全 文 ：　　表 1 　牛至挥发油成分及其含量
NO tR(m in) 化学成分 归一化含量(%) NO tR(m in) 化学成分
归一化含量(%)
1 4.29 α-侧柏烯　α-thu jene 0.25
2 4.43 α-蒎烯　α-pinene 0.27
3 4.71 莰烯　Camphene 0.17
4 5.29 1-辛烯-3-醇　1-Oc ten-3-o l 1.00
5 5. 431 3-辛酮　3-O ctanone 0.31
6 5.51 β-月桂烯　β-M yrcene 1.00
7 5.62 3-辛醇　3-O ctano l 0.23
8 5.82 α-菲兰烯　α-Phe llandrene 0.10
9 6.10 α-松油烯　α-te rpinene 1.31
10 6.37 对-聚伞花素　p-cym ene 9.58
11 6.40 柠檬烯　Limonene 0.24
12 6.79 t-β-罗勒烯　 t-β-Oc im ene 0.44
13 7.18 γ-松油烯　γ-Terp inene 10.02
14 7.78 异松油烯　 te rpino lene 0.23
15 8.09 1, 4-桉叶油素　1, 4-C ineo le 0.79
16 10.10 α-萜品醇　α-terpineo l 0.69
17 11.90 2-异丙基-1-甲　2-Ispropy l-1-m e thoxy氧基-4-甲苯　-4-m e thy lbenze 7.13
18 - - -
19 13.34 麝香草酚　Thymo l 15.39
20 13.87 香荆芥酚　Ca rvacro l 38.22
21 16.48 石竹烯　Ca ryophy llene 6.09
22 16.72 α-香柠檬烯　α-bergamo tene 0.15
23 17.21 α-石竹烯　α-C aryophy llene 0.31
24 18.20 (+)香橙烯　(+)-arom adendrene 0.40
25 18.49 β-甜没药烯　β-bisabo lene 0.50
26 18.64 白菖烯　Ca larene 0.06
27 18.84 δ-杜松烯　δ-C adinene 0.21
28 20.19 斯巴醇　Spathu leno l 0.46
29 20.32 氧化石竹烯　C aryophy llene Oxide 0.81
30 28.24 棕榈酸　Pa lm itic acid 0.33
(2006 - 03 -06收稿)
Ana lysis on the Volatile O il inOriganum vulgare
T IAN H ui1 , LAI Dong-me i2
(1. Guangxi C ollege o f TCM , Nann ing 530001, China;2. Xiam en Institu te for D rug Contro l, Xiamen 361012, China)
Abstrac t　Objective:To ana ly sis com positions of the vo la tile o il inOriganum vulgare. M ethods:GC-MS condition:using pro-
g ramm ed tempe ra ture ga s ch rom a tog raphy cinitial temperature w as 60℃, and then raising the tem pera tu re(5℃ /m in) to 240℃, m ass-
toelec tric charge ratio w as 10 to 425. Resu lts:GC-M S identified 29 k inds o f con tents. Conc lusion:Thym ol and ca rvacro l are m ain
compositions o f the vo la tile o il inOriganum vulgare.
K ey words　Origanum vulgare;GC-M S;Thymo l;Carvacro l
黄皮果氨基酸成分分析
张永明 ,黄亚非* ,黄际薇 ,李瑞珍 ,刘　杰
(中山大学附属第三医院药剂科 ,广东广州 510630)
　　摘要　目的:分析研究黄皮果的鲜品和干品中氨基酸的组成。方法:采用 HP1050高效液相色谱仪 ,色谱条件:
Hypersil ODS色谱柱(4.0 mm ×125 mm , 5 μm);流动相为(A):10 mmo l /L Na2H PO4缓冲液(PB);(B):PB +甲醇 +
乙腈(50+35+15), 测定了黄皮果的鲜品和干品(药材)中的水解氨基酸 、游离氨基酸。结果:鲜品和药材均测定出
16种氨基酸成分 , 其中必需和半必需氨基酸 10种。鲜品游离氨基酸总量为 4. 8 mg /g,水解氨基酸总量为 15.0 m g /
g;药材游离氨基酸总量为 10.9 m g /g,水解氨基酸总量为 40. 9 mg /g。结论:黄皮果中氨基酸种类齐全 、含量丰富 ,
值得开发利用。
关键词　黄皮果;氨基酸;高效液相色谱
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2006)09-0921-04
　　*通讯作者:黄亚非 ,女 ,主任药师 ,药学专业 , Tel:(020)87537615。
　　黄皮果为芸香科植物黄皮 Clausena lansium
(Lour.)Skee ls的成熟果实 ,黄皮果气微 ,味辛 、甘 、
酸 、微温 ,核苦 。有行气 ,消食 ,化痰镇咳 ,生津 ,止渴
之功效。主治食积胀满 ,腕腹疼痛 ,疝疼 ,痰饮 ,咳
921 中药材第 29卷第 9期 2006年 9月
DOI牶牨牥牣牨牫牳牰牫牤j牣issn牨牥牥牨牠牬牬牭牬牣牪牥牥牰牣牥牴牣牥牨牴
喘 〔1〕。对黄皮果曾有一些研究 。唐闻宁 〔2〕等报道
黄皮果挥发油成分研究 。张建中等 〔3〕报道黄皮果
核中挥发油成分的研究 ,罗辉等 〔4〕报道了黄皮叶挥
发油化学成分的研究 。而有关鲜品黄皮果和黄皮药
材中氨基酸成分 ,尚未见有报道 ,其药用价值也缺乏
系统研究 ,笔者对黄皮果鲜品和黄皮果药材中氨基
酸成分进行了研究 ,为该药材的进一步开发利用 ,提
供了一定的科学依据 。
1 　实验材料
黄皮果采集于广东省广州市小洲 ,广东省中药
材公司提供 ,由广州中医药大学李薇教授鉴定 。
2 　仪器与试剂
惠普 HP1050型高效液相色谱仪 (四元梯度泵 、
自动进样器 、柱温箱和 HP1046A荧光检测器);日立
GL20A全自动 20000 r /m in高速冷冻离心机;水解
管;干燥箱。
S IGMA公司生产的氨基酸对照品 、衍生试剂邻
苯二甲醛 (OPA)、氯甲酸芴甲酯 (FMOC);分析纯
N a2HPO4;HPLC级甲醇 、乙腈 。
3 　实验方法
3.1　色谱条件和检测方法　Hype rsilODS色谱柱 ,
4.0×125 mm ,粒径 5 μm;流动相 (A):10 mmo l /L
N a2HPO4 pH 7.2缓冲液 (PB);流动相 (B):PB +甲
醇 +乙腈(50+35+15)。
线性梯度:在 0 ～ 25m in内 ,流动相 B以线性从
0%上升到 100%。流速:1.0 m l /m in。柱温 40℃。
检测波长:0m in时 ,激发波长 340 nm ,发射波长 450
nm ,检测一级氨基酸的 OPA衍生物;20.5 m in后 ,
将波长切换至激发波长 260 nm ,发射波长 305 nm
检测二级氨基酸(脯氨酸 )的 FMOC衍生物。
3.2　供试品的制备
3.2.1 　水解氨基酸供试品的制备:取黄皮果样品
适量 ,去核 ,粉碎 ,过筛 (60目 ),混匀。精密称取适
量置水解管中 ,加入 6mo l /L HC l 10 ～ 15m l,滴加两
滴新蒸馏的苯酚 ,将水解管置于冷冻剂中 ,冷冻 3 ～
5m in,抽真空 (接近 0Pa),然后充入高纯氮气;再抽
真空和充氮气 ,重复三次后 ,在充氮气状态下封口。
将已封口的水解管置于 110 ±1℃的恒温干燥箱内
水解 23 h,冷却 ,打开水解管 ,水解液过滤置 100 m l
容量瓶中 ,用蒸馏水稀释至刻度 ,取样测定。
3.2.2 　游离氨基酸供试品的制备:取黄皮果样品
适量 ,去核 ,粉碎 ,过筛 (60目 ),混匀。精密称取适
量置烧杯中 ,加适量的水 ,超声波处理 30 m in, 0.45
μm滤膜过滤 ,滤液置 25 m l容量瓶中 ,加入 15 m l
乙醇 ,用蒸馏水稀释至刻度 ,取样测定。
3.3　方法学的考察
3.3.1　氨基酸的分离效果:16种氨基酸在 25 m in
内得到很好的分离 ,分离度大于 1.5。 (见图 1)
图 1　氨基酸对照品色谱分离图
3.3.2　精密度与回收率试验:对 16种氨基酸组成
的标准溶液 ,进样 1 μl,连续进样 5针 ,保留时间和
峰面积的相对标准偏差 RSD分别为 0.05% ～
0.50%和 0.7% ～ 2.9%,回收率均大于 93%。见表
1。
3.4 　鲜品的测定结果　黄皮果鲜品的游离氨基
酸 、水解氨基酸以及黄皮果药材的游离氨基酸 、水解
氨基酸含量测定结果见表 2。
4 　结果
黄皮果中共检测出氨基酸 16种 ,其中 10种为
　表 1 　精密度与回收率试验(n=5)
氨基酸名称
RSD%
峰面积 保留时间
氨基酸名称
RSD%
峰面积 保留时间
Asp 1.32 0. 05 Tyr 1.35 0. 08
G lu 0.84 0. 05 Va l 0.88 0. 05
Se r 1.71 0. 06 M et 0.83 0. 04
G ly 1.02 0. 14 Phe 1.63 0. 09
H is 2.14 0. 13 I le 1.58 0. 14
Thr 1.08 0. 07 Leu 1.19 0. 34
Arg 0.89 0. 07 Lys 2.82 0. 50
A la 0.89 0. 10 P ro 2.89 0. 10
922 中药材第 29卷第 9期 2006年 9月
　　表 2 　黄皮果中氨基酸含量测定结果(mg /g, n=3)
氨基酸名称
鲜品
游离氨基酸
含量 RSD(%)
水解氨基酸
含量 RSD(%)
药材
游离氨基酸
含量 RSD(%)
水解氨基酸
含量 RSD(%)
天门冬氨酸(Asp) 0. 456 0.55 3.58 0. 92 0.862 2. 96 7. 21 0. 86
谷氨酸(G lu) 0. 219 0.91 1.30 0. 63 0.289 4. 32 4. 05 0. 56
丝氨酸(Se r) 0. 364 4.67 1.11 1. 56 0.714 4. 13 2. 86 3. 59
组氨酸(H is) 0. 054 1.06 0.53 3. 21 0.124 3. 23 1. 93 3. 21
甘氨酸(G ly) 0. 019 4.26 0.26 1. 90 <0.025 - 0. 88 3. 45
苏氨酸(Thr) 0. 046 1.26 0.37 1. 54 0.093 3. 23 1. 32 2. 08
精氨酸(Arg) 0. 583 0.34 0.99 0. 82 1.98 2. 96 3. 47 0. 75
丙氨酸(A la) 2. 39 0.63 3.76 3. 91 5.07 2. 23 6. 81 0. 10
酪氨酸(Tyr) 0. 025 2.28 0.25 1. 98 0.053 1. 10 0. 76 3. 82
缬氨酸(Va l) 0. 052 1.92 0.47 1. 07 0.107 3. 74 1. 70 0. 42
蛋氨酸(M et) 0. 014 0.00 0.076 1. 71 0.043 3. 53 0. 24 4. 11
苯丙氨酸(Phe) 0. 029 2.01 0.35 1. 63 0.086 1. 16 1. 37 0. 43
异亮氨酸( Ile) 0. 015 0.00 0.33 2. 92 0.035 1. 63 1. 26 2. 38
亮氨酸(Leu) 0. 019 0.53 0.58 2. 96 0.070 2. 86 2. 25 0. 34
赖氨酸(Lys) <0. 015 - 0.48 3. 40 0.035 2. 86 1. 83 2. 98
脯氨酸(P ro) 0. 496 2.62 0.58 4. 10 1.35 0. 49 2. 88 3. 26
氨基酸总量 4. 8 15.0 10.9 40. 9
人体必需氨基酸和半必需氨基酸。黄皮果的鲜品和
药材中各种氨基酸的含量有差异 ,而且差异的程度
各异。鲜品黄皮果游离氨基酸总量为 4.8mg /g,水
解氨基酸总量为 15.0 mg /g;黄皮果药材游离氨基
酸总量为 10.9 mg /g,水解氨基酸总量为 40.9 mg /
g。与同量鲜品黄皮果相比 ,黄皮果药材 (1 g药材
相当于 6 g鲜品)氨基酸含量较低。
5 　讨论
5.1 　氨基酸测定结果显示 ,黄皮果中含有丰富的
氨基酸 ,其种类至少有 16种 。其中 7种必需氨基酸
(分别是苏氨酸 、缬氨酸 、蛋氨酸 、苯丙氨酸 、异亮氨
酸 、亮氨酸和赖氨酸 ), 3种半必需氨基酸 (组氨酸 、
精氨酸 、酪氨酸 )。必需和半必需氨基酸的总量在
鲜品中占氨基酸总量的 29%,在药材中占 39%,具
有较高的医药用价值 。
5.2 　本文对黄皮果的鲜品和药材中各种氨基酸的
含量进行了比较 ,发现鲜品和药材中各种氨基酸的
含量存在差异并且差异程度各异 ,这可能是由于药
材在加工过程中氨基酸发生改变以及不同氨基酸有
不同的改变所致。
5.3　黄皮 ,起源于华南地区 ,大约已有 1500多年
的栽培历史 ,广东 、广西是主产区 ,其根 、叶 、核已入
药用 ,能解表行气 、健胃 、止痛 ,树皮有消肿 、去疳积
功效 。其果实是我南亚热带特 、稀 、优水果之一 ,可
以鲜食以及加工制成果冻 、果酱 、盐渍 、糖渍 、蜜饯 、
果干及清凉饮料等食品 ,黄皮果含有丰富的氨基酸
和多种人体需要的微量元素 ,具有较高的营养和药
用价值 ,值得进一步开发利用 。
参 考 文 献
[ 1] 江苏新医学院 . 中药大辞典(下册). 上海:上海科学技
术出版社 , 1977:2049.
[ 2] 唐闻宁 , 康文艺 ,穆淑珍 , 等 . 黄皮果挥发油成分研究 .
天然产物研究与开发 , 2001, 14(2):26.
[ 3] 张建和 , 蔡春 ,罗辉 , 等 . 黄皮果核挥发油成分的研究 .
中药材 , 1997, 20(10):518.
[ 4] 罗辉 , 蔡春 ,张建和 , 等 . 黄皮叶挥发油化学成分研究 .
中药材 , 1998, 21(8):405.
(2006 - 02 -15收稿)
923 中药材第 29卷第 9期 2006年 9月
Study on Am ino Acids from the Fruit ofClausena lansium
ZHANG Yong-m ing, HUANG Ya-fe i, HUANG Ji-we i, L I Rui-zhen, L IU Jie
(Pha rm acy o f the Th ird A ffiliated H ospita l, Sun Yat-sen Un ive rsity, Guang zhou 510630, China)
Abstrac t　Objective:To inve stig ate the am ino acids from the fruit ofClausenae lansium. M ethods:To determ ine the content of
hyd ro lyzed and free am ino acids from fresh fru it and dried fru it ofClausenae lansium by HPLC , 10 mm ol /L Na2HPO4(PB) was used as
m ob ile phase(A) and PB-m e thano l-ace tic ac id(50∶35∶15) w as used a s m ob ile phase(B) on a H ype rsil ODS co lumn. Results:16
kinds o f am ino acidsw ere a ssayed, 10 of a llw as necessary o rha lf-necessary am ino acids. The to tal con tent of free and hyd ro lyzed am i-
no was 4. 8 m g /g and 15. 0 m g /g in fre sh fruit;4.8 mg /g and 15. 0 m g /g in dried fru it. Conclusion:The re are abundan t am ino ac ids
in the fru it o fClausenae lansium.
K ey words　F ruc tus C lausenae Lan ii;Am ino acid;HPLC
药理
肾康丸对高糖培养的大鼠系膜
细胞 TGF-β1 及 FN的影响
肖　炜 1 ,马　云2 ,魏连波 1
(1.南方医科大学珠江医院中西医结合肾病中心 ,广东广州 510282;2.南方医科大学南方医院药局 ,广东
广州 510515)
　　摘要　目的:观察肾康丸对高糖培养大鼠系膜细胞(MC)分泌转化生长因子(TGF-β 1 ,及纤连蛋白(FN)分泌
mRNA表达的影响 ,探讨其防治 DN的分子机制。方法:体外培养大鼠 M C,将细胞分为 6组:低糖组 、高糖组 、正常
血清组 、开搏通组 、肾康丸高 、低剂量组。培养 72 h后 ,采用双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测高糖对 MC分泌
TGF-β 1和 FN的影响;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法检测高糖对 TGF-β 1和 FN mRNA的表达的影响;同
时研究药物血清对上述指标的影响。结果:高糖可以促进 MC分泌 TGF-β
1
和 FN, 并提高 MC中 TGF-β
1
和 FN mR-
NA的表达 , 肾康丸可以明显抑制上述作用。结论:肾康丸可以通过 TGF-β1途径抑制 MC基质分泌。
关键词　肾康丸;系膜细胞;转化生长因子 β 1;纤连蛋白
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2006)09-0924-04
　　糖尿病肾病 (D iabe tic nephropa thy, DN)是糖尿
病 (D iabetes me llitus, DM )患者临床常见而难治的
微血管并发症 ,是导致终末期肾病和 DM患者死亡
的主要原因〔1〕。 DN的发病机制目前尚未清楚 ,转
化生长因子 β1 (Transfo rm ing go rw th factor-β1 , TGF-
β1)在 DN发病中的作用不容忽视 ,涉及到细胞外基
质 (Extracellularma trix, ECM)合成与代谢〔2〕。纤维
连接蛋白 (Fibrone tin, FN)是肾小球系膜基质的重
要成份之一 ,其在肾小球硬化的发生发展过程中起
重要作用。体外研究证实 ,肾小球的 3种固有细胞
均能产生 ECM ,其中以系膜细胞 (Mesang ia l cells,
MC)最强 。因此 ,本研究采用血清药理学方法观察
体外高糖培养对大鼠 MC分泌 TGF-β1和 FN水平
及其 mRNA表达的影响 ,探讨 DN发病的可能机制;
同时观察降逆泄浊 、益气活血功效的中药新药肾康
丸对上述指标的影响 ,探讨中医药防治 DN的作用
机制 。
1　材料与方法
1.1　实验材料与受试药品 　大鼠 MC细胞株 ,购
于武汉大学;W istar雄性大鼠 ,体重 190 ～ 220 g,购
于南方医科大学(原第一军医大学)动物实验中心。
肾康丸 ,由黄芪 、芡实 、金樱子 、玉米须 、水蛭等组成 ,
南方医科大学珠江医院剂科生产 ,批号:20031214;
开搏通片 ,上海中美施贵宝药业有限公司生产 ,批
号:0402032。
1.2　主要试剂和仪器　RPM I-1640干粉 , G ib ico公
司;小牛血清 ,杭州四季青生物工程研究所;HEPES、
L-谷氨酰胺 , S igma公司;丙酮酸钠 , Am re sco公司。
Trizo lRNA提取试剂 ,北京鼎国生物科技有限公司;
逆转录酶 (AMV), Promega公司;O ligodT18 、Taq酶 、
dNTP、100bp DNA M avker, TakaRa公司;CO2 培养
箱 ,广东新绿洲生物技术研究所;S igma 3 K18台式
924 中药材第 29卷第 9期 2006年 9月