全 文 ：园艺园林·畜牧水产
HPLC测定白花泡桐叶不同月份熊果酸
和木犀草素的含量
吾鲁木汗·那孜尔别克 1，石进校 1，李 科 1，姚福成 2，恩特马克·布拉提白 1
（1． 吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000；
2． 湘西宏成制药有限责任公司，湖南 吉首 416000）
摘 要：为了比较湘西宏成制药有限责任公司不同中药种子繁殖基地白花泡桐叶中熊果酸和木犀草素 6月到 9月间含量的
变化，采用 Shim-Pack C18色谱柱，测定熊果酸的流动相为甲醇-水-乙酸（85∶15∶0.5)，检测波长 210 nm；测定木犀草素的流动
相为甲醇-水-乙酸（60∶39∶1），检测波长 350 nm。结果显示，熊果酸的线性范围为 1~15 μg ( r=0.999 6)，平均回收率为 98.3%
（RSD=1.10%，n=5）；木犀草素的线性范围为 0.01~0.09 μg（r= 0.999 1），平均回收率为 98.7%（RSD=2.25%，n=5）；研究结论为 7
月份的白花泡桐叶中熊果酸和木犀草素含量最高，为药物原料的采收时间的划定提供了理论依据。
关键词：白花泡桐；高效液相色谱法；熊果酸；木犀草素
中图分类号：S567．19 文献标识码：A 文章编号：1006-060X（2011）21-0102-04
Determination of Ursolic Acid Content and Luteolin Content in Leaves of
Paulownia fortune in Different Months by HPLC
NAZIERBIEKE Wulumuhan1, SHI Jin-xiao1, LI Ke1,
YAO Fu-Cheng2, BORRATHYBAY Entomack1
(1. College of Biology and Environmental Sciences, Jishou University, Hunan 416000, PRC;
2. Xiangxi Hongcheng Pharmaceutical Co., Ltd., Jishou 416000, PRC)
Abstract: The changes of ursolic acid content and luteolin content in leaves of Paulownia fortune, which produced
from different propagation bases of Xiangxi Hongcheng Pharmaceutical Co., Ltd. in Western Hunan, from June to
September were compared. The content of ursolic acid and luteolin was determined by HPLC, respectively, and the
analytical column was Shim-Pack C18; for detecting content of ursolic acid, the mobile phase consisted of methanol-
water-acetic acid (85 ∶15 ∶0.5) at a flow rate of 1.0 mL/min, and the detection wavelength at 210 nm; for detecting
content of luteolin, the mobile phase consisted of methanol-water-acetic acid (60 ∶39∶1) at a flow rate of 1.0 mL/min,
and the detection wavelength at 350 nm. The linear range of ursolic acid and luteolin was 1~15 μg (r = 0.999 6)
and 0.01~ 0.09 μg (r = 0.999 1), respectively; the average recovery rate of ursolic acid and luteolin was 98.3% with
RSD of 1.10% (n=5) and 98.7% with RSD of 2.25% (n=5), respectively. The contents of ursolic acid and luteolin in
leaves of Paulownia fortune were the highest in July, which provides theoretical basis for determining harvest time of
medicine material.
Key words: Paulownia fortune; HPLC; ursolic acid; luteolin
泡桐属植物（Paulownia）在我国除东北北部、内
蒙古、新疆北部、西藏等地区外均有分布，是非常重
要的速生用材树种之一 [1]。《中药大辞典》中有记
述：“桐叶主恶蚀疮著阴，皮主五痔，杀三虫。花主
傅猪疮，消肿生发。”；其具有降压止血的功效，同时
还具有杀虫、平喘、祛痰、治手足癣与烧伤、消肿等
作用[2]。赵留振用泡桐叶、花、皮和根有效地治疗人
冻疮、下肢溃疡、鹤膝风、峰螫伤、骨折和肩炎等外
科常见病，显示了泡桐叶、花、皮和根等组织器官可
能含有具治疗作用的次生代谢产物[3]。李晓强等采
用硅胶色谱层析柱和波谱分析从白花泡桐叶中分
离鉴定洋芹素（Ⅰ）、木樨草素（Ⅱ）、橙皮素（Ⅲ）、柚
收稿日期：2011-06-18
基金项目：湖南省科技计划项目（2009SK3128）；湘西宏成制
药有限责任公司科技开发项目（XHZYP200921）
作者简介：吾鲁木汗·那孜尔别克（1961-），女，维族，新疆托
里县人，教授 ，主要从事生物工程技术方向的研究。
通讯作者：恩特马克·布拉提白
湖南农业科学 2011，（21）：102~105 Hunan Agricultural Sciences
DOI:10.16498/j.cnki.hnnykx.2011.21.042
A B
*
*
0 10 20 30 min 0 10 20 30 min
（A：熊果酸对照品；B：白花泡桐样品；*：熊果酸）
图 1 熊果酸对照品和白花泡桐样品的
高效液相色谱仪图谱
A B
* *
0 10 20 30 min 0 10 20 30 min
图 2 木犀草素对照品和白花泡桐样品的
高效液相色谱仪图谱
（A：木犀草素对照品；B：白花泡桐样品；﹡：木犀草素）
皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷（Ⅳ）、熊果苷（Ⅴ）、4-羟
苄基-β-D-葡萄糖苷（Ⅵ）、落叶酸（Ⅶ）、1-乙酰基-
2-( 3′ 2 羟基)十八烷酸甘油酯（Ⅷ）等 8种新的化
合物[4-5]。张培芬和李冲用硅胶柱色谱和聚酰胺柱色
谱从白花泡桐花中分离纯化次生代谢产物，经波谱
分析鉴定出 11种黄酮类化合物[6]。陈保红和李寅超
以卵蛋白致敏的引喘小鼠为动物模型，观察泡桐花
精油对小鼠哮喘气炎症的抗炎作用，结果表明泡桐
花精油对哮喘鼠气道过敏性炎症具有较好的抗炎
作用[7]。Kassi等用 MTT法、流式细胞术和蛋白印迹
等方法检测熊果酸对细胞活性和细胞凋亡的影响，
结果表明熊果酸显著地抑制了 PC-3和 LNCaP等
癌细胞的增殖，并导致了 PC-3和 LNCaP等癌细胞
的凋亡[8] 。上述国内外研究结果表明，白花泡桐的
叶、花、根等组织器官含有熊果酸、木犀草素等多种
生物活性的次性代谢产物，可制成抗癌、抗菌和抗
感染的药品。湖南湘西宏成制药有限责任公司以白
花泡桐叶为原料研发“复方桐叶烧伤油”，其国药准
字为 Z20063825，临床试验结果证实该药物对烧烫
伤有很好的效果。本研究应用 HPLC法对湖南湘西
宏成制药有限责任公司中药种子繁殖基地 6月至
9月白花泡桐叶中熊果酸和木犀草素的含量进行
测定，以期为白花泡桐药材原料采收时机的把握提
供理论依据。
1 试验仪器与材料
日本岛津系统高效液相色谱仪：包括 SPD-20A
检测器，LC-20AT双泵；瑞士 Metiler Toledo AG285
型电子天平；150 mL 索氏提取器；北京宏祥隆
SY1000超声循环提取系统；瑞士步琪 R-210型旋
转蒸发仪。
熊果酸、木犀草素标准品（质量分数>98%），购
自贵州迪大科技有限责任公司；甲醇为色谱纯，购
自天津恒兴公司；乙醚、石油醚、乙酸均为分析纯。
检测样品取自湘西宏成制药有限责任公司 4处原
料基地，对照样品采自吉首大学新校区。所有样品
均烘干后研碎，经过筛孔直径 0.18 mm（80目）标准
筛过滤，密封后置于－80℃冰箱保存备用。
2 试验方法与结果
2.1 熊果酸色谱条件
色谱柱：Shim-Pack C18柱（4.6 mm×150 mm，5
μm)；流动相：甲醇-水-乙酸（体积比为 85∶15∶0.5）；
检测波长：210 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；进
样量：10 μL。在此条件下熊果酸与其他成分分离度
较好（R>1.5）。在上述条件下对熊果酸对照品和白
花泡桐样品分别进行测定，色谱图如图 1所示。
2.2 木犀草素色谱条件
色谱柱：Shim-Pack C18柱（4.6 mm×150 mm，5
μm）；流动相：甲醇-水-乙酸（体积比为 60∶39∶1）；
检测波长：350 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；进
样量：20 μL。在此条件下木犀草素与其他成分分
离度较好（R>1.5）。在上述条件下对木犀草素对照
品和白花泡桐样品分别进行测定，色谱图如图 2
所示。
2.3 对照品溶液的制备
取熊果酸对照品 10 mg，置 10 mL容量瓶中，
用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成含熊果酸 1
mg/mL的对照品溶液，备用。取木犀草素对照品 10
mg，置 10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻
度，摇匀，制成含木犀草素 1 mg/mL的对照品存储
溶液，再用甲醇稀释 100倍，制成含木犀草素 0.01
mg/mL的对照品溶液，备用。
2.4 供试品溶液的制备
取白花泡桐叶片细粉约 0.5 g，精密称定，置索
氏提取器，加乙醚适量，连续回流提取 6 h，滤过后
溶液挥干溶剂，残渣用石油醚（30～60℃）浸泡两次，
每次 20 mL，浸泡约 2 min，倾去石油醚液，残渣加
甲醇溶解并转移至 10 mL容量瓶，摇匀，定容，用
0.22 μm微孔滤膜过滤，取过滤液作为供试溶液。
取白花泡桐叶细粉约 0.5 g，精密称定，加 50
第 21期 吾鲁木汗·那孜尔别克等：HPLC测定白花泡桐叶不同月份熊果酸和木犀草素的含量 103
表 1 回收率测定结果（n=5）
熊果酸
样品含量
（mg）
6.575
6.572
6.580
6.575
6.577
0.128
0.127
0.129
0.129
0.128
加入量
（mg）
1.001
1.004
1.003
1.005
1.003
1.006
1.012
1.004
1.008
1.003
测得量
（mg）
7.553
7.596
7.563
7.536
7.521
1.229
1.280
1.234
1.229
1.273
回收率
（%）
97.8
100.2
98.0
97.9
97.6
97.1
101.0
97.5
96.7
101.2
平均回收率
（%）
98.3
98.7
RSD
（%）
1.10
2.24
成 分
木犀草素
mL甲醇，于超声波提取（功率 240 W，频率 50 kHz）
1 h，滤液挥干溶剂，残渣用石油醚（30～60℃）洗 4
次，每次 10 mL，倾去石油醚，残渣加甲醇溶解并转
移至 10 mL容量瓶，摇匀，定容，用 0.22 μm微孔滤
膜过滤，取过滤液作为供试溶液。
2.5 标准曲线绘制
分别吸取 1、3、5、10、15 μL的熊果酸对照品溶
液，按已定色谱条件进样，测峰面积积分值。以对照
品的进样量（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵
坐标绘制标准曲线。结果表明，熊果酸的线性范围为
1~15 μg，回归方程为 Y=0.021 X+0.052，r=0.999 6。
分别吸取 1、3、5、7、9 μL的木犀草素对照品溶
液，按已定色谱条件进样，测峰面积积分值。以对照
品的进样量（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵
坐标绘制标准曲线。结果表明，木犀草素的线性范
围为 0.01~0.09 μg，回归方程 Y= 0.001 7 X+0.002 2，
r=0.999 1。
2.6 精密度测试
分别取对照品，按照已定的色谱条件连续进样
5次，测得熊果酸、木犀草素的峰面积 RSD值分别
为 0.84%、0.92%，均在 1%以下，表明仪器性能良好。
2.7 重复性试验
取同一样品组的待测样品，平行制备 5份，按
照已定的色谱条件进样，测得熊果酸、木犀草素的
峰面积 RSD值分别为 1.78%、1.82%，表明该方法
重复性良好。
2.8 稳定性试验
取同 1份供试品溶液，在 0、2、4、8、12、24 h分
别进样，每次进样 10 mL，测得熊果酸、木犀草素的
峰面积 RSD值分别为 1.61%、1.72%，表明供试溶
液在 24 h内稳定性良好。
2.9 回收率试验
精密称取已知含量的一组样品（宏成制药公司
4号基地）各 1 g，共 5份，分别精密加入相应含量
的对照品，按 2.4 中方法制备供试品溶液，根据已
定色谱条件进行测定。测定结果为：熊果酸、木犀草
素的平均回收率分别是 98.3%、98.7%，RSD值分别
为 1.1%和 2.24%，详见表 1。
2.10 样品测定
将所有样品按照 2.4中方法制备供试品溶液，
分别平行三次取样，根据已定色谱条件进行测定。
结果表明，6月起叶片中熊果酸及木犀草素含量均
开始升高，7月份即达到最高然后全部开始下降。
宏成制药 1～3号基地所采集的白花泡桐叶片中熊
果酸含量变化趋势不明显，而 4号基地与对照组含
量下降趋势非常显著；木犀草素含量变动趋势比较
一致，均在 7月达到最高峰，8月开始明显的下降，
如图 3所示。
3 讨 论
湘西药用白花泡桐叶片是生产复方桐叶烧伤
油的主要原料，其质量直接关系到成品药的质量。
本研究小组已建立了通过高效液相色谱法检测泡
桐叶片中熊果酸和木犀草素含量的方法[9]，并测定
图 3 白花泡桐叶不同月份熊果酸和木犀草素含量变化的高效液相色谱仪图谱
◆
●◇
◇
◇
◇
●
●
●
▲▲▲
▲
■
■■
■
◆
◆
◆
7
6
5
4
3
2
1
0
熊
果
酸
含
量
（
m
g/
g）
6 7 8 9
月份（月）
▲
●
◇◆
■
1号基地
2号基地
3号基地
4号基地
对照组
A
●
◇
▲
◇
◇
◇ ■
■
■
■◆
◆
◆
◆
●
●
●
▲
▲
▲
▲
●
◇◆
■
1号基地
2号基地
3号基地
4号基地
对照组
30
25
20
15
10
5
0
木
犀
草
素
含
量
（
μg
/g）
6 7 8 9
月份（月）
B
第 21期湖南农业科学104
（上接第 95页）
[2] 叶祥盛. 武汉市主要蔬菜品质的调查[J]． 湖北农业科学，2003，
（5）：78-79．
[3] 张乐平，廖鸿昕，刘 煜，等. 氮肥减施对蔬菜硝酸盐含量及品
质的影响研究[J]. 湖南农业科学，2011，（4）：48-51.
[4] 任祖淦，邱孝煊，蔡元呈，等. 化学氮肥对蔬菜硝酸盐污染影响
的研究[J]． 中国环境科学，1997，17（4）：326-329.
[5] 廖鸿昕，刘德林，张乐平. 蔬菜硝酸盐污染及调控技术[J]. 湖南
农业科学，2009，（10）：90-92，96.
[6] 吕纪增.减少蔬菜硝酸盐积累的技术措施[J]. 农业科技与信息，
2005，（6）：4.
[7] 王 萍，刘佳佳. 安庆市售叶菜类蔬菜硝酸盐昌星的调查及污
染评价[J]. 科技信息，2009，（6）：304.
[8] 朱雅兰，李于晓. 黄石市蔬菜硝酸盐污染现状及评价[J]. 广东
农业科学，2010，37（3）：212-214.
[9] 潘住财. 蔬菜硝酸盐累积的影响因子及其防治措施[J]. 江西农
业学报，2009，21（1）：57-59，68.
[10] 焦中高，刘杰超，郑 恒. 壳聚糖对果蔬的保鲜及其机理探讨
[J]. 食品研究与开发. 2003，24（5）：114-11.
[11] 王明力，杨丽娜，黄 静. 壳聚糖复合涂膜用于蔬菜的保鲜研
究[J]. 食品工业科技. 2003，9（24）：31-33.
[12] 肖丽霞，王 乔. 壳聚糖在果蔬贮藏保鲜中的应用[J]. 保鲜论
谈，2005，5（1）：4-6.
[13] 刘航海，邓钢桥. 壳聚糖在水果保鲜中的应用[J]. 湖南农业科
学，2009，（4）：97-99.
[14] 陈海燕，张 彬，何勇松. 壳聚糖的研究进展和应用前景[J].
2007，32（2）：17-29.
[15] 张从顺，黄 霞，陈云凤. 植物生理学实验教程[M]. 北京：高等
教育出版社，2004. 48-50.
[16] 朱启忠. 生物化学技术指南[M]. 乌鲁木齐：新疆科技卫生出版
社，1995. 282-284.
[17] 上海第一医院.食品毒理[M].北京：人民出版社，1978. 365-396.
[18] 焦中高，刘杰超，郑 恒. 壳聚糖对果蔬的保鲜及其机理的探
讨[J]. 食品研究与开发，2003，3（2）：24-25.
[19] 孙 威. 叶类蔬菜贮存过程中硝酸盐和亚硝酸盐的含量研究
[D]. 哈尔滨：东北农业大学，2006.
（责任编辑：魏宝阳）
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
比较了全国多个地区的白花泡桐叶片的熊果酸和
木犀草素的含量，结果表明，湘西地区白花泡桐叶
片中这两种成分的含量高于其它地区的含量，具有
很高的药用价值[10]。本试验通过高效液相色谱法来
检测 6月至 9月湘西药用白花泡桐叶中熊果酸和
木犀草素含量的变化，研究结果可以为药用泡桐叶
片原料的采摘提供理论依据。
试验结果表明：湘西宏成制药公司不同基地所
产的白花泡桐叶片中熊果酸和木犀草素的含量随
月份变化十分明显，均从 6月起其含量上升，7月
达到最高，然后即开始下降；其中，宏成 1至 3号基
地叶片中熊果酸含量变化幅度相对于 4号基地与
对照组较小，4号基地在 7月以后的下降幅度比较
大；各组叶片中木犀草素含量的变化幅度比较一
致，均是在 7月达到顶峰以后出现比较大的下降。
从综合试验结果中可知，7月中下旬的白花泡桐叶
片中熊果酸和木犀草素的含量均为最高，适于采收
入药。
参考文献：
[1] 祁承经． 湖南植物名录[M]． 长沙：湖南科学技术出版社，1987.
36-37．
[2] 南京中医药大学． 中药大辞典[M]． 上海：上海科学技术出版社，
2006. 2055-2057．
[3] 赵留振． 泡桐的临床外用[J]． 中医外治杂志，2003，12（2）：48．
[4] 李晓强，武静莲，段文达，等． 白花泡桐叶化学成分的研究[J]．
中药材，2008，31（6）：850-852．
[5] 李栋海． 泡桐丛枝病的鉴别与防治 [J]． 安徽农业科学，2010，
（15）：7904-7905．
[6] 张培芬，李 冲． 白花泡桐花黄酮类化学成分研究[J]． 中国中
药杂志，2008，33（22）：2629-2633．
[7] 陈保红，李寅超． 泡桐花精油抗哮喘气道炎症的实验研究[J]．
中医研究，2007，20（10）：16-18．
[8] Kassi E, Papoutsi Z, Pratsinis H, et al. Ursolic acid a naturally
occurring triterpenoid, demonstrates anticancer activity on human
prostate cancer cells [J]． Journal of Cancer Research and Clinical
Oncology, 2007, 133（7）: 493-500．
[9] 李 科，吾鲁木汗·那孜尔别克，陈功锡，等． HPLC法检测药用
白花泡桐熊果酸及木犀草素的含量 [J]． 湖南农业科学，2010，
（23）：123-125．
[10] 李 科，吾鲁木汗·那孜尔别克，乔 杰，等. HPLC测定不同产
地白花泡桐中熊果酸和木犀草素的含量[J]. 药物生物技术，
2011，18（3）：251-255.
（责任编辑：张 瑞）
第 21期 吾鲁木汗·那孜尔别克等：HPLC测定白花泡桐叶不同月份熊果酸和木犀草素的含量 105