全 文 ：第 5 卷 第 5 期
2009 年 5 月
亚 太 传 统 医 药
Asia-Pacific T r aditional M edicine
Vo l.5 No.5
M ay.2009
收稿日期:2009-03-01
作者简介:彭代琴(1967-),女 ,湖北随州人 , 武汉健民集团股份有限公司工程师 ,研究方向为药品生产的质量控制。
表 1　加样回收率试验结果 (n=6)
编
号
取样量
(g)
样品中甘
草酸含量
(mg)
加 入甘
草 酸的
量(m g)
测得量
(m g)
回收率
(%)
平均
回收率
(%)
RSD
(%)
1 0.5162 0.2874 0.3436 0.6234 97.78
2 0.5025 0.2798 0.3436 0.6186 98.60
3 0.5026 0.2798 0.3436 0.6172 98.18 98.33 1.36
4 0.5051 0.2812 0.3436 0.6242 99.81
5 0.5093 0.2836 0.3436 0.6138 96.11
6 0.5155 0.2870 0.3436 0.6289 99.50
3　讨论
取甘草酸单铵盐对照品溶液 ,在 190 ～ 400nm 波长处
进行紫外光谱扫描 ,在 250nm 波长处有最大吸收 ,与《中国
药典》2005年版一部甘草含量测定项下甘草酸的测定波长
一致[ 2] 。流动相为甲醇-0.2 mol/L醋酸铵-冰醋酸(67∶33
∶1)时[ 3 ,4] ,甘草酸单铵盐的峰有拖尾现象 。原标准中甘草
T LC 法鉴别用甘草次酸作为对照品 ,且展开剂中含有毒性
较大的试剂“苯” ,本试验去掉了苯 ,优化了展开系统 ,并用
甘草对照药材替代了甘草次酸作为对照物质 ,效果较好 ,方
法较成熟 ,此次修订的定性 、定量方法准确度高 、操作简便 ,
可作为痰饮丸质量标准研究的参考资料 。
参考文献:
[ 1] 　中华人民共和国卫生部药品标准· 中药成方制剂 ·第十三册
[ S] .广州:广东科技出版社 ,1992:115.
[ 2] 　国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[ S] .北京:化学工
业出版社 , 2005:59-60.
[ 3] 　靳子明 ,王谨慧 ,窦霞.HPLC法测定祛暑胶囊中甘草酸的含量
[ J] .甘肃中医学院学报 , 2008 ,25(5):34-36.
[ 4] 　李应芬 ,李照宏 ,朱正华.HPLC法测定陈香露白露片中甘草酸
的含量[ J] .药物分析杂志 , 2008 , 28(2):305-306.
(责任编辑:曾楚华)
HPLC法测定祖师麻关节止痛膏中
祖师麻甲素的含量
彭代琴1 ,任平远2 ,甘焕新1 ,苏　俊2
(1.武汉健民药业集团股份有限公司 ,湖北 武汉 430000;
2.武汉健民集团随州药业有限公司 ,湖北 随州 441300)
摘　要:目的:建立祖师麻关节止痛膏中祖师麻甲素含量高效液相色谱法测定方法。方法:色谱条件为色谱柱:
Hypersil C18柱(5μm 4.6×250mm),流动相:甲醇-水-冰醋酸(30∶70∶0.35),检测波长:324nm。结果:祖师麻甲
素在 0.0984 ～ 0.7380μg范围内时线性关系良好 , r=0.9999 ,回收率为 99.8%, RSD为 1.35%。 结论:该方法操作
简单 ,分离效果好 ,灵敏度高 , 可作为祖师麻关节止痛膏的质量控制标准。
关键词:祖师麻关节止痛膏;祖师麻甲素;含量测定;高效液相色谱法
中图分类号:R284.1　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1673-2197(2009)05-0014-03
　　祖师麻关节止痛膏由祖师麻 、樟脑 、冰片 、薄荷脑 、水杨
酸甲酯 、苯海拉明 、二甲苯麝香等组成 ,具有较好的祛风除
湿 ,活血止痛作用[ 1] 。祖师麻为方中主药 ,为了更好地控制
其质量 ,本文研究建立了高效液相色谱法测定祖师麻关节
止痛膏中祖师麻甲素含量的方法。
1　仪器与试药
岛津 SPD-10A vp高效液相色谱仪 、UV-240l分光光度
计 ,大连依利特科学仪器有限公司 Hypersil C18柱(5μm
4.6×250mm),祖师麻关节止痛膏(武汉健民药业集团股份
有限公司生产),祖师麻甲素对照品(中国药品生物制品检
定所提供 ,含量测定用 ,批号 0900-200001),甲醇为色谱纯 ,
冰醋酸 、乙酸乙酯均为分析纯 ,水为重蒸馏水 。
2　祖师麻甲素的含量测定
2.1　供试品溶液的制备
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2.1.1　对照品溶液的制备
精密称取祖师麻甲素对照品 19.68mg ,置 100mL量瓶
中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀即得。
2.1.2　供试品提取时间的选择
取供试品 4 份 ,各取 2片 ,精密加水 100mL ,分别水浴
回流提取 1 、2、3 、4h ,其它步骤同 2.1.4操作 ,结果表明 , 3h
即可提取完全 ,故将回流提取时间定为 3h 。见表 1 。
表 1　回流提取时间考察表
回流时间(h) 1 2 3 4
含量(mg/片) 0.521 0.556 0.604 0.597
2.1.3　供试品萃取次数的选择
取供试品 2片 ,剪成细条状或小块状 ,除去盖衬 ,精密
加水 100mL ,密塞 ,称定重量 ,水浴回流 3h ,放冷 ,再称定重
量 ,用水补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,精密量取续滤液
20mL ,用乙酸乙酯提取 4 次后 ,将水的体积浓缩至原体积
的 1/5 ,以高效液相色谱法在选定的检测波长测定 ,结果见
图 1 ,表明水相中的被测成分已被乙酸乙酯完全提尽 。
图 1　乙酸乙酯提取后水相中祖师麻甲素残留量考察
2.1.4　样品供试液的制备
取祖师麻关节止痛膏 2片(7cm ×10cm),剪成细条状
或小块状 ,除去盖衬 ,置 250mL烧瓶中 ,精密加水 100mL ,
密塞 ,称定重量 ,水浴回流 3h ,放冷 ,再称定重量 ,用水补足
减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,精密量取续滤液 20mL ,用乙酸乙
酯提取 4次 ,每次 20mL ,合并乙酸乙酯提取液 ,蒸干 ,残渣
加甲醇适量使溶解 ,转移至 10mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻
度 ,摇匀 ,即得 。
2.1.5　阴性供试液的制备
照处方比例制备缺祖师麻的祖师麻关节止痛膏 ,照 2.
1.4项下操作 ,制备阴性供试液。
2.2　检测波长的选定
精密量取祖师麻甲素对照品溶液 1mL ,置 10mL量瓶
中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得浓度为 0.01968mg/mL的
溶液 ,置分光光度计中于 200 ～ 400nm 波长范围扫描 ,得紫
外光吸收光谱图(见图 2)。从图中可知 , 被测成分在
324nm波长处有最大吸收峰 ,故选用 324nm 为祖师麻甲素的
检测波长。
图 2　祖师麻甲素紫外光吸收光谱
2.3　色谱条件
色谱柱:Hypersil C18柱(5μm 4.6×250mm),流动相系
参考卫生部药品标准中药成方制剂第二十册收载的祖师麻
注射液含量测定所用流动相 ,即:甲醇-水-冰醋酸(30∶70
∶0.35),检测波长:324nm ,流速:1mL·min-1 ,柱温:25℃,
进样量:10μL ,在此色谱条件下 ,祖师麻甲素可与其它成分
基线分离 ,阴性组分无干扰 ,结果见图 3。
2.4　线性范围考察
精密量取祖师麻甲素对照品溶液 2.50mL ,置 10mL量
瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得浓度为 0.0492mg/mL
的祖师麻甲素对照品溶液。
取浓度为 0.0492 mg/mL 的祖师麻甲素对照品溶液 ,
依次进样 2μL 、4μL 、6μL 、8μL 、10μL 、12μL 、15μL ,记录色谱
图。以祖师麻甲素的量为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制标
准曲线 ,经回归处理 ,方程为Y =-2027.8+56028.5X , r=
0.9999 ,可见祖师麻甲素的进样量在 0.0984 ～ 0.7380μg范
围内时 ,进样量与峰面积呈良好的线性关系。
2.5　精密度试验
取浓度为 0.1968mg/mL的祖师麻甲素对照品溶液 ,
分别连续进样 5次 ,进样量 10μL ,记录峰面积 ,结果峰面积
平均值为 226290 ,RSD为 0.45%。
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A.对照品　B.样品　C.阴性样品
图 3　祖师麻关节止痛膏中祖师麻甲素 HPLC 色谱
2.6　稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液 10μL ,分别在 0 、2 、4 、6 、8 、
12 、24h 内进行分析 ,测定峰面积 ,平均值为 301434 , RSD
为 1.52%。结果表明 ,供试品溶液在 24h 内稳定 ,能保证
含量测定的时间要求 ,并具有一定的稳定性 。
2.7　重复性试验
取同一批供试品 5份 ,每份 2片(7cm×10cm),分别按
样品测定项下方法操作 ,结果 RSD为 1.44%。表明样品测
定方法重复性良好 。
2.8　加样回收试验
取已知含量的样品(含量为 0.607mg/片)5份 ,分别加
入祖师麻甲素对照品溶液(0.1968mg/mL)3.00mL ,按样
品供试液制备方法操作 、分析 ,计算结果表明 ,平均回收率
为 99.8%,RSD为 1.35%。测定结果见表 2 。
表 2　祖师麻甲素加样回收率试验结果
编号 样品含量(mg)
加入量
(mg)
测得值
(m g)
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
1 0.607 0.5904 1.195 99.59
2 0.607 0.5904 1.206 101.5
3 0.607 0.5904 1.193 99.25 99.8 1.35
4 0.607 0.5904 1.186 98.07
5 0.607 0.5904 1.202 100.8
2.9　样品含量测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10μL ,注入
液相色谱仪 ,测定 ,即得 。结果见表 3 。
表 3　祖师麻甲素含量测定结果
批号 祖师麻甲素含量(mg/片) 批号 祖师麻甲素含量(mg/片)
060602 0.447 070301 0.605
060902 0.724 070502 0.486
060103 0.603 071103 0.514
060201 0.522 071002 0.583
060401 0.542 071001 0.494
3　讨论
(1)本试验比较了样品回流提取 1、2 、3 、4h的祖师麻甲
素提取率 ,结果 3h与 4h的提取得率基本相同 ,因此确定样
品回流提取时间为 3h 。
(2)祖师麻甲素为 7 , 8-二羟基香豆素 ,又称瑞香素 ,易
溶于热水 、乙酸乙酯 、甲醇 、乙醇等[ 2 , 3] 。本方法利用祖师麻
甲素易溶于热水的性质 ,将样品用水浴回流提取 ,除去不溶
于水的樟脑 、冰片等干扰 ,将祖师麻甲素从样品中提至水溶
液中 ,再根据本品在常温水中的溶解性相对较弱 ,而在乙酸
乙酯中的溶解性好的特点 ,以乙酸乙酯从水相中萃取纯化 ,
以高效液相色谱法测定 ,有效地测定本品中祖师麻甲素的
含量 。
(3)祖师麻甲素的含量测定方法已有文献报道[ 4] ,本文
建立的方法具有样品处理简单 ,含量测定理论板数按祖师
麻甲素峰计算应不低于 2000 ,样品分离良好等优点 ,可作
为祖师麻关节止痛膏产品质量控制的依据和方法。
参考文献:
[ 1] 　国家食品药品监督管理局修订药品标准 WS 3-B-3455-98-2004.
[ 2] 　李书慧 ,吴立军 , 殷红英.祖师麻化学和药理活性研究进展[ J] .
中国中药杂志, 2002 , 27(6):401-403.
[ 3] 　甘肃省药品检验所.祖师麻有效成分的药理研究[ J] .中草药通
讯 , 1978(2):25.
[ 4] 　卫生部药品标准·中药成方制剂[ S] .第二十册 ,祖师麻注射液.
(责任编辑:曾楚华)
Determination of Daphnetin in Zushima Guanjie Zhitong Gao by HPLC
Abstract:Objective:A HPLC method fo r the determina tion of Zushima Guanjie Zhitong Gao was established.Methods:A H y-
per sil C18 co lumn w as used w ith methanol-w ater-g lacial acetic acid(30∶70∶0.35)as the mobile phase.The flow rate was 1.0mL ·
min-1 , and the de tec ting cwavelength was 324nm.Results:The linear range w as 0.0984～ 0.7380μg(r=0.9999)and aver age re-
covery was 99.8%, RSD=1.35%.Conclusion:The method was simple and sensitiv e with good sepa ration efficiency.I t could be
used in the quality contro l of Zushima Guanjie Zhitong Gao.
Key words:HPLC;Zushima Guanjie Zhitong Gao;Daphnetin;Content de te rmination
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