全 文 ：亚麻油又称胡麻油,是从亚麻科植物亚麻
(Linumusitatissimum)的种子中榨取得到的,现已成
为世界十大油料作物之一,其产量占第7位〔1〕。亚麻
籽含油35%～45%,属高含油油料作物,由于亚麻籽
油含有大量的不饱和脂肪酸,是目前世界上倍受青
睐的保健油。据报道〔2〕,亚麻油中不饱和脂肪酸占
73%,其中α-亚麻酸约为50%,亚油酸为16%〔3〕。而
α-亚麻酸和亚油酸只能从食物中摄取,在人体内不
能合成,是人体必需的脂肪酸,也称为维生素F。α-
亚麻酸具有重要生理活性,在人体内可转变成EPA
(二十碳五烯酸)和DHA(二十二碳六烯酸),俗称鱼
油〔4〕。临床研究证明,EPA和DHA具有降血脂、抗血
小板聚集、延缓血栓形成等显著疗效,并对胆固醇
的代谢输送和排泄起调节作用〔5〕,是一种前景甚好
的保健品。据文献报道,对亚麻油的成分分析,多采
用气相色谱法〔6〕、红外光谱法(FTIR)和傅里叶变换
拉曼光谱(FT-Raman)法〔7〕。采用高效液相色谱法
(HPLC),亚麻油经甲酯化后再用高效液相色谱进行
测定,测定结果与气相色谱法进行比较,结果表明
本法操作简便、准确、重现性好,是一种新的、有效
的分析方法。
1 仪器与试药
亚麻油中α-亚麻酸含量的测定研究
杨永寿,肖培云
(大理学院药学院,云南大理 671000)
[摘要]目的:建立高效液相色谱法测定亚麻油中α-亚麻酸含量的方法。方法:样品经甲酯化后用高效液相色
谱法进行分析,色谱柱为AgilentC18(4.6mm×150mm,5μm),流动相为甲醇-水(95∶5),流速1.0ml/min,检测波
长210nm,柱温30℃。结果:α-亚麻酸在0.20～2.0μg范围内线性关系良好,回归方程为Y=51.73+154.71X,(r=
0.9998),加样平均回收率为99.66%,RSD为1.06%。结论:本法操作简便、准确、重现性好。
[关键词]高效液相色谱法;亚麻油;α-亚麻酸
[中图分类号]O652.9[文献标识码]A [文章编号]1672-2345(2007)12-0001-03
[基金项目]大理州科技局应用项目基金资助(KY414940)
[收稿日期]2007-08-29
[作者简介]杨永寿(1972-),男(白族),云南云龙人,实验师,主要从事中药质量及控制研究.
Determinationofα-lnolenicacidinlinseed-oil
YANGYong-shou,XIAOPei-yun
(ColegeofPharmacy,DaliUniversity,Dali,Yunnan671000,China)
〔Abstract〕Object:Ahighperformanceliquidchromatographic(HPLC)methodhasbeendevelopedfordetermining!-linolenicacid
inlinseedoil.Methods:ThesamplesweremethylesterizedandanalyzedbyHPLC.Thechromatographicconditionswereasfolows:
thechromatogramwasAgilentC18(4.6mm×150mm,5μm),theproportionofmethanolandwaterwas95∶5;theflowratewas1.0mL/
minandthedetectionwavelengthwas210nmat30℃.Result:Thecalibrationcurveforα-linolenicacidshowedgoodlinearcorela-
tionwithintheconcentrationrangeof0.20-2.0ug(r=0.9998).Theaveragerecoveryofthemethodwas99.66%,andRSDwas1.06%.
Conclusion:Themethodwasconvenient,reliableandhadgoodreappearance.
〔Keywords〕HPLC;linseed-oil;!-linolenicacid
大理学院学报
JOURNALOFDALIUNIVERSITY
第6卷 第12期2007年12月
Vol.6 No.12 Dec.2007
1
1.1 仪器 Agilent1100高效液相色谱仪。包括
G1315A/BDAD检测器和G1313AALS自动进样器;
Agilent1100色谱工作站(美国安捷伦科技有限公
司);梅特勒电子天平AE240(瑞士);SZ-97自动三重
纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂);超声波清洗器
(上海科导超声仪器公司)。
1.2 药品与试剂 甲醇(色谱纯)、水(超纯水)、α-
亚麻酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号
110796-9921)、亚麻油从产地直接购买。
2 实验方法
2.1 色谱条件 色谱柱AgilentSB-C18(4.6mm×
150mm,5μm),流动相甲醇-水(95∶5),流速1.0ml/
min,柱温30℃,检测波长210nm,进样量10μl,亚麻
与α-亚麻酸对照品的HPLC色谱图见图1。
A α-亚麻酸对照品
B 亚麻油样品(1α-亚麻酸对照品)
图1 HPLC色谱图
2.2 试验溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取α-亚麻酸对
照品100mg于100ml量瓶中,加甲醇溶解、定溶,制成
1.0g/L的储备液。
2.2.2 样品溶液的制备 取亚麻油约0.1g于10ml茄
形瓶中,精密称定,加3ml无水甲醇,振摇溶解后滴
加浓硫酸8滴,在水浴温度65～70℃下加热10～
15min,加入3～4ml蒸馏水和1ml乙醚于分液漏斗中,
振荡萃取三次,取乙醚层,将乙醚蒸去,脂肪酸甲酯
用无水甲醇溶解后转移入10ml量瓶中,再用无水甲
醇洗涤二次合并入容量瓶中,定容至刻度。取此液
1ml于50ml量瓶中,用无水甲醇稀释至刻度,待测。
2.3 标准曲线和线性范围 取2.2.1项中制备好的
α-亚麻酸对照品储备液1ml于10ml量瓶中,用甲醇
稀释并定容,即得浓度为0.1g/L的对照品溶液。按2.1
项色谱实验条件,取0.1g/L的对照品溶液,以2、4、8、
10、14、16、18、20μl分别进样3次,测定α-亚麻酸的
峰面积值,以进样量(μg)为横坐标,色谱峰峰面积
为纵坐标作图,得回归方程:Y=51.73+154.71X,r=
0.9998,结果表明进样量在0.20～2.0μg范围之间线
性关系良好。
2.4 重现性试验 精密称取同一批号亚麻油5份,
每份0.1g。按“样品溶液的制备”进行平行处理,在选
定色谱条件下测定α-亚麻酸的含量为52.1%,RSD
为1.80%,分析结果表明重现性较好。
2.5 精密度试验和稳定性试验 精密吸取α-亚麻
酸对照品溶液(0.1g/L),按选择的色谱条件连续进
样6次,其峰面积的RSD为0.31%,表明仪器精密度较
好。取同一样品液,每隔1h进样1次,每次10μl,测定
峰面积,结果表明样品液在6h内稳定,α-亚麻酸峰
面积的RSD为1.63%。
2.6 回收率试验 精密称取已知α-亚麻酸含量
(51.1%)的亚麻油6份,分别精密加入一定量的α-亚
麻酸标准储备液(1.0g/L),照2.5项下方法操作,进行
回收率测定,结果见表1。
表1 回收率试验(n=6)
平均回收率
%
99.63
RSD=1.62
取样量
g
0.03267
0.03264
0.05271
0.05265
0.07283
0.07251
样品中
α-亚麻酸含量mg
16.70
16.68
26.92
26.85
37.47
37.10
加入量
mg
30.00
30.00
20.00
20.00
10.00
10.00
实测
mg
46.12
46.16
47.31
47.18
47.59
47.05
回收率
%
98.20
98.27
101.95
98.65
101.20
99.50
t/min
A
t/min
B
1
2 4
1
2 4
大理学院学报总第48期 自然科学
2
RSD
(%)
1.80
0.92
1.46
样品号
1
2
3
样品中
α-亚麻酸(%)
51.21
50.43
52.46
RSD
(%)
1.25
1.61
0.97
样品号
4
5
6
样品中
α-亚麻酸(%)
48.79
52.36
52.02
2.7 样品的测定 称取6份不同批号的样品,每份
0.1g,制备成供试液,按上述色谱条件进行分析,按
外标法计算α-亚麻酸的含量。结果见表2。
表2 α-亚麻酸的测定结果(n=3)
3 讨论
在选择检测波长时,取α-亚麻酸对照品溶液在
200～360nm波长范围内扫描,结果在205nm波长处
有最大吸收,但此波长处溶剂对样品的测定干扰较
大,图谱不光滑。经实验,采用210nm波长处测定无
干扰,信号峰强,可准确测定α-亚麻酸,故测定波长
选定210nm。
试验过程中,在色谱柱、检测波长、流速和柱温
等条件确定下,以亚麻油中杂质与被测组分α-亚
麻酸完全分离开为指标,用甲醇-水溶液(体积比
为80∶20、85∶15、90∶10、95∶5、纯甲醇)5种不同配比的
流动相进行分离试验比较。试验结果表明,流动相
以甲醇∶水(90∶5)分离效果较为理想。
本法采用95∶5甲醇-水作流动相进行洗脱,样品
分离度好,保留时间短,α-亚麻酸的保留时间为
2.8min,方法稳定性、重现性、回收率均好,是一种操
作性强,易于推广的检测方法。
[参考文献]
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杨永寿,肖培云 亚麻油中α-亚麻酸含量的测定研究 第6卷总第48期
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