全 文 ：2012 年 7 月第 7 期中国民族医药杂志
HPLＣ法测定苗药大落伞中野扇花碱D 的含量
王进喜 严小盈 杜 江
（贵阳中医学院 ，贵州 贵阳 550002）
中图分类号：R291.6 文献标识码：A 文章编号：1006-6810（2012）07-0046-02
摘 要：目的:建立高效液相色谱法测定大落伞中野扇花碱D含量的方法。方法：采用 ZORBA SB- C18（4.6×150mm，5μm）色谱柱,
流动相为甲醇－乙腈－1.7%二乙胺（磷酸调pH为7.5）（40：22：38，V/V/V）,流速为1.0ml/min,柱温为30℃,检测波长λ=214nm。 结果:
野扇花碱D在0.1955μg～0.9975μg范围内线性关系良好，回归方程:y=1529x+11.083，r=0.9997(r=0.9997,n=7)，结论:所建立的方法简
便、准确、重现性好可做为野扇花碱D的测定方法。
关键词：苗药；大落伞；高效液相色谱法；野扇花碱D；含量测定
大落伞为黄杨科植物野扇花 Sarcococca ruacifolia Stapf 的
干燥根或全株，又名清香桂、三两银、山豆根等，分布于我国西
南及广西、湖南等地，是《贵州省中药材、民族药材质量标准》
（2003 年版）收载品种。大落伞为贵州常用的苗药品种，在苗
族地区主要用于治疗胃病、跌打劳伤、头晕心悸、喉咙肿痛。功
能是凉血化瘀、解毒敛疮。该属植物的药理活性成分主要为甾
体生物碱 [1]，对其中的甾体生物碱成分的研究从 20世纪 60 年
代初就开始展开，之后对其研究报道不断的增加。近年来国内
外的药理研究表明这类生物碱的药理活性主要具有胆碱脂酶
抑制活性、抗癌、抗菌、抗溃疡、解痉及扩张血管和松弛气管等
活性 [1-3]，说明其具较高的开发利用价值，大落伞在贵州等地
蕴藏量大，资源丰富。但是，现今国内对该植物的基础研究十
分薄弱。本课题组前期对大落伞有效物质基础进行了较为深
入的研究，并从中分离鉴定了 7 个生物碱（含两个新化合物）
其中野扇花碱 D含量较高且专属性较强。因此以野扇花碱 D
的含量作为评价大落伞质量的指标之一是很有意义的。本课
题在前期化学研究的基础上以野扇花碱 D 作为指标成分，采
用 HPLC 法建立其含量测定方法 [4-7]，为进一步提升大落伞质
量标准提供一定的实验依据，为其今后的开发利用打下良好
的基础。
1 仪器与试药
1.1 仪器：Agilent1100 系列高效液相色谱仪（自动进样器，紫
外检测器，四元泵：美国，安捷伦公司），梅特勒-托利多 New
classic 型电子天平 (梅特勒-托利多仪器 (上海）有限公司），
KQ5200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2 试药：甲醇、乙腈为色谱纯 (天津市科密欧化学试剂开
发中心 )，水为二次蒸馏水，其余试剂均为分析纯。野扇花碱 D
对照品由本课题组自制（经 HPLC归一化法测定，纯度为 98%，
见图 1）。
大落伞药材采自贵阳近郊，经贵州生物研究所陈谦海研
究员鉴定为黄杨科植物野扇花 Sarcococca ruacifolia Stapf 的干
燥根。
2 方法与结果
2.1 样品液制备
2.1.1 对照品溶液的制备 :精密称取干燥至恒重的野扇花碱 D
对照品适量，置于容量瓶中，加甲醇溶解定容制成浓度为
0.0665mg/ml 的对照品储备液。
2.1.2 供试品溶液的制备 :精密称取大落伞药材粉末 (过 60 目
筛 )1g，置 50ml 锥形瓶中，精密加入乙醇 15ml，超声提取
40min，冷却后滤过，滤液至蒸发皿中挥干，再用甲醇溶解定容
至 10ml 容量瓶中，溶液经 0.45μm 微孔滤膜滤过，作为供试品
溶液。
2.2 条件选择
2.2.1 色谱条件与系统适应性实验 : 色谱柱：ZORBA SB- C18
（4.6×150mm，5μm）：流动相为甲醇-乙腈-1.7%二乙胺（磷酸
调 pH 为 7.5）（40/22/38，V/V/V）；流速为 1.0ml/min，柱温为
30℃，检测波长 λ=214nm。理论塔板数按野扇花碱 D峰计应不
小于 3000;用外标法按峰面积定量计算。
图 1 野扇花碱D HPLC 图谱
2.2.2 检测波长的选择：精密量取对照品溶液 20μL 注入液
相色谱仪，在 200nm-400nm 进行扫描，记录色谱图（图 2）经图
谱分析，野扇花碱 D 于 214 nm 处有最大吸收，因此确定
214nm为野扇花碱 D的检测波长。结果见图 2。
图2 野扇花碱D 紫外吸收图谱
2.2.3 流动相条件的选择 : 精密量取对照品溶液 20μL 注入液
相色谱仪，在 214nm 下以甲醇、乙腈和 1.7%二乙胺（磷酸调
pH为 7.5）组成的流动相以不同比例进行试验，结果表明当甲
醇：乙腈：1.7%二乙胺（磷酸调 pH 为 7.5）体积比为 40：22：38
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DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2012.07.026
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时 野扇花碱 D峰与其周围的峰分离度好，因此选定此系统为
含量测定的流动相。
2.3 方法学考察
2.3.1 线性关系实验 : 精密吸取对照品溶液 3μL、5μL、7μL、
9μL、11μL、13μL、17μL 分别进样，于 214nm 处测定野扇花碱
D的峰面积。以进样量（μg）为横坐标（X），以峰面积为纵坐标
（Y）计算回归方程，得野扇花碱 D 的回归方程为 y=1529x+
11.083，r=0.9997，结果表明野扇花碱 D 在 0.1955～0.9975μg 范
围内线性关系良好。结果见图 3。
图3 野扇花碱D 的标准曲线
表1 加样回收率试验结果
2.3.2 精密度试验:精密吸取野扇花碱 D对照品溶液 5μL，按
色谱条件测定，重复 6次，测得野扇花碱 D峰面积的 RSD为
1.55%，结果表明仪器的精密度良好。
2.2.3 重复性试验:精密称取同一批次大落伞药材粉末(过 60
目筛) 3g，各 6份，按“2.1.3”项下方法制备供试液，按色谱条
件测定，结果表明野扇花碱 D 含量的 RSD值为 1.83%，表明
重现性良好。
2.3.4 稳定性试验:精密量取“2.1.3”项下供试品溶液，于室温
下放置 0、2、4、8、12、16h后进样，依法测定，测得大落伞中野
扇花碱 D峰面积 RSD为 2.49%，表明样品在 16h内稳定。
2.2.5 加样回收率试验:精密称取已知含量的大落伞药材粉末
（过 60目筛) 1.5g，6份，分别精密加入野扇花碱 D对照品溶
液适量，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件
测定，测得平均回收率为 96.42% 。结果见表 1。
3 结果与讨论
3.1 采用高效液相色谱法，进行了大落伞中野扇花碱 D成分
的含量测定，并进行方法学考察。方法学研究表明：野扇花碱
在 0.1955μg～0.9975μg范围类线性关系（r=0.9997）良好，重复
性试验 RSD为 1.83%，平均回收率为 96.42%，此方法简便易
行、重现性好，回收率高。
3.2 本课题组前期研究结果表明，大落伞药材中野扇花碱 D
专属性较强且含量较高，因此选择野扇花碱 D作为大落伞质
量控制的指标性成分比较合适。
3.3 试验中对磷酸系统、磷苯二甲酸氢钾系统和二乙胺系统
进行比较,结果发现用二乙胺系统可以改变色谱峰形,防止峰
的拖尾,使主峰与杂质峰分离完全。但是选择二乙胺时一定
要用磷酸调 pH，经过试验发现当流动相的 pH为 7.5时野扇
花碱 D的分离度较好。
3.4 在对样品用不同方法进行纯化的时候发现，被测峰周围
的干扰峰依然存在，固选择对供试液不做纯化处理。
参考文献
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Prod. 2000,63: 1364-1368
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Biology 2004,92:477-484
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离与鉴定[J].植物学,报,1993,35∶885
[6]江帆，聂晶.高效液相法测定益母草中益母草碱含量研究[J].
分析科学学报 2008,6（3）
[7]俞永梅，张曦.HPLC法测定秋水仙碱片的含量[J].中国医药
指南,2008,3（3）
样品量/g
样品中野
扇花碱D
/mg
加入量
/mg
测定量
/mg
回收率
/% 均回收率 RSD
1.5032 0.361 0.360 0.719 98.92
96.42% 2.55%
1.5040 0.361 0.360 0.701 94.32
1.5023 0.361 0.360 0.718 99.29
1.5038 0.361 0.360 0.708 96.32
1.5022 0.361 0.360 0.692 93.11
1.5017 0.361 0.360 0.707 96.64
Detemimation of the content of sarcovaging d of Sarcococca ruacifolia Stapf BY HPLC
college of chinese fraditonal medicine Guiyang 550002
WANG Jin-xi Yan Xiao-ying Du jiang
Abstract:Objective;To establish an HPLC method for determination of the content of Sarcovagine D of Sarcococca ruacifolia Stapf. Method ;the
HPLC system consisted of ZORBA SB- C18（4.6×150mm，5μm),in which the mobile phase was methanol-acetonitrile-1.7%diethylamine(40：32：
28）with a flow rate 1.0ml/min the column temperature was 30℃and the UV detection wavelength was at 214nm. Results; the linear range was
0.1955μg～0.9975μg and the regression equation of the calibration curve for linear was by y=1529x+11.083，r=0.9997(r=0.9997,n=7).
Conclusion; this method is a convenient ,accurate and specific for determination of the content of Sarcovagine D of Sarcococca ruacifolia Stapf .
Key words：Miao national herbs;Sarcococca ruscifolia Stapf;HPLC ;Sarcovagine D;Determination
2012年 5月 3日收稿
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