全 文 ：第 28卷 ,第 6期 光　谱　实　验　室 Vol . 2 8 , No . 6
2 0 1 1年 1 1月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory November , 2 01 1
HPLC测定复方祖师麻膏中祖师麻甲素的含量①
① 安徽省教育厅自然科学研究项目 ( KJ2011B182) ;宿州学院特色种植业苗种生产工程技术研究中心开放课题 ( 2001YKF19) ;宿
州学院产学研合作项目 ( 2011CXY01)
② 联系人 ,电话: ( 0557) 2871037;手机: ( 0) 13955723123; E-mail: kefengzhai@ 163. com
作者简介:翟科峰 ( 1981— ) ,男 ,安徽省无为县人 ,讲师 ,硕士 ,主要从事药物新剂型与新技术的研究工作。
收稿日期: 2011-02-27;接受日期: 2011-03-25
翟科峰②　段 红a　高贵珍a　曹稳根a　王 聪a
(宿州学院特色种植业苗种生产工程技术研究中心　安徽省宿州市汴河中路 71号　 234000)
a (宿州学院化学与生命科学学院　安徽省宿州市汴河中路 71号　 234000)
摘　要　建立复方祖师麻膏中祖师麻甲素的含量测定方法。 采用 Shim-pack V P-ODS C18色谱柱
( 250mm× 4. 6mm , 5μm) ,以甲醇 -0. 5%醋酸水 ( 31∶ 69)为流动相 ,流速为 1. 0m L· min- 1 ,检测波长为
327nm,柱温为 30℃。 祖师麻甲素浓度在 6. 32— 31. 60μg· m L- 1范围内线性关系良好 , r= 0. 9998;平均回
收率 95. 8% ( n= 6) , RSD为 3. 83%。 本法操作简便、结果准确 ,可用于复方祖师麻膏的质量控制。
关键词　复方祖师麻膏 ;高效液相色谱法 ;祖师麻甲素
中图分类号: O657. 7+ 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 1004-8138( 2011) 06-3033-04
1　引言
复方祖师麻膏是由祖师麻、当归、赤芍、香附、羌活、细辛、白术、防风、白芷、独活、桃仁、牛膝等
24味中药组成。具追风散寒、舒筋活血之功效。用于筋骨疼痛、四肢麻木、腰膝疼痛、风湿关节肿痛
等症。此方收载于国家中成药标准汇编骨伤科分册 [标准号: W S-10810( ZD-0810) -2002]。方中君药
为祖师麻 ,现代药理研究表明 [1— 3 ]其主要药效成分祖师麻甲素 (瑞香素 )具有明显的抗炎、镇痛作
用 ,与其功能主治相符 ,但原制剂中没有这方面的质量控制 ,为了提高该产品质量 ,本文建立高效液
相色谱法测定制剂中祖师麻甲素含量方法 ,提供一种简便准确的测定方法。
2　实验部分
2. 1　仪器与试剂
LC-20A T岛津高效液相色谱仪 (日本岛津公司 ) ; FA 2004电子天平 (上海精密科学仪器有限
公司 ) ; 21 QX-P 1518A分析实验室专用纯水机 (北京群先科技发展中心 )。
祖师麻甲素对照品 (中国药品生物制品检定所 ,批号 110900-200405) ;复方祖师麻膏 (安徽雪
峰制药厂制剂室 ,批号 20091112、 20091208、 20100106)。甲醇为色谱纯 ;其余试剂均为分析纯。实验
用水为超纯水。
2. 2　色谱条件 [ 4]
色谱柱: Shim-pack V P-ODS C18 ( 250mm× 4. 6mm, 5μm);流动相: 甲醇 -0. 5%醋酸水溶液
( 31∶ 69) ;流速: 1. 0mL· min- 1 ;检测波长: 327nm;柱温: 30℃ ;进样量: 10μL。
2. 3　溶液的制备
2. 3. 1　对照品溶液
准确称取祖师麻甲素对照品适量 ,用甲醇制成浓度为 31. 60μg· mL- 1母液 50mL,即得。
2. 3. 2　供试品溶液 [ 5]
取复方祖师麻膏 2片 ,除去背衬 ,剪碎 ,置于 250mL烧瓶中 ,加水 100mL,准确称重 ,回流 2h。
放冷 ,称重 ,用水补足减失的重量 ,摇匀 ,过滤 ,准确移取续滤液 20mL,用 20mL乙酸乙酯萃取 3次 ,
合并萃取液 ,蒸干。 残渣加甲醇适量溶解 ,定量转移至 10mL容量瓶中 ,用甲醇定容 ,摇匀 ,过
0. 45μm滤膜 ,即得。
2. 3. 3　阴性对照溶液
按处方比例制成缺祖师麻的样品 ,并按“ 2. 3. 2”项下方法制备阴性对照溶液。
3　结果与讨论
3. 1　色谱图
分别准确吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液进样测定 ,记录色谱图。结果对照品和供
试品在相同保留时间处同时出峰 ,而阴性对照溶液无干扰 ,见图 1。
3. 2　线性关系考察
准确吸取祖师麻甲素对照品 ( 31. 60μg· mL- 1 )溶液 2、 4、 6、 8、 10mL,甲醇稀释至 10mL容量瓶
中 ,准确吸取上述溶液各 10μL,注入液相色谱仪 ,以对照品浓度 x (μg· mL- 1 )为横坐标 ,峰面积 y
为纵坐标 ,得到回归方程为 y= 34910x+ 5598. 6, r= 0. 9998。 即祖师麻甲素在 6. 32— 31. 60
μg· mL- 1浓度范围内呈良好的线性关系。
3. 3　精密度实验
准确吸取对照品溶液 10μL,按上述色谱条件 ,重复进样 5次 ,计算峰面积积分的 RSD值为
0. 51% (n= 5) ,表明仪器精密度良好。
3. 4　稳定性实验
按“ 2. 3. 2”项下方法制备复方祖师麻膏 (批号 20091208)供试品溶液 ,分别在 0、 2、 6、 8、 12h准
确吸取该溶液 10μL注入色谱仪 ,计算峰面积的 RSD为 0. 72% (n= 5) ,说明供试品溶液在 12h内
基本稳定。
3. 5　重复性实验
照 “ 2. 3. 2”项下方法制备复方祖师麻膏 (批号 20091208)供试品溶液 5份 ,连续进样 ,计算含
量。结果 RSD值为 0. 68% (n= 5) ,表明该方法重复性良好。
3. 6　加标回收实验
取已知含量的样品 (含量为 0. 1818mg /片 ) 6份 ,分别准确加入祖师麻甲素对照品溶液
( 0. 1112mg· mL- 1 ) 3 mL,按“ 2. 3. 2”项下方法制备供试品溶液 ,依法测定。 结果见表 1,祖师麻甲
素的平均回收率为 95. 8% , RSD为 3. 83% 。
3. 7　样品测定
取复方祖师麻膏 ,批号分别为 20091112、 20091208、 20100106的制剂 ,依法制备成溶液 ,各注入
10μL,进行测定 ,祖师麻甲素平均含量分别为 0. 1803、 0. 1818、 0. 1852mg /片 (n= 3) ; RSD分别为
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图 1　高效液相色谱图
A—— 对照品 ; B—— 供试品 ; C—— 阴性对照。
0. 87% , 0. 59% , 0. 93% 。
表 1　回收率实验结果 (n= 6)
取样量
(片 )
样品含量
( mg)
加入量
( mg)
测得量
( mg)
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
2 0. 3636 0. 3336 0. 6950 99. 3
2 0. 3636 0. 3336 0. 6849 96. 3
2 0. 3636 0. 3336 0. 6791 94. 6
3 0. 5454 0. 3336 0. 8801 100. 3 95. 8 3. 83
3 0. 5454 0. 3336 0. 8468 90. 3
3 0. 5454 0. 3336 0. 8591 94. 0
3. 8　讨论
流动相的选择 ,采用甲醇 -0. 5%醋酸溶液流动相系统进行尝试 ,结果采用甲醇 -0. 5%醋酸水溶
液 ( 31∶ 69)系统 ,复方祖师麻膏中祖师麻甲素色谱峰保留时间适中 ,峰型和分离都较好。
祖师麻甲素为羟基香豆素类化合物 ,其性质易溶于热水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯等。 本实验样品
3035第 6期 翟科峰等: HPLC测定复方祖师麻膏中祖师麻甲素的含量
处理过程中 ,利用热水回流将膏体中的祖师麻甲素充分提取出来 ,再在常温下利用乙酸乙酯将其从
水相中萃取出来 ,以达到分离纯化的目的 ,减少了杂质的干扰 ,提高了分析效率。
4　结论
复方祖师麻膏为传统中成药 ,临床疗效确切 ,其质量标准仅收载了桂皮醛的含量测定 ,不甚全
面 ,本文建立的祖师麻甲素含量测定方法 ,具有分离效果好 ,基线稳定 ,峰形和精密度良好 ,干扰少 ,
灵敏度高的特点 ,可以更加有效地控制该制剂的质量。
参考文献
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Determination of Daphnetin in Fufang Zushima Plaster by HPLC
ZHAI Ke-Feng　 DUAN Honga　 GAO Gui-Zhena　 CAO Wen-Gena　WAN G Conga
( Engineer ing Research Center of Special Farm Seed Production , Suzhou University, Suzhou , Auhui 234000, P. R. China )
a(College of Chemist ry and Li fe Science,Suzhou University, Suzhou , Anhui 234000, P. R.China)
Abstract　 The method for the determination of daphnetin in Fufang zushima plaster w as
established. The chromatog raphic system fo r daphnetin analysis included the Shim-pack V P-ODS C18
column ( 250mm× 4. 6mm, 5μm ) w as adopted wi th composi tion of methanol-0. 5% acetic acid
( 31∶ 69) as the mobile phase at the f low rate of 1. 0mL· min- 1 , and the detection wavelength w as
327nm with column temperature of 30℃ . There was a good linearity for the concentration of
daphnetin in the range of 6. 32— 31. 60μg· m L- 1 w ith r= 0. 9998, and the average recovery w as
95. 8% with RSD= 3. 83% (n= 6) . The method is accurate and simple, and that can be applied to
control the quality of Fufang zushima plaster.
Key words　 Fufang Zushima Plaster; HPLC; Daphnetin
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3036 光谱实验室 第 28卷