全 文 ：DeterminationofArtemisinininArtemisiaannunabyHPLC-ELSD
ZHOUAo-ao1 , 2 , ZHENGWen-xin3 , GEFa-huan1
(1.NationalEngineeringResearchCenterforModernizationofExtractionandSeparationProcessofTCM, Guangzhou510240, China;
2.SchoolofLifeScience, SunYat-SenUniversity, Guangzhou510275, China;3.JinanUniversity, Guangzhou510632, China)
Abstract　Objective:AHPLCmethodwasfirstestablishedtodetermineartemisinininArtemisiaannunabyHPLC-ELSD.Arte-
misinininHerbaofArtemisiaannunafromdiferentplaceswasdeterminedbythisnewmethod.Methods:ThemethodutilizedMeOH-
H2O(75∶25)asmobilephasewithflowrateof1ml/min, C18(250×4.6 mm, 5μm)column.Thetemperatureofdetectorwas40℃,
thepressureofN2 was3.5bar, andgainvaluewas9.Results:Thecalibrationcurveswerelinearwithintherangeof1 ～ 5μg, andthe
averagerecoverywas99.33% (RSD=1.97%).Conclusion:Themethodwasrapid, convenient, andaccurate.Itcanbeusedforthe
qualitycontrolofthisherbalmedicine.
Keywords　ArtemisiniannuaL.;Artemisinin;HPLC-ELSD;Contentdetermination
苦蒿中木犀草素的反相高效液相色谱测定方法研究
邵　鹏 ,李明静 ,赵文善 ,王　勇 ,赵东保 ,刘绣华＊
(河南大学化学化工学院 ,河南开封 475001)
　　摘要　目的:建立反相高效液相色谱法测定苦蒿中木犀草素含量。方法:采用 AgilentZorbaxC18色谱柱(21 mm
×150mm, 5 μm);以甲醇-4‰磷酸水溶液(50∶50)为流动相;流速:0.3 ml/min;检测波长:360 nm;柱温:30℃;进样
量:6 μl。结果:在此色谱条件下 , 样品中待测组分得到良好分离。此法测定的线性范围为 2.0 ×10-9 ～ 1.8 ×10-7g,
r=0.9999,平均回收率为 100.6%, RSD=2.13%(n=7)。结论:本方法准确 、灵敏 、回收率高;苦蒿中木犀草素几乎
全部以游离甙元的形式存在。
关键词　高效液相色谱法;苦蒿;木犀草素
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2006)03-0245-02
基金项目:河南省高校杰出科研人才基金(2004KYCX018)
　　＊通讯作者:刘绣华 , Tel:(0378)2192451, E-mail:Liuxiuhua@ henu.edu.cn
　　苦蒿(Centaureapicris)为菊科多年生草本植物 ,
高约 50 cm,多分枝 ,生于山坡 、林缘 、荒地等较干旱
处 〔1〕。主要分布于新疆 、甘肃 、宁夏 、内蒙古 、陕西 、
山西 、河北 ,在伊朗 、苏联 、蒙古也有分布。据 《新疆
中草药手册 》记载:苦蒿具有清热解毒 ,活血消肿的
功效。民间用于治疗疥疮 、痈疽 、无名肿毒 、关节炎
等 。关于苦蒿植物的化学成分研究已有较多报道 ,
但主要报道的化学成分是从脂溶性部位分离得到的
具有愈创木脂型骨架的倍半萜内酯 〔2、3〕。本课题组
正在对其水溶性部位进行系统的分离研究 ,得到了
一系列黄酮类化合物 ,木犀草素是其主要成分之一 ,
但对该植物中木犀草素含量的测定尚未见到报道 。
本文采用反相高效液相色谱法建立了苦蒿中木犀草
素含量的测定方法。结果表明 ,该方法简便 、准确可
靠 ,获得了满意的结果 。
1 　仪器与试剂
Agilent1100 Series自动进样高效液相色谱仪 ,
Agilent1100 Series二级管阵列检测器(DAD)。
甲醇为色谱纯 ,其它试剂均为分析纯 。木犀草
素对照品由中国生物制品检定检验所提供 ,经鉴定
纯度为 99.9%。
苦蒿采自甘肃兰州兰山 ,经兰州医学院张永红
博士鉴定为菊科植物 Centaureapicris。全草晾干后
粉碎备用 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:AgilentZorbaxC18(21mm
×150mm, 5 μm),流动相:甲醇 -4‰磷酸水溶液(50
∶50);流速:0.3 ml/min;检测波长:360 nm;柱温:
30℃;进样量:6 μl。在该液相色谱条件下 ,样品中
待测组分得到良好分离 。
2.2　对照品溶液的制备　精密称取木犀草素对照
品 10 mg,置 100 ml量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻
度 ,摇匀 ,即得 。
2.3　供试品溶液的制备　精密称取干燥苦蒿粉末
3.0 g左右 ,共 3份 ,置于 250 ml圆底烧瓶中 ,加入
90ml石油醚浸提 2 h(温度维持 85℃),过滤后残渣
再用 90 ml95%的乙醇提取两次 ,合并滤液 ,用旋转
蒸发器浓缩近干 ,将浓缩液转移至 25 ml容量瓶中 ,
·245·中药材第 29卷第 3期 2006年 3月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2006.03.016
用无水甲醇定容 ,待测 。
2.4 　标准曲线的制备及线性关系的考察　精密吸
取对照品溶液 1.0 μl, 2.0 μl, 4.0 μl, 5.0 μl, 6.0
μl, 8.0μl, 10.0μl,按上述色谱条件测定 ,以木犀草
素峰面积(Y)为纵坐标 ,进样量(X)为横坐标 ,绘制
标准曲线 ,回归方程为:Y=12735.7X-103.8, r=
0.9999,线性范围 2×10-9 ～ 1.8×10-7 g。
2.5 　精密度试验　精密吸取木犀草素标准溶液 ,
连续进样 6次 ,每次进样量 6 μl,木犀草素峰面积相
对标准偏差 RSD=0.09%,精密度良好 。
2.6 　稳定性试验　精密称取苦蒿样品 3.00g,共 2
份 ,按照样品溶液制备方法操作 ,将前者提取液置于
冰箱中(4℃),将后者提取液置于室温下 (25℃ ～
30℃),分别于 1d, 2d, 3d, 5d, 7d测定样品中木犀
草素含量 , RSD分别为 0.62%、 0.86%,峰形良好 ,
稳定性良好 。由于溶剂甲醇的挥发 ,室温下放置的
样品中木犀草素的含量有所升高 ,故样品最好置于
冰箱中 4℃保存 。
2.7 　回收率的影响　取已知含量的供试品 ,分别
加入一定量的木犀草素标准品 ,按样品含量的测定
方法测定 ,平均回收率为 100.6%, RSD=2.13%(n
=7)。
2.8 　样品含量测定　在上述色谱条件下测定木犀
草素的含量 ,得到苦蒿中木犀草素的含量为:每 100
g样品含木犀草素 9.300 mg, RSD=2.0%。
3 　讨论
3.1 　供试品提取方法的考察　实验中分别用乙酸
乙酯 、75%乙醇 、60%丙酮 、95%乙醇对样品中木犀
草素的提取效果进行了考察。提取液用 HPLC检测
后发现在 tR =6.9 min时几乎没有任何峰出现或峰
形不够良好 。若先用石油醚脱脂再重复上述实验 ,
发现用 95%乙醇液提取效果最好。故本实验采用
先用石油醚脱脂 ,再用 95%乙醇提取样品中木犀草
素 ,该法不仅提取率高而且由于乙醇毒性小 ,廉价易
得 ,故此方法更有实际意义 。
3.2 　提取次数的考察　经实验考察提取三次与提
取两次的提取率差别不大 ,故采用提取两次。
3.3 　木犀草素存在形式的测定　木犀草素在植物
中多以糖甙的形式存在〔4-6〕 ,为了准确测量苦蒿中木
犀草素的含量 ,我们对其进行了水解实验 。
3.3.1　水解酸度的选择:精确称取样品 1.30 g左
右 ,共 9份 ,按上述提取方法提取 ,将提取液浓缩至
10 ml,加入浓盐酸调节酸度 , 1 ～ 3份加入 0.1 ml, 4
～ 6份加入 0.2 ml, 7 ～ 9份加入 0.3 ml,于 85℃水
浴中回流 2h,取出后调溶液 pH值至中性 ,浓缩 ,用
甲醇定容至 25 ml容量瓶中 ,按上述色谱条件进样 ,
记录峰面积 ,见表 1。结果表明随水解酸度的升高 ,
木犀草素的含量并未发生明显变化 ,为此选择水解
酸度为 0.12 mol/LHCl。
　表 1 　水解酸度的选择
0.12mol/l
峰形 面积
0.24mol/l
峰形 面积
0.36 mol/l
峰形 面积
良好 277.25 良好 273.14 良好 278.91
良好 282.43 良好 274.34 良好 268.22
良好 273.62 良好 273.64 良好 267.82
3.3.2　水解时间的选择:精确称取样品 1.20 g左
右 ,共 9份 ,按上述提取方法提取 ,将提取液浓缩至
10 ml,分别加入浓 HCl0.1ml,在 85℃水浴条件下 ,
1 ～ 3份回流 0.5 h, 4 ～ 6份回流 1 h, 7 ～ 9份回流
2.5 h,取出后调溶液 pH值至中性 ,浓缩 ,用甲醇定
容至 25ml参考容量瓶中 ,按上述色谱条件进样 ,记
录峰面积 ,见表 2。结果表明水解时间对木犀草素
含量影响不大 ,为此 ,选择水解时间为 0.5 h。
　表 2 　水解时间的选择
水解 0.5 h
峰形 面积
水解 1 h
峰形 面积
水解 2.5 h
峰形 面积
良好 260.13 良好 256.36 良好 258.12
良好 261.17 良好 264.24 良好 261.74
良好 252.18 良好 261.75 良好 252.34
3.3.3 　提取物中木犀草素的存在形式:精确称取
样品 3.00g左右 ,共 3份 ,按上述提取方法提取 ,水
解 ,按上述色谱条件进样 ,记录峰面积 ,结果发现提
取物水解前后木犀草素的保留值和峰面积均未见明
显变化 ,由此可以判定提取物中木犀草素几乎全部
以游离甙元的形式存在 。
参 考 文 献
[ 1] 江苏新医院 .中药大辞典 .上海:上海人民出版社 ,
1997:1286.
[ 2] StevensKL., etal.Picrolidea:anunusualsesquiterpene
lactonefrom Acroptilonrepens.TheJournalofNatural
Products, 1990, 53(1):218.
[ 3] K.LStevens, etal.Repin, asesquiterpenelactonefrom
Acroptilonrepenspossessingexceptionalbiologicalactivity.
TheJournalofNaturalProducts, 1994, 54(1):276.
[ 4] 胡碧波 , 蒋惠娣 , 杨俊 , 等 .HPLC法测定不同采收期杭
白菊中木犀草素及其苷的含量 .浙江大学学报 , 2004,
33(1):29.
[ 5] 刘金旗 , 吴德林 , 王兰 , 等 .菊花中木犀草素-7-O-β-D-
葡萄糖苷的含量测定 .中成药 , 2001, 23(1):52.
[ 6] 张洪坤 , 国兴明 .应用反相高效液相色谱法测定菊花
中的木犀草素 .贵州大学学报 , 2002, 21(6):424.
(2005-10-20收稿)
·246· 中药材第 29卷第 3期 2006年 3月