石油醚 3
mL，涡旋 30 s，连续萃取 3 次，弃去上清液，后加乙
酸乙酯萃取 3 次，取有机相，自然挥干，定容至 1
mL。用 0. 22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 空白试验:吸取空白甲醇、混合对照品溶
液、榕树叶供试品溶液各 20 μL，按“2. 1”项下色谱
条件分别进行测定，记录色谱图，结果见图 1。
2. 4. 2 线性关系考察:精密量取“2. 2”项下对照品
储备液，分别稀释至 2 倍、4 倍、10 倍、20 倍、40 倍、
100 倍，得到 7 个系列对照品溶液浓度。分别精密
吸取 20 μL，按“2. 1”项下色谱条件测定，以进样量
X为横坐标，峰面积 Y 为纵坐标，进行线性回归，得
回归方程、相关系数及线性范围分别为 Y1 =
24423X1 + 18. 156，r1 = 0. 9995，0. 0121 ～ 1. 21 μg(苯
甲酸);Y2 = 1683. 6X2 + 36. 365，r2 = 0. 9999，0. 423
～ 42. 32 μg(对羟基苯乙酸);Y3 = 5355. 5X3 +
3. 7724，r3 = 0. 9996，0. 047 ～ 4. 70 μg(3，5-二甲氧
基-4-羟基-苯乙酮)。
2. 4. 3 精密度试验:取同一批榕树叶样品，按
“2. 1”项下色谱条件测定，连续进样 5 次。结果苯
甲酸、对羟基苯乙酸、3，5-二甲氧基-4-羟基-苯乙酮
图 1 空白溶剂(A)、混合对照品(B)与榕树叶
供试品溶液(C)HPLC图谱
1. 对羟基苯乙酸 2. 3，5-二甲氧基-4-羟基-苯乙酮 3. 苯
甲酸
峰面积的 ＲSD依次为 0. 68%、0. 25%、0. 75%，表明
仪器精密度良好。
2. 4. 4 重复性试验:取同一批榕树叶样品 6 份，按
“2. 3”项下方法制备供试品溶液，按“2. 1”项下色谱
条件测定，分别记录苯甲酸、对羟基苯乙酸、3，5-二
甲氧基-4-羟基-苯乙酮峰面积，其 ＲSD 依次为
0. 33%、0. 11%、0. 29%。结果表明方法重复性较
好。
2. 4. 5 稳定性试验:取同一批榕树叶样品，按
“2. 3”项下方法制备供试品溶液，分别在 0、2、4、8、
12、24 h检测苯甲酸、对羟基苯乙酸、3，5-二甲氧基-
4-羟基-苯乙酮峰面积并计算其 ＲSD，依次为
0. 32%、0. 44%、0. 74%。表明供试品溶液在 24 h
内稳定性良好。
2. 4. 6 加样回收率试验:精密量取已知质量浓度
的榕树叶水提取物(苯甲酸 0. 015 mg /mL、对羟基苯
乙酸 1. 68 mg /mL、3，5-二甲氧基-4-羟基-苯乙酮
0. 14 mg /mL)各 0. 5 mL，分别精密加入适量的苯甲
酸、对羟基苯乙酸、3，5-二甲氧基-4-羟基-苯乙酮对
照品。按“2. 3”项下方法制备供试品溶液，按“2. 1”
项下色谱条件测定，记录色谱图并计算加样回收率，
结果见表 1。
2. 4. 7 样品含量测定:按上述方法测定不同采收
期榕树叶样品中苯甲酸、对羟基苯乙酸、3，5-二甲氧
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表 1 加样回收率试验结果
成分 样品中含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
苯甲酸 0. 6008 × 10 －3 0. 604 × 10 －3 1. 202 × 10 －3 99. 5 100. 7 1. 1
0. 6008 × 10 －3 0. 604 × 10 －3 1. 205 × 10 －3 100. 0
0. 6008 × 10 －3 0. 604 × 10 －3 1. 208 × 10 －3 100. 6
0. 6008 × 10 －3 0. 604 × 10 －3 1. 204 × 10 －3 99. 8
0. 6008 × 10 －3 0. 604 × 10 －3 1. 217 × 10 －3 102. 0
0. 6008 × 10 －3 0. 604 × 10 －3 1. 217 × 10 －3 102. 0
对羟基苯乙酸 0. 6737 0. 6675 1. 3475 100. 9 101. 2 0. 23
0. 6737 0. 6675 1. 3484 101. 1
0. 6737 0. 6675 1. 3493 101. 2
0. 6737 0. 6675 1. 3514 101. 5
0. 6737 0. 6675 1. 3509 101. 5
0. 6737 0. 6675 1. 3481 101. 0
3，5-二甲氧基-4-羟基-苯乙酮 0. 0562 0. 0586 0. 1126 96. 2 96. 5 0. 3
0. 0562 0. 0586 0. 1128 96. 6
0. 0562 0. 0586 0. 1127 96. 4
0. 0562 0. 0586 0. 1125 96. 1
0. 0562 0. 0586 0. 113 96. 9
0. 0562 0. 0586 0. 1128 96. 5
表 2 不同采收期榕树叶样品中 3 种成分的含量
采收日期
苯甲酸 /
(mg /mL)
对羟基苯
乙酸 /
(mg /mL)
3，5-二甲氧基-
4-羟基-苯乙
酮 /(mg /mL)
20130101 0. 0030 0. 97 0. 07
20130201 0. 0093 1. 75 0. 05
20130301 0. 0117 2. 99 0. 04
20130401 0. 0158 2. 95 0. 11
20130501 0. 0084 2. 09 0. 03
20130601 0. 0061 1. 23 0. 03
20130701 0. 0151 1. 71 0. 12
20130801 0. 0156 2. 02 0. 04
20130901 0. 0117 1. 14 0. 08
20131001 0. 0102 0. 58 0. 04
20131101 0. 0212 4. 06 0. 02
20131201 0. 0156 2. 67 0. 03
基-4-羟基-苯乙酮的含量，结果见表 2。
3 讨论
实验采用二极管阵列检测器，对 200 ～ 360 nm
范围吸收与分离效果进行考察，结果以高、低极性部
位吸收波长分别为 270 nm时最佳。此外，由于榕树
叶中有机酸成分较多，在流动相系统的选择中，分别
以乙腈-0. 1%磷酸、乙腈-0. 2%磷酸、乙腈-水-冰醋
酸、甲醇-0. 2%磷酸、乙腈-甲醇-0. 2%磷酸等不同体
积分数、不同比例的流动相系统进行等度和梯度洗
脱试验。结果表明，用乙腈-0. 2%磷酸进行梯度洗
脱为佳，此条件下各峰的保留时间适中，基线较平
稳，有利于图谱的分析。
以榕树叶水提物干浸膏作为主成分的咳特灵胶
囊收载于部颁标准《中华人民共和国卫生部药品标
准》(成方制剂第十四分册)中，但目前对榕树叶干
浸膏质量控制标准收载了薄层鉴别方法、检查其水
不溶物和测定其浸出物，这样的质量标准不能准确
地反映其量效关系，究其主要原因，是没有对榕树叶
药效物质基础进行深入研究，从而无法建立准确的
质量控制标准，本文在药效基础上对苯甲酸、对羟基
苯乙酸、3，5-二甲氧基-4-羟基-苯乙酮进行质量控
制，完善了咳特灵胶囊的标准，以期提供适当参考。
参 考 文 献
［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会 . 中华本草
［M］．第二册 . 上海:上海科学技术出版社，1999:496-
497.
［2］戴臻 . 小叶榕叶化学成分及质量控制研究［D］．广州:
广东药学院，2008.
［3］夏杏洲，张辉，魏传晚 . 榕树叶中黄酮类化合物的提取
条件研究［J］．食品研究与开发，2002，(5) :35-37.
［4］戴臻，李书渊，房志坚，等 . HPLC 法测定不同采收期小
叶榕叶中异牡荆苷的含量［J］．广东药学院学报，2008，
24(3):231-235.
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