全 文 ：假蒟不同部位 5 种次生代谢产物含量测定
张 燕1，张洪斌2
(1．海南热带海洋学院热带生物与农学院，海南三亚 572022;2．海南热带海洋学院热带生态环境保护学院，海南三亚 572022)
摘要 ［目的］建立假蒟不同部位总黄酮、总生物碱、总皂苷、总酚和总鞣质含量的测定方法。［方法］通过 NaNO2 － Al(NO3)3 － NaOH法
测定总黄酮含量;通过溴甲酚绿酸性染料比色法测定总生物碱含量;通过香草醛 －冰醋酸酸性染料比色法测定总皂苷含量;通过 Folin －
Ciocalteu比色法测定总酚含量;通过磷钼钨酸 －干酪素比色法测定总鞣质含量。［结果］芦丁平均加样回收率为 98． 11%，ＲSD =
0. 59%，假蒟叶、茎、根中总黄酮含量分别为 1． 18%、0． 33%、0． 25%;盐酸小檗碱平均加样回收率为 99． 62%，ＲSD = 1． 52%，假蒟叶、茎、
根中总生物碱含量分别为 0． 19%、0． 03%、0． 01%;人参皂苷 Ｒe平均加样回收率为 99． 21%，ＲSD = 1． 06%，假蒟叶、茎、根中总皂苷含量
分别为 4． 33%、1． 71%、4． 13%;没食子酸平均加样回收率为 97． 95%，ＲSD = 0． 88%，假蒟叶、茎、根中总酚含量分别为 2． 42%、1． 08%、
0. 68%;没食子酸平均加样回收率为 97． 92%，ＲSD =3． 14%，假蒟叶、茎、根中总鞣质含量分别为 1． 69%、1． 21%、0． 72%。［结论］这 5种
方法准确性强、精密度高、重复性好，可以用作假蒟中总黄酮、总生物碱、总皂苷、总酚和总鞣质含量的测定。
关键词 假蒟;不同部位;次生代谢产物;含量测定
中图分类号 S567． 23 + 9 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2016)17 －146 －05
Determination of Five Kinds of Secondary Metabolites in Different Parts of Piper sarmentosum Ｒoxb．
ZHANG Yan1，ZHANG Hong-bin2 (1． College of Tropical Biology and Agronomy，Hainan Tropical Ocean University，Sanya，Haian
572022;2． College of Tropical Eco-environment Protection，Hainan Tropical Ocean University，Sanya，Haian 572022)
Abstract ［Objective］To establish the analytical methods for detecting the contents of total flavonoids，total alkaloids ，total saponins，total
phenolics and total tannins in different parts of Piper sarmentosum Ｒoxb． ［Method］ The content of total flavonoids was measured by the
NaNO2-Al(NO3)3-NaOH colorimetry． The content of total alkaloids was measured by the bromocresol green acid dyes colorimetric assay． The
content of total spaonins was measured by the vanillin-acetic acid dyes colorimetric assay． The content of total phenolics was measured by the
Folin-Ciocalteu assay． The content of total tannins was measured by the phospho molybdenum tungstic acid-casein colorimetry． ［Ｒesult］The
average recovery of rutin was 98． 11% and ＲSD was 0． 59%，the contents of total flavonoids in roots，stems and leaves of P． sarmentosum
were 0． 25%，0． 33% and 1． 18% respectively． The average recovery of berberine hydrochloride was 99． 62% and ＲSD was1． 52%，the con-
tents of total alkaloids in roots，stems and leaves of P． sarmentosum were 0． 01%，0． 03% and 0． 19% respectively． The average recovery of
ginsenoside Ｒe was 99． 21% and ＲSD was 1． 06 %，the contents of total saponins in roots，stems and leaves of P． sarmentosum were 4． 13%，
1． 71% and 4． 33% respectively． The average recovery of gallic acid was 97． 95% and ＲSD was 0． 88 %，the contents of total phenol in
roots，stems and leaves of P． sarmentosum were 0． 68%，1． 08% and 2． 42% respectively． The average recovery of gallic acid was 97． 92%
and ＲSD was 3． 14%，the contents of total tannins in leaves，stems and roots of P． sarmentosum were 0． 72%，1． 21% and 1． 69% respec-
tively． ［Conclusion］These five proposed methods are precise，accurate and reproducible，and they are suitable for the determination of total
flavonoids，total alkaloids，total saponins，total phenolics and total tannins in P． sarmentosum．
Key words Piper sarmentosum Ｒoxb．;Different parts;Secondary metabolites;Content determination
基金项目 2013 年海南热带海洋学院植物学课程群教学团队。
作者简介 张燕(1968 －) ，女，甘肃西和人，教授，硕士，从事资源植物
化学研究。
收稿日期 2016-05-13
假蒟(Piper sarmentosum Ｒoxb．)是胡椒科胡椒属的植
物［1］，为多年生匍匐草本秃净灌木或亚灌木，分布于印度、中
国、越南、马来西亚、菲律宾、印度尼西亚、巴布亚新几内亚等
国。在我国主要分布于南部省区(如两广、海南、福建、贵州、
云南及西藏南部) ，生长于海拔 1 400 m的地区，喜生于村边、
路旁、村前屋后、深山沟谷、园林或树林的半阴潮湿处［1］。假
蒟具有多种功效，如行气止痛、祛风散寒、消肿等，可治疗风
湿痹痛、疟疾、脘腹胀满、跌打损伤、泄泻痢疾等［2 －3］。假蒟
还可食用，可做成假蒟牛肉饼、假蒟三角肉粽，味道鲜美。目
前已有的报道对假蒟的研究主要集中在挥发性成分［4 －5］、质
量标准［6］、生药学鉴别［7］、药理作用［8 －10］等方面，鲜见对其次
生代谢产物含量研究。笔者对假蒟不同部位的总黄酮、总生
物碱、总皂苷、总酚、总鞣质 5种次生代谢产物的含量进行了
测定，旨在为假蒟的药用质量控制及其进一步开发利用提供
参考依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 试材。假蒟采自海南省五指山市市郊，由热带生物
与农学院的陈道运老师鉴定为假蒟 Piper sarmentosum Ｒoxb．。
将处于营养生长期的假蒟全草洗净晾干，分为叶、根、茎几部
分，置于烘干箱 60 ℃下烘干至恒重，粉碎并过 40目筛，置于
干燥器中备用。
1． 1． 2 主要仪器。SSY －电热恒温水浴锅(上海跃进医疗器
械厂) ;ＲE52CS旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂) ;BP211D
电子天平(德国 Sartorius公司) ;SHZ －Ⅲ型循环水真空泵(上
海亚荣生化仪器厂) ;UV －2100双光束紫外可见分光光度计
(北京瑞利分析仪器公司)。
1． 1． 3 试剂。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号
100080 －200707) ;盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检
定所，批号 110713 － 200910) ;没食子酸对照品(中国药品生
物制品鉴定所，批号 110831 － 200302) ;人参皂苷 Ｒe 对照品
(中国药品生物制品检定所，批号 110754 － 200822) ;乙醇、石
油醚(60 ～ 90 ℃)、正丁醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、溴
甲酚绿、氯仿、浓氨水、香草醛、甲醇、冰醋酸、高氯酸、钨酸
钠、钼酸钠、磷酸、浓盐酸、硫酸锂、双氧水、磷钼钨酸等试剂
责任编辑 黄小燕 责任校对 李岩安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2016，44(17):146 － 150
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2016.17.048
均为分析纯，干酪素(化学纯) ，重蒸水。
1． 2 方法
1． 2． 1 对照品溶液制备。
1． 2． 1． 1 总黄酮。准确称取 10 mg 芦丁对照品，加适量
30%乙醇，放在水浴中加热溶解，待冷后用 30%乙醇定容至
50 mL，摇匀备用，配制成 0． 2 mg /mL的对照品溶液。
1． 2． 1． 2 总生物碱。准确称取盐酸小檗碱对照品 5． 00 mg，
置于 25 mL棕色容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，
摇匀，配制成 0． 20 mg /mL的对照品溶液，冰箱贮存，备用。
1． 2． 1． 3 总皂苷。准确称取5． 0 mg人参皂苷 Ｒe对照品，倒
入 10 mL棕色容量瓶内，用甲醇溶解并定容至刻度，得到
0． 5 mg /mL的对照品溶液，冰箱贮存，备用。
1． 2． 1． 4 总酚。准确称取干燥至恒重的没食子酸对照品
25 mg，用蒸馏水溶解并定容于 50 mL棕色容量瓶中，得浓度
为 0． 5 mg /mL对照品溶液。
1． 2． 1． 5 总鞣质。准确称取 25 mg 没食子酸对照品，倒入
50 mL棕色量瓶内，用水溶解并稀释至刻度，得到 0． 5 mg /mL
对照品溶液。再精密量取 5 mL对照品溶液，滴入 50 mL棕
色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，配成 0． 05 mg /mL对照品
溶液。
1． 2． 2 供试品溶液制备。
1． 2． 2． 1 总黄酮。准确称取各 0． 6 g的假蒟叶、根、茎粉末，
各加 95%乙醇溶液在 70 ℃恒温水浴锅中提取 2． 5、2． 0 h，抽
滤，分别将 2次滤液合并减压浓缩至浸膏，浸膏加 60 ℃热水
搅拌溶解，水溶液用等量石油醚萃取 3 次，石油醚层减压浓
缩，回收石油醚，水层部分再用等量正丁醇萃取 3 次，合并正
丁醇萃取液减压浓缩至浸膏，分别用 30%乙醇将浸膏溶解定
容至 100 mL棕色容量瓶中。
1． 2． 2． 2 总生物碱。准确称取各 2． 00 g的假蒟叶、根、茎粉
末，倒入 3个 50 mL磨口锥形瓶中，各加入氯仿 30 mL、浓氨
水 2 mL，振摇3 min，放置过夜(16 h以上) ，抽滤，将滤液转移
至分液漏斗中静置 2 h，分取氯仿层，水浴蒸干溶剂，残渣加
入适量无水乙醇使之溶解，转移并定容于 10 mL容量瓶中，
作为备用供试品溶液。
1． 2． 2． 3 总皂苷。准确称取各 1． 00 g 的假蒟叶、根、茎粉
末，置于 3 个已经标号的三角锥形瓶中，加入 60% 乙醇
50 mL，浸泡 10 h，转移至索氏提取器中，于 70 ℃下回流2次，
每次 3 h。收集 2 次滤液，并减压浓缩得浸膏。加 30 mL
60 ℃蒸馏水溶解并转移置分液漏斗，加正丁醇萃取 3次，每
次 30 mL，合并正丁醇层，减压回收正丁醇得浸膏，用甲醇溶
解并定容于 50 mL棕色容量瓶中，作为待测液。
1． 2． 2． 4 总酚。分别准确称取假蒟的根、茎、叶粉末各
2． 0 g，置于 100 mL 带塞锥形瓶中，加入 60%乙醇溶液约
30 mL，在 80 ℃水浴 1 h后，过滤，滤液减压浓缩至近干，然后
转移至 100 mL 容量瓶中并用蒸馏水定容至刻度作为待
测液。
1． 2． 2． 5 总鞣质。准确称取各 2 g的假蒟叶、根、茎粉末，倒
入 3个 250 mL棕色量瓶内，分别加 150 mL 蒸馏水，静置过
夜，在振荡器上震荡 30 min，待冷，加水稀释至刻度，混匀，静
置，过滤，倒掉 50 mL初滤液，再精密量取 20 mL 续滤液，倒
入 100 mL棕色量瓶内，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，作为备
用供试品溶液。
1． 2． 3 最大吸收波长确定。
1． 2． 3． 1 总黄酮。准确量取 3 mL 芦丁对照品溶液滴入
10 mL 容量瓶内，加 2 mL 30%乙醇，再准确滴入 0． 3 mL 5%
NaNO2 溶液，摇匀，静置 6 min，再滴入 0． 3 mL 10% Al(NO3)3
溶液，摇匀，放置 6 min，再滴入 4 mL 1 mol /L NaOH溶液，加水
0． 4 mL，混匀，静置 15 min，以随行试剂做空白对照，在 300 ～
700 nm范围内进行全程扫描，确定最大吸收波长。
1． 2． 3． 2 总生物碱。在分液漏斗中精密加入盐酸小檗碱对
照品溶液 1 mL，加入 pH 7． 6 的溴甲酚绿磷酸缓冲溶液
2． 0 mL，摇匀，加入 10 mL氯仿萃取，振摇 1 min后，静置 1 h，
分取氯仿层，以随行试剂做空白对照，在 200 ～ 600 nm 范围
内进行全程扫描，确定最大吸收波长。
1． 2． 3． 3 总皂苷。准确吸取人参皂苷 Ｒe 对照品溶液
0． 5 mL置于10 mL具塞试管中，顺次加入刚配制的 0． 2 mL
5%香草醛冰醋酸溶液、0． 8 mL高氯酸溶液，加塞，摇匀，放入
60 ℃水浴加热 15 min，拿出，置冰水浴中冷却 3 min，加冰醋
酸稀释至刻度，摇匀，用随行试剂做空白对照，在 300 ～
700 nm范围内进行全程扫描，确定最大吸收波长。
1． 2． 3． 4 总酚、总鞣质。准确吸取 2 mL没食子酸对照品溶
液，滴入 25 mL棕色容量瓶内，加蒸馏水稀释至 10 mL，加入
1 mL 福林试剂，摇匀后再加入 2 mL 20%碳酸钠溶液，75 ℃
水浴 10 min，冷却并定容至 25 mL，室温放置 30 min。用随行
试剂做空白对照，在 490 ～ 800 nm 范围内进行全程扫描，确
定最大吸收波长。
1． 2． 4 标准曲线绘制。
1． 2． 4． 1 总黄酮。准确量取 0、0． 1、0． 5、1． 0、2． 0、3． 0、
4． 0 mL 的 0． 2 mg /mL 芦丁标准液分别滴入已标号的 6 只
10 mL棕色容量瓶内，各加 30%乙醇使成 5 mL。分别滴入
0. 3 mL 5% NaNO2 溶液，摇匀，静置 6 min，再滴入 0． 3 mL
10%Al(NO3)3 溶液，摇匀，放置 6 min，再加 4 mL 1 mol /L
NaOH溶液，加 0． 4 mL蒸馏水，摇匀，静置 15 min，用随行试
剂做空白对照，在 510 nm处测定吸光度。以标样浓度为横
坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
1． 2． 4． 2 总生物碱。精密吸取浓度为 0． 20 mg /mL 盐酸小
檗碱对照品溶液 0、0． 5、1． 0、1． 5、2． 0、2． 5 mL分别置于分液
漏斗中，加入 pH 7． 6 溴甲酚绿磷酸缓冲溶液 2． 0 mL，氯仿
10 mL，密塞，剧烈振摇 2 min，再静置 2 h，分取氯仿层，用随
行试剂做空白对照，在 420 nm处测定吸光度。以标样浓度
为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
1． 2． 4． 3 总皂苷。精密吸取 0、0． 2、0． 4、0． 6、0． 8、1． 0 mL的
0． 5 mg /mL人参皂苷 Ｒe对照品溶液分别滴入 10 mL棕色容
量瓶内，再分别滴入甲醇稀释至刻度，摇匀，各准确吸取
1． 0 mL 置于 10 mL具塞试管中，顺次加入刚配制的 0． 2 mL
5%香草醛冰醋酸溶液、0． 8 mL高氯酸溶液，加塞，摇匀，放入
74144 卷 17 期 张 燕等 假蒟不同部位 5 种次生代谢产物含量测定
60 ℃水浴加热 15 min，拿出，置冰水浴中冷却 3 min，加冰醋
酸稀释至刻度，摇匀，用随行试剂做空白对照，于 544 nm 处
测定各吸光度。以人参皂苷 Ｒe 浓度为横坐标、吸光度为纵
坐标绘制标准曲线。
1． 2． 4． 4 总酚。精密量取 0． 5 mg /mL没食子酸对照品溶液
0、0． 3、0． 5、1． 0、2． 0、3． 0 mL分别置于 25 mL棕色容量瓶中，
用蒸馏水稀释至 10 mL，各加入 1 mL福林试剂，摇匀后再加
入 2 mL 20%碳酸钠溶液，75 ℃水浴 10 min，冷却并定容至
25 mL，用随行试剂做空白对照。30 min 后，在 765 nm 处测
定吸光度。用没食子酸浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制
标准曲线。
1． 2． 4． 5 总鞣质。准确吸取 0、0． 5、1． 0、2． 0、3． 0、4． 0 mL的
0． 05 mg /mL没食子酸对照品溶液分别滴入 25 mL棕色量瓶
内，再分别滴入 1 mL磷钼钨酸试液，各加 12． 0、11． 5、11． 0、
10． 0、9． 0、8． 0 mL 的蒸馏水再加 29%碳酸钠溶液稀释至刻
度，摇匀。用随行试剂做空白对照。30 min后，在 765 nm处
测定吸光度。以没食子酸浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘
制标准曲线。
1． 2． 5 精密度试验。
1． 2． 5． 1 总黄酮。准确吸取总黄酮供试品液 2 mL于 10 mL
棕色容量瓶中，加 3 mL 30%乙醇，操作按“1． 2． 4． 1”进行，重
复测定 5次。
1． 2． 5． 2 总生物碱精密度试验。精密吸取总生物碱供试品
溶液 2 mL，置于分液漏斗中，操作按“1． 2． 4． 2”进行，重复测
定 5次。
1． 2． 5． 3 总皂苷。精密吸取总皂苷供试品溶液 10 mL 于
50 mL 棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，再从中取
1． 0 mL，置于 10 mL具塞试管中，操作按“1． 2． 4． 3”进行，重
复测定 5次。
1． 2． 5． 4 总酚。精密吸取总酚供试品液 2 mL，置于 25 mL
棕色容量瓶中，操作按“1． 2． 4． 4”进行，重复测定 5次。
1． 2． 5． 5 总鞣质。按“1． 2． 4． 5”进行操作，准确吸取 2 mL
总鞣质供试品溶液滴入 25 mL棕色容量瓶内，滴入 1 mL磷
钼钨酸试液，加 10 mL蒸馏水，再加 29%碳酸钠溶液稀释至
刻度，摇匀。用随行试剂做空白对照。30 min后，在 765 nm
处测定吸光度。重复测定 5次。
1． 2． 6 重现性试验。
1． 2． 6． 1 总黄酮。精密吸取总黄酮同一供试品液 5 份各
2 mL，分别置于 10 mL棕色容量瓶中，加 3 mL 30%乙醇，操
作按“1． 2． 4． 1”进行，测定吸光度。
1． 2． 6． 2 总生物碱。精密吸取总生物碱同一供试品液 5 份
各 2 mL，分别置于分液漏斗中，操作按“1． 2． 4． 2”进行，测定
吸光度。
1． 2． 6． 3 总皂苷。精密吸取已定容至 50 mL的总皂苷同一
供试品液 5 份各 1 mL，置于 10 mL 具塞试管中，操作按
“1． 2． 4． 3”进行，测定吸光度。
1． 2． 6． 4 总酚。精密吸取总酚同一供试品液 5 份各 2 mL，
置于 25 mL棕色容量瓶中，操作按“1． 2． 4． 4”进行，测定吸
光度。
1． 2． 6． 5 总鞣质。精确吸取总鞣质同一供试品溶液 5 份各
2 mL，置于 25 mL棕色容量瓶中，操作按“1． 2． 4． 5”进行，测
定吸光度。
1． 2． 7 稳定性试验。
1． 2． 7． 1 总黄酮。精密吸取总黄酮供试品液 2 mL于 10 mL
棕色容量瓶中，加 3 mL 30%乙醇，操作按“1． 2． 4． 1”进行，在
0、5、10、15、20、30、40 min测定吸光度。
1． 2． 7． 2 总生物碱。准确量取总生物碱供试品液 2． 0 mL，
置于分液漏斗中，操作按“1． 2． 4． 2”进行，在 0、15、30、45、
60 min 测定吸光度。
1． 2． 7． 3 总皂苷。精密吸取已定容至 50 mL总皂苷供试品
液 1 mL，置于 10 mL具塞试管中，操作按“1． 2． 4． 3”进行，在
0、15、30、45、60 min测定吸光度。
1． 2． 7． 4 总酚。精密吸取总酚供试品溶液2 mL，置于25 mL
棕色容量瓶中，操作按“1． 2． 4． 4”进行，在 0、0． 5、1． 0、1． 5、
2. 0、2． 5、3． 0 h测定吸光度。
1． 2． 7． 5 总鞣质。精密吸取总鞣质供试品液 2 mL，置于
25 mL棕色容量瓶中，操作按“1． 2． 4． 5”进行，用显色后的同
一供试品溶液，在 0、0． 5、1． 0、1． 5、2． 0、2． 5、3． 0、3． 5 h测定其
吸光度。
1． 2． 8 回收率试验。准确称取 5 份已知含量的同一样品，
各精确添加一定量的芦丁对照品、盐酸小檗碱对照品、人参
皂苷 Ｒe对照品、没食子酸对照品、没食子酸对照品，分别按
照“1． 2． 2”制备供试品溶液方法来制备加样回收供试品溶
液，再分别按“1． 2． 4”方法测定吸光度，计算总黄酮、总生物
碱、总皂苷、总酚、总鞣质的含量及回收率。
1． 2． 9 供试品溶液中总黄酮、总生物碱、总皂苷、总酚、总鞣
质的含量测定。精确吸取假蒟的叶、根、茎样液各 2 mL置于
相应标号的容量瓶中，分别按照“1． 2． 4”方法测定样液的吸
光度值，根据回归方程分别算出样液中总黄酮、总生物碱、总
皂苷、总酚、总鞣质的含量，由此再计算出样品中总黄酮、总
生物碱、总皂苷、总酚、总鞣质的含量。
2 结果与分析
2． 1 最大吸收波长 通过测定，假蒟总黄酮、总生物碱、总
皂苷、总酚、总鞣质的最大吸收波长为 510、420、544、765、
765 nm，且空白对照没有干扰。
2． 2 标准曲线 根据“1． 2． 4”方法，得到假蒟总黄酮的回归
方程为 Y =16． 478 9X －0． 002 4(r = 0． 999 6) ，表明芦丁浓度
在 0． 002 ～0． 080 mg /mL与吸光度呈良好的线性关系;总生
物碱的回归方程为 Y =40． 751 2X －0． 003 1(r =0． 999 5)，表明
盐酸小檗碱浓度在 0 ～ 0． 04 mg /mL与吸光度呈现良好的线
性关系;总皂苷的回归方程为 Y = 0． 026 2X － 0． 010 9
(r =0． 999 1) ，表明人参皂苷Ｒe浓度在0 ～5． 00 μg /mL与吸
光度呈良好的线性关系;总酚的回归方程为 Y = 0． 548 0X +
0． 015 2(r =0． 999 7) ，表明没食子酸浓度在 0 ～0． 060 mg /mL
与吸光度有良好的线性关系;总鞣质的回归方程为 Y =
99. 978 9X +0． 012 1(r =0． 999 5) ，表明没食子酸浓度在 0 ～
841 安徽农业科学 2016年
0． 008 mg /mL与吸光度呈现良好的正比关系。
2． 3 精密度试验 分别通过 5次重复测定，假蒟总黄酮、总
生物碱、总皂苷、总酚、总鞣质的吸光度的 ＲSD 分别为
0. 17%、0． 39%、2． 38%、1． 15%、1． 32%，表明精密度良好。
2． 4 重现性试验 分别测定 5份样品，假蒟总黄酮、总生物
碱、总皂苷、总酚的吸光度的 ＲSD 分别为 0． 20%、0． 56%、
1. 97%、0． 46%;总鞣质测定中，其中总酚吸光度的 ＲSD =
0. 12%，不被吸附的多酚的 ＲSD = 0． 14%。结果表明重现性
较好。
2． 5 稳定性试验 通过测定，0 ～ 40 min 内，假蒟总黄酮吸
光度的 ＲSD为 0． 27%，表明总黄酮在 40 min内较稳定;0 ～
60 min内，总生物碱吸光度的 ＲSD为 0． 58%，表明总生物碱
在 60 min内较稳定;0 ～ 60 min内，总皂苷吸光度的 ＲSD 为
3． 13%，表明总皂苷在 60 min内较稳定;0 ～3 h内，总酚吸光
度的 ＲSD为 1． 21%，表明总酚在 3 h内较稳定;0 ～3． 5 h内，
总鞣质吸光度的 ＲSD为 2． 81%，表明总鞣质在 3． 5 h内稳定
性良好。
2． 6 回收率试验 从表 1 可知，总黄酮的加样回收率为
98. 11%，ＲSD =0． 59%;总生物碱的加样回收率为 99． 62%，
ＲSD = 1． 52%;总皂苷的加样回收率为 99． 21%，ＲSD =
1. 06%;总酚的加样回收率为 97． 95%，ＲSD =0． 88%;总鞣质
的加样回收率为 97． 92%，ＲSD =3． 14%。
表 1 5种次生代谢产物回收率试验结果
Table 1 The experimental results of the recovery rates of five kinds of secondary metabolites
项目 Item
测定次数
Detection
times
样品含量
Sample content
mg
加入量
Adding amount
mg
测得量
Measured
amount∥mg
回收率
Ｒecovery
rate∥%
平均回收率
Average recovery
rate∥%
ＲSD∥%
总黄酮 1 2． 35 0． 45 2． 79 97． 78 98． 11 0． 59
Total flavonoids 2 2． 35 0． 55 2． 89 98． 18
3 2． 35 0． 65 2． 99 98． 46
4 2． 35 0． 75 3． 08 97． 33
5 2． 35 0． 85 3． 19 98． 82
总生物碱 1 1． 87 0． 55 2． 41 98． 18 99． 62 1． 52
Total alkaloids 2 1． 87 0． 65 2． 51 98． 46
3 1． 87 0． 75 2． 63 101． 33
4 1． 87 0． 85 2． 73 101． 18
5 1． 87 0． 95 2． 81 98． 95
总皂苷 1 4． 33 0． 65 4． 97 98． 46 99． 21 1． 06
Total saponins 2 4． 33 0． 75 5． 07 98． 67
3 4． 33 0． 85 5． 17 98． 82
4 4． 33 0． 95 5． 29 101． 05
5 4． 33 1． 05 5． 37 99． 05
总酚 Total phenolics 1 24． 20 1． 50 25． 68 98． 67 97． 95 0． 88
2 24． 20 1． 50 25． 65 96． 67
3 24． 20 2． 00 26． 16 98． 00
4 24． 20 2． 50 26． 64 97． 60
5 24． 20 2． 50 26． 67 98． 80
总鞣质 1 16． 90 0． 25 17． 04 96． 00 97． 92 3． 14
Total tannins 2 16． 90 0． 25 17． 04 96． 00
3 16． 90 0． 30 17． 21 103． 33
4 16． 90 0． 35 17． 24 97． 14
5 16． 90 0． 35 17． 24 97． 14
2． 7 供试品溶液测定 从表 2 可知，假蒟叶、茎、根中总黄
酮含量分别为 1． 18%、0． 33%、0． 25%;假蒟叶、茎、根中总生
物碱含量分别为 0． 19%、0． 03%、0． 01%;假蒟叶、茎、根中总
皂苷含量分别为 4． 33%、1． 71%、4． 13%;假蒟叶、茎、根中总
酚含量分别为 2． 42%、1． 08%、0． 68%;假蒟叶、茎、根中总鞣
质含量分别为 1． 69%、1． 21%、0． 72%。
表 2 假蒟不同部位 5种次生代谢产物的含量
Table 2 The contents of five kinds of secondary metabolites in different parts of P． sarmentosum %
部位
Position
总黄酮 Total flavonoids
平均值 Mean ＲSD
总生物碱 Total alkaloids
平均值 Mean ＲSD
总皂苷 Total saponins
平均值 Mean ＲSD
总酚 Total phenolics
平均值 Mean ＲSD
总鞣质 Total tannins
平均值 Mean ＲSD
根 Ｒoot 0． 25 4． 00 0． 011 7 0． 85 4． 13 0． 42 0． 68 3． 89 0． 72 3． 68
茎 Stem 0． 33 3． 03 0． 028 6 0． 93 1． 71 1． 24 1． 08 3． 34 1． 21 2． 19
叶 Leaf 1． 18 1． 47 0． 187 3 0． 24 4． 33 0． 61 2． 42 1． 49 1． 69 1． 57
94144 卷 17 期 张 燕等 假蒟不同部位 5 种次生代谢产物含量测定
3 结论与讨论
通过 NaNO2 － Al(NO3)3 － NaOH 法，以芦丁为对照品，
在 510 nm处用紫外可见分光光度计测定了假蒟不同部位总
黄酮的含量，发现总黄酮含量在假蒟叶中最高(1． 18%) ，其
次是茎(0． 33%) ，根中最低(0． 25%)。
通过溴甲酚绿酸性染料比色法，以盐酸小檗碱为对照
品，在 420 nm处用紫外可见分光光度计测定了假蒟不同部
位总生物碱的含量，发现总生物碱含量在假蒟叶中最高
(0. 19%) ，其次是茎(0． 03%) ，根中最低(0． 01%)。
通过香草醛 －冰醋酸酸性染料比色法，以人参皂苷 Ｒe
为对照品，在 544 nm处用紫外可见分光光度计测定了假蒟
不同部位总皂苷的含量，发现总皂苷含量在假蒟叶中最高
(4． 33%) ，其次是根(4． 13%) ，茎中最低(1． 71%)。
通过 Folin － Ciocalteu比色法，以没食子酸为对照品，在
765 nm处用紫外可见分光光度计测定了假蒟不同部位总酚
的含量，发现总酚含量在假蒟叶中最高(2． 42%) ，其次是茎
(1． 08%) ，根中最低(0． 68%)。
通过磷钼钨酸 －干酪素比色法，以没食子酸为对照品，
在 765 nm处用紫外可见分光光度计测定了假蒟不同部位总
鞣质的含量，发现总鞣质含量在假蒟叶中最高(1. 69%) ，其
次是茎(1． 21%) ，根中最低(0． 72%)。
综上所述，假蒟不同部位总黄酮、总生物碱、总皂苷、总酚、
总鞣质含量具有显著的差异性。试验结果表明，5种方法均具
有精密度高、稳定性好、重现性好、操作简便、效率高、测定结果
可靠的优点，适用于假蒟中总黄酮、总生物碱、总皂苷、总酚、总
鞣质的定量分析，可为假蒟药用质量评价提供参考依据，也为
假蒟次生代谢产物的进一步开发利用提供基础资料。
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995 －999．
(上接第 136 页)
4组含药血清抑制 LPS 刺激 ＲAW264． 7 细胞释放 NO、
TNF － α、IL －6的作用强度从强到弱依次为 PCWEPS、ＲLQS、
WEPS、DPCWEPS。头花蓼水提醇沉沉淀物中主要为多糖和
蛋白类化合物，其抗炎活性较弱。热淋清颗粒以头花蓼水提
物为主要原料，可能是由于热淋清颗粒的制备工艺较为成熟
使其更易于吸收，导致其含药血清的抗炎活性略优于头花蓼
水提物含药血清的抗炎活性。PCWEPS的抗炎活性最强，可
能是由于乙醇沉淀法有效除去蛋白质、多糖、鞣质等杂质，有
效成分得到富集［3］，其中富含槲皮素、没食子酸、山奈酚、儿
茶素以及多种酚酸类等化合物［11］，使其含药血清的抗炎活
性得到较大程度的提高，这为改善热淋清颗粒临床用量较大
提供了理论依据。
综上所述，头花蓼水提物、水提醇沉提取物、水提醇沉
沉淀物及热淋清颗粒含药血清均能不同程度地通过抑制炎
症因子 NO、TNF － α和 IL － 6的释放而发挥抗炎作用，其中
头花蓼水提醇沉提取物为头花蓼主要的抗炎有效物质，因
此采用水提后醇沉的方法能够提高头花蓼的抗炎活性，这
为从细胞水平上深入探讨头花蓼在治疗泌尿系统感染中的
作用奠定了基础，也为头花蓼的进一步开发应用提供了理
论依据。
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051 安徽农业科学 2016年