全 文 ：收稿日期:2013-03-04; 修订日期:2013-08-13
基金项目:国家自然科学基金( No． 81173147)
作者简介:张 盛( 1989-) ，男( 汉族) ，湖北武汉人，湖北中医药大学硕士
研究生，学士学位，主要从事中药及其制剂的质量控制研究工作．
* 通讯作者简介:黄荣增( 1972-) ，男( 汉族) ，湖北武汉人，湖北中医药大
学药学院副教授，博士学位，主要从事中药复方物质基础及作用机理研究
工作．
四种梨皮中绿原酸的含量测定
张 盛1，丁建中2，黄荣增1*
(1．湖北中医药大学，湖北 武汉 430060; 2．长江大学医学院，湖北 荆州 434023)
摘要:目的 采用反相高效液相色谱法测定四种梨皮中绿原酸的含量。方法 色谱柱为 Agilent TC － C18 ( 4． 6 mm × 250
mm，5 μm) ，流动相为乙腈 － 0． 4%磷酸水溶液( 7． 5∶ 92． 5) ，检测波长为 327 nm，流速为 1． 0 ml /min，柱温为 30℃。结果
线性关系良好，r = 0． 999 9，回归方程为 Y = 33． 241X － 0． 035 9，线性范围为 0． 08 ～ 0． 64 μg，平均加样回收率为 98． 2%，
ＲSD = 1． 8% ( n = 6) 。结论 方法简便、准确、重现性好，四种梨皮中绿原酸的含量差异较大，为中药梨皮的质量控制和评
价提供了一定的科学依据。
关键词:梨皮; 绿原酸; 反相高效液相色谱法
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 01． 008
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 01-0018-02
Determination of Chlorogenic acid in four kinds of Pear skin by HPLC
ZHANG Sheng1，DING Jian-zhong2，HUANG Ｒong-zeng1*
( 1． Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China; 2． Medical School of Yangtze University，Jing-
zhou 434023，China)
Abstract: Objective To develop a method using HPLC for the content determination of chlorogenic acid in four kinds of pear
skin． Methods Aglient TC － C18 Column was used with acetonitrile － 0． 4% phosphoric solution ( 7． 5: 92． 5 ) as the mobile
phase，the detection wavelength at 327 nm，and flow rate was 1． 0mL /min． The column temperature was maintained at 30℃ ． Ｒe-
sults The calibration curve was linear in the range of 0． 08 ～ 0． 64μg，r = 0． 9999． The linear equation is Y = 33． 241X －
0． 0359． The average recovery was 98． 2%，ＲSD = 1． 8% ( n = 6) ． Conclusion The method is simple，accurate and reproducible．
The content of chlorogenic acid in four kinds of pear skin is different，which provides a scientific foundation for traditional Chinese
medicine pear skin quality control and evaluation．
Key words: Pear skin; Chlorogenic acid; ＲP － HPLC
梨皮是一种药用价值较高的中药，为蔷薇科植物白梨、沙梨
或秋子梨等的果皮，具有清心润肺、降火生津之功效。绿原酸是
梨皮的主要有效成分，具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、免疫调
节、降糖等多种作用［1］。本文参照有关文献［2 ～ 5］，采用反相高效
液相色谱法，建立梨皮中绿原酸的含量测定方法，对四种梨皮中
绿原酸的含量进行测定，为中药梨皮的质量控制和评价提供一定
的科学依据。
1 仪器与试剂
Dionex － P680 液相色谱仪，UVD170U 检测器，四元低压梯度
泵，HKZJZ2830171BAF 戴安变色龙高效液相数据处理系统，美国
戴安公司;5200H型超声波清洗器，上海科导超声仪器有限公司;
ＲE － 52AA旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂;SZ － 97 自动三重
纯水蒸馏器，上海亚荣生化仪器厂;AT － 201 电子分析天(d = 0．
01mg，瑞士);绿原酸对照品，供含量测定用，中国药品生物检定
所，批号:110753 － 200212;乙腈为色谱纯，磷酸、甲醇等均为分析
纯，水为重蒸馏水(自制);梨皮，取不同品种的新鲜果梨，洗净，
削取果皮晒干，经湖北中医药大学鉴定教研室鉴定。
2 方法与结果
2． 1 溶液的配制
2． 1． 1 对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥器中干燥
36 h的绿原酸对照品适量，精密称定，加 50%甲醇制成每毫升含
20 μg的溶液，即得。
2． 1． 2 供试品溶液的制备 取梨皮粉末(过 3 号筛)约 1． 0g，精
密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 50ml，称定重量，超
声处理(功率 250 W，频率 40 KHz)40 min，放冷，再称定重量，用
50%甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0． 45 μm)滤过，取
续滤液，即得。
2． 2 色谱条件 色谱柱:Aglient TC － C18柱 (4． 6 mm × 250 mm，5
μm);流动相:乙腈 － 0． 4%磷酸水溶液(7． 5∶ 92． 5);流速:1． 0
ml /min;柱温:30℃;检测波长:327 nm;进样量:20 μl。
2． 3 系统适用性试验 取对照品溶液、供试品溶液各 20 μl 进
样，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。理论板数按绿原酸峰
计算不低于 4 000，绿原酸峰与其它杂质峰分离度均大于 1． 5，峰
形对称。对照品溶液、供试品溶液在此色谱条件下的色谱图见
图 1 ～ 2。
2． 4 线性关系考察 按对照品溶液制备方法，制备浓度为40． 1
μg /ml的绿原酸对照品溶液，分别精密吸取此对照品溶液 1，2，4，
6，8 ml，置于 10 ml容量瓶中，加入 50%甲醇定容，摇匀。分别精
密吸取上述对照品溶液 20 μl，各进样 2 次，按上述色谱条件测
定。以绿原酸峰面积平均值(Y)对绿原酸进样量(X)绘制标准曲
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线。结果表明绿原酸在 0． 08 ～ 0． 64 μg范围内呈良好线性关系，
回归方程为:Y = 33． 241X － 0． 035 9，r = 0． 999 9。
图 1 绿原酸对照品色谱图
图 2 梨皮供试品色谱图
2． 5 精密度试验 精密吸取梨皮(水晶梨)供试品溶液 20 μl，连
续进样 6 次，按上述色谱条件测定，结果 ＲSD为 0． 2%。
2． 6 稳定性试验 取梨皮(水晶梨)供试品溶液，按上述色谱条
件，分别于 0，2，4，8，12，24 h测定峰面积，ＲSD 为 0． 6%，试验结
果表明，供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
2． 7 重复性试验 按照含量测定的方法，对同一种梨皮(水晶
梨)测定 6 次，计算绿原酸含量平均值1． 438 mg /g，ＲSD为 1． 5%。
2． 8 加样回收试验 取已知含量同一种梨皮(水晶梨)粉末
(1． 438 mg /g)6 份，每份取约 0． 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，
分别精密加入 40． 1 μg /ml 绿原酸对照品溶液 20 ml，精密加入
50%甲醇 30 ml，按供试品溶液制备方法制备，分别按上述色谱条
件测定。结果(表 1)表明本法回收率为 98． 2%，ＲSD为 1． 8%。
表 1 梨皮加样回收率
序号
取样量
/g
原有量
mg
测得量
/mg
加入量
/mg
回收率
(%)
平均值
(%)
ＲSD
(%)
1 0． 4723 0． 6792 1． 492 0． 802 101
2 0． 5083 0． 7309 1． 515 0． 802 97． 8
3 0． 4391 0． 6314 1． 403 0． 802 96． 2 98． 2 1． 8
4 0． 6054 0． 8706 1． 668 0． 802 99． 4
5 0． 5420 0． 7794 1． 557 0． 802 97． 0
6 0． 5769 0． 8296 1． 616 0． 802 98． 1
2． 9 含量测定 按上述含量测定方法，对四种梨皮中绿原酸的含
量进行测定，外标法计算样品中绿原酸的含量。结果见表 2。
表 2 四种梨皮中绿原酸的含量测定结果
序号 产地 品种 绿原酸 /mg·g － 1
1 河北 皇冠梨 1． 124
2 四川 雪梨 0． 965
3 西安 水晶梨 1． 438
4 新疆 香梨 0． 565
3 讨论
本文采用反相高效液相色谱法测定了四种梨皮中绿原酸的
含量，结果差别明显，新疆所产的香梨梨皮中绿原酸含量最低，西
安所产的水晶梨梨皮中绿原酸含量最高，但并不能完全断定水晶
梨梨皮是最好的，因为药材中绿原酸的含量会受到不同品种、不
同产地、采收时间及加工储存方法等多种因素的影响，作用因素
较为复杂，有待进一步考察研究。
参考文献:
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产物研究与开发，2006，18(4):691．
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［3］ 吴好好，蒋惠娣，高处寒，等．桑叶中绿原酸和主要黄酮苷的 ＲP －
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［4］ 桑旭峰，吴海雯，徐奇超． HPLC同时测定银黄口服液中绿原酸和黄
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［5］ 刘伟娜，高 洁，张 雪，等．反相高效液相色谱法测定鼻炎滴剂中
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