全 文 ：多波长高效液相色谱法定量分析
紫金砂中 5种成分
梁菲菲 1, 2 , 杨郁 1 , 赵毅民 1 , 于能江 1＊ , 王金辉 2＊
(1.军事医学科学院 毒物药物研究所 , 北京 100850;
2.沈阳药科大学 中药学院 , 辽宁 沈阳 110016)
[摘要 ] 　目的:建立多波长高效液相色谱法同时测定紫金砂中水合氧化前胡素内酯(1), gosferol(2), 3′R-(+)-亥茅酚
(3), 3′-O-乙酰基亥茅酚(4)和异欧前胡素(5)含量的分析方法。方法:紫金砂药材粉末经超声提取 , HPLC-DAD检测 , Agilent
EclipseXDB-C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm, 5 μm);流动相为甲醇-水梯度洗脱 [ 55∶45(0 min)～ 65∶35(25 min)～ 95∶5(35
min)] ;流速 1.0 mL· min-1 ,检测波长 312 nm(1), 306 nm(2), 300nm(3), 294 nm(4)及 310nm(5)。结果:上述 5种成分线
性方程分别为 Y=1.81×103X+7.93×102(r=0.999 6), Y=2.49×103X-2.17 ×102(r=0.999 3), Y=2.02×103 X-1.42 ×
102(r=0.999 1), Y=1.57 ×103 X-0.66×102(r=0.999 7), Y=2.65 ×103X-1.47 ×102(r=0.999 6);平均回收率分别为
99.7%(RSD0.57%), 100.1%(RSD1.3%), 100.0%(RSD1.6%), 99.6%(RSD1.3%), 99.2%(RSD0.59%);方法精密度 ,
重复性 , 样品稳定性均符合定量分析要求。结论:该定量分析方法可用于紫金砂药材的质量控制。
[关键词 ] 　紫金砂;高效液相色谱法;多波长;多成分;定量分析
[稿件编号 ] 　20091209002
[基金项目 ] 　国家 “重大新药创制 ”科技重大专项(2009ZX09301-
002)
[通信作者 ] 　＊于能江 , 副研究员 , 主要从事天然药物化学研究 ,
Tel:(010)66874617, E-mail:nengjiang-yu@163.com;＊王金辉 , 教
授 、博士生导师 ,主要从事天然药物化学研究, Tel:(024)23986479,
E-mail:wangjh1972@vip.sina.com
[作者简介 ] 　梁菲菲 , 在读硕士 , 研究方向为天然药物化学 , Tel:
(010)66874617
　　紫金砂为伞形科当归属多年生草本植物白根独
活 AngelicapolymorphaMaxim.的根及根茎 [ 1] ,具有
祛风 、散寒 、燥湿 、止痛等功能 [ 2] ,主要用于治疗
感冒鼻塞 、胃痛 、腹痛 、胸胁痛 、风湿关节痛 、跌打
损伤 、毒蛇咬伤等症 [ 3-4] , 治疗胃痛疗效确切 , 在
神农架地区和土家族中享有盛誉 [ 3] 。其化学成
分主要有香豆素类 [ 5] ,色原酮类 ,挥发油类 [ 6] ,生
物碱类 [ 7]等 。目前从紫金砂中已分离并鉴定结
构的化合物主要为呋喃香豆素 [ 3, 8] ,其次为色原
酮类 。文献报道香豆素类化合物具有抗病毒 、抗
菌 、抗癌 、抗炎 、降压 、抗心律失常 、抗骨质疏松 、
镇痛 、平喘等多种生物活性 [ 9-10] ;色原酮类化合
物具有支气管扩张 、冠状动脉解痉等生物活
性 [ 11] 。但飞君等 [ 12]曾采用紫外分光光度法测定
紫金砂中总香豆素成分的含量 ,但至今未见紫金
砂药材中香豆素和色原酮单一成分含量测定方
法的研究报道 。作者前期研究结果表明香豆素
类成分水合氧化前胡素内酯 、gosferol、异欧前胡
素和色原酮类成分 3′R-(+)-亥茅酚 、3′-O-乙酰
基亥茅酚均为药材中含量较高的指标性成分 ,且
具有一定的药理活性 。建立这 5个成分的定量
分析方法 ,可以更好地表征紫金砂药材的质量 。
因而 ,作者利用多波长高效液相色谱法建立了同
时测定紫金砂药材中这 5种香豆素和色原酮类
成分的定量分析方法 。
1　仪器与试药
Agilent-1100高效液相色谱仪(DAD检测器 ,美
国 Agilent公司 );1/10 万分析天平 (Sartorius,
BT25S);高速万能粉碎机(FW100型);CH-300型超
声波清洗机。
色谱甲醇(Fisher);娃哈哈纯净水;其他试剂均
为分析纯 。紫金砂药材购买于湖北神农架药材公
司 ,由军事医学科学院毒物药物研究所高级实验师
马其云鉴定为伞形科当归属植物白根独活 A.poly-
morpha的根茎。
对照品及纯度检测:水合氧化前胡素内酯(纯
度 99.98%), gosferol(纯度 98.30%), 3′R-(+)-亥
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茅酚 (纯度 99.40%), 3′-O-乙酰基亥茅酚 (纯度
99.77%),异欧前胡素(纯度 99.24%),均由本课题
组自制 ,薄层检测无明显杂质 ,核磁谱图未见杂质信
号 , HPLC-DAD检测 ,峰面积归一化法测定纯度 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 　AgilentEclipseXDB-C18色谱柱
(4.6mm ×250mm, 5μm),柱温 25℃;流动相为甲
醇 -水洗脱体系 ,见表 1;流速 1.0mL·min-1;检测波
长 312nm(1), 306 nm(2), 300 nm(3), 294 nm(4)
及 310nm(5);进样量 20 μL;外标法定量。对照品
及紫金砂样品 HPLC图见图 1。
表 1　流动相梯度洗脱程序
t/min 甲醇 /% 水 /%
0.00 55 45
25.00 65 35
35.00 95 5
1.水合氧化前胡素内酯;2.gosferol;3.3′R-(+)-亥茅酚;
4.3′-O-乙酰基亥茅酚;5.异欧前胡素。
图 1　对照品(A)和紫金砂样品(B)HPLC图
(检测波长 300nm)
2.2　对照品溶液的制备　称取水合氧化前胡素内
酯 , gosferol, 3′-O-乙酰基亥茅酚和异欧前胡素对照
品各 50 mg, 3′R-(+)-亥茅酚对照品 10 mg,精密称
定 ,分别置于 10mL量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,滤
过 ,得各对照品储备液 。
分别精密量取水合氧化前胡素内酯 , gosferol, 3′
R-(+)-亥茅酚 、3′-O-乙酰基亥茅酚及异欧前胡素
对照品储备液 5.0, 2.0, 5.0, 1.0, 3.0 mL置于 25
mL量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,得混合对照品溶液 。
精密量取混合对照品溶液 0.2, 1.5 , 3.0, 5.0,
7.0mL,分别置于 10 mL量瓶中 ,用甲醇稀释至刻
度 ,得一系列不同浓度混合对照品溶液。
2.3　紫金砂样品溶液的制备　紫金砂药材干燥后
粉碎 ,过 40目筛 ,称取药材粉末约 500 mg,精密称
定 ,加体积分数 50%的甲醇溶液 15 mL浸泡过夜。
次日称重 ,超声提取 60 min,用 50%甲醇溶液补足
重量 , 0.45 μm滤膜过滤 ,即得。
2.4　测定波长的选择　根据各对照品紫外吸收光
谱图 ,确定最大吸收波长 ,再将各对照品不同最大吸
收波长下的 HPLC图进行比较 ,确定 5种对照品的
最佳检测波长分别为:312 nm(1), 306 nm(2), 300
nm(3), 294nm(4)及 310 nm(5)。
2.5　线性关系试验　按 2.1项下色谱条件对 6个
不同浓度混合对照品溶液进样分析 ,以对照品进样
量(μg)为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,得各组分的回
归方程 ,结果表明 5种成分在各自的进样量范围内
线性关系均良好 ,回归方程和线性范围见表 2。
表 2　5种成分的回归方程和线性范围
对照品 线性范围 /μg 回归方程 r
1 0.40～ 20.00 Y=1.81×103X+7.93×102 0.999 6
2 0.16～ 8.00 Y=2.49×103X-2.17×102 0.999 3
3 0.08～ 4.00 Y=2.02×103X-1.42×102 0.999 1
4 0.08～ 4.00 Y=1.57×103X-0.66×102 0.999 7
5 0.24～ 12.00 Y=2.65×103X-1.47×102 0.999 6
2.6　精密度试验　取对照品混合溶液(中间浓度)
按上述色谱条件重复进样 5次 ,结果各色谱峰峰面
积 RSD均小于 1.0%。
2.7　稳定性试验　取同一供试品溶液 ,按上述色谱
条件分别在 0, 2, 4, 8, 16, 24 h进样分析 ,测定峰面
积 ,计算 RSD小于 3.0%。
2.8　重复性试验 　取同一批紫金砂药材 ,称取约
500 mg共 5份 ,精密称定 ,按 2.3方法制备供试品
溶液 ,依法测定并计算含量 , 5种成分含量 RSD小于
2.3%。
2.9　回收率试验　称取已知各测定成分含量的同
一批紫金砂药材粉末约 500 mg共 6份 ,精密称定 ,
分别按各测定成分含量约 80%, 100%, 120% 3种
浓度加入适量对照品(3种不同水平各 2份),按供
试品溶液制备方法操作进行含量测定 ,计算回收率。
结果 5种成分的回收率均在 95% ～ 105%,见表 4,
说明本方法的准确度良好。
2.10　样品的测定　称取紫金砂药材粉末约 500
mg共 3份 ,精密称定 ,按 2.3方法制备供试品溶液 ,
HPLC法测定各份样品中各成分的含量 ,计算平均
值 ,得水合氧化前胡素内酯 , gosferol, 3′R-(+)-亥茅
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　　 表 4　5个被测成分的加样回收率(n=6)
测定成分 样品中含量 /μg 加入量 /μg 测得量 /μg 平均回收率 /% RSD/%
水合氧化前胡素内酯 2 623.5 2 080 4 680.20 99.7 0.57
2 623.5 2 100 4 707.75
2 623.5 2 620 5 244.02
2 623.5 2 630 5 261.39
2 623.5 3 150 5 777.60
2 623.5 3 130 5 733.78
gosferol 219.75 180 401.89 100.1 1.3
219.75 170 389.82
219.75 220 441.91
219.75 220 434.99
219.75 260 478.19
219.75 250 472.60
3′R-(+)-亥茅酚 230.25 180 411.74 100.0 1.6
230.25 180 411.71
230.25 220 444.35
230.25 230 462.87
230.25 280 513.30
230.25 270 497.12
3′-O-乙酰基亥茅酚 213.00 170 379.75 99.6 1.3
213.00 160 371.59
213.00 210 422.54
213.00 200 411.72
213.00 250 460.98
213.00 260 477.84
异欧前胡素 737.25 580 1 319.34 99.2 0.59
737.25 580 1 313.71
737.25 740 1 469.04
737.25 730 1 459.00
737.25 860 1 587.79
737.25 880 1 608.80
酚 、3′-O-乙酰基亥茅酚和异欧前胡素质量分数分别
为 0.525%, 0.044%, 0.046%, 0.043%, 0.147%。
3　讨论
本研究结果表明该分析方法简单 、准确 , 专
属性强 , 重复性好 , 适用于同时定量紫金砂药材
中水合氧化前胡素内酯 , gosferol, 3′R-(+)-亥茅
酚 , 3′-O-乙酰基亥茅酚和异欧前胡素 , 可用于紫
金砂药材的质量控制 。对该方面的研究将有助
于进一步研究开发紫金砂的药用价值 。由于紫
金砂药材属民间用药 ,市售药材样品较少 ,故实
验只定量分析了单批次药材样品 。本课题组将
进一步收集不同产地来源不同批次的紫金砂药
材 , 进行含量分析和比较 ,以鉴别药材真伪及更
好的控制药材质量 。
[参考文献 ]
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QuantitativeanalysisoffivecomponentsintherhizomeofAngelica
polymorphabyRP-HPLCunderdifferentUVwavelengths
LIANGFeifei1 , 2 , YANGYu1 , ZHAOYimin1 , YUNengjiang1＊ , WANGJinhui2＊
(1.InstituteofPharmacologyandToxicology, AcademyofMilitaryMedicalScience, Beijing100850, China;
2.SchoolofTraditionalChineseMateriaMedica, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China)
[ Abstract] 　AHPLCmethodwasdevelopedforsimultaneoulyquantitativeanalysesofaviprin(1), gosferol(2), 3′R-(+)-
hamaudol(3), 3′-O-acetylhamaudol(4)andiso-imperatorin(5)intherhizomeofAngelicapolymorpha.Theanalysiswasperformed
at25 ℃ onanAgilentEclipseXDB-C18 analyticalcolumn(4.6mm×250 mm, 5μm)withthemobilephaseofmethanolandH2Oin
gradientelution[ 55∶45 (0 min)-65∶35 (25min)-95∶5 (35 min)] .Andtheflowratewas1.0mLmin-1withthedetectionwave-
lengthsof312 nm(1), 306 nm(2), 300nm(3), 294nm(4)and310 nm(5).Consequently, thereqresionequationswereY=
1.81×103X+7.93×102(r=0.999 6), Y=2.49×103 X-2.17×102(r=0.999 3), Y=2.02 ×103X-1.42×102(r=0.999 1),
Y=1.57×103X-0.66×102(r=0.999 7), Y=2.65×103X-1.47×102(r=0.999 6).Andtheaveragerecoverieswere99.7%
(RSD0.57%), 100.1% (RSD1.3%), 100.0% (RSD1.6%), 99.6% (RSD1.3%), 99.2% (RSD 0.59%), respectively.
Theprecision, repeatabilityandstabilitywerealconsistentwiththerequestofquantitativeanalysis.Thecontentsofcompound1-5in
A.polymorphaweredeterminedas0.525%, 0.044%, 0.046%, 0.043%, 0.15%, respectively.Accordingly, thisquantitativea-
nalysismethodisgoodforthequalitycontrolofA.polymorpha.
[ Keywords] 　Angelicapolymorpha;RP-HPLC;multi-wavelengths;multi-components;quantitativeanalysis
doi:10.4268 /cjcmm20101918
[责任编辑　王亚君 ]
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