全 文 ：2007年第6期 (总第6期)
前言
苦杏仁甙(Amygdalin)广泛地存在于蔷薇科植物的种子中,
苦杏仁甙遇水在苦杏仁甙酶的酶解或在酸性条件下会分解成氢
氰酸和苯甲醛[1]。氢氰酸具有抑制中枢神经系统的作用,过量时
会出现中毒现象[2]。因此必须限定苦杏仁甙在食品、药物中的含
量[3]。青梅及腌制产品是人们喜爱的水果,以福建、广东等省的
产量较多,其主要成分包括有机酸和黄酮类化合物,而青梅核仁
中含有苦杏仁甙。目前有关青梅核仁中苦杏仁甙检测方法的报
道较少,本文建立了青梅核仁中苦杏仁甙含量的高效液相色谱
(HPLC)定量分析方法。经石油醚对青梅核仁进行脱脂后用甲醇
提取苦杏仁甙,并用 HPLC对青梅核仁中苦杏仁甙的含量进行
检测。
1 仪器与试剂
1.1仪器
日本岛津公司 LC一 20AT高效液相色谱仪,SPD一 M20A
二级管阵列检测器、SIL一10AF自动进样器、色谱柱为 Agilent
C18柱(250mm×4.6mmi.d.,5μm)和岛津高效液相色谱仪用工
作站。
1.2试剂
苦杏仁甙对照品购于上海市化学试剂公司(E.Merch),乙
睛、甲醇为色谱纯。其它试剂均为分析纯。
2实验方法
2.1样品处理
称取干燥青梅核仁(青梅购于福建省永泰县)10.0g,研磨成
粉末后备用。
2.2分析方法的建立
利用C18柱作固定相,不同体积比的乙睛和水作为流动相。
当乙睛和水的体积比为 15:85时,苦杏仁甙和其他成分可以达
到基线分离(见图1)。苦杏仁甙在215nm波长下有最大紫外吸
收。
高效液相色谱法测定青梅核仁中苦杏仁甙
的含量
福州大学化学化工学院 陈 强 张 兰 福建省环保局 边归国
【摘要】 建立了青梅核仁样品中的苦杏仁甙检测的高效液相色谱方法。样品经石油醚脱脂,以甲醇进行索氏提取后用高效液相色谱-
二级管阵列检测器检测。在反相C18色谱柱,15%的乙腈水溶液为流动相,流速为0.5mL/min,检测波长为215nm,柱温为30℃的色
谱条件下,测得青梅核仁样品中的苦杏仁甙的含量为2.08%,RSD为1.6%(n=5),加标回收率为98.8%。
【关键词】 高效液相色谱法 青梅核仁 索氏提取 苦杏仁甙
故确定色谱条件如下:流动相:乙睛-水(15:85);柱温:30
℃;流速:0.5mL/min;检测波长:215nm;进样量:20μL。所有样
品均经过0.45μm滤膜过滤后进样。
3.结果与讨论
3.1标准曲线
将苦杏仁甙标准品溶于甲醇中,并稀释成系列浓度的标准
溶液,以峰面积对相应的苦杏仁甙浓度做标准曲线,得标准曲线
的线性回归方程:A=(2.98C-0.37)×104,r=0.9999,n=5。其中 A为
图1:苦杏仁甙在215nm波长下的色谱图(Amy:amygdalin)
流动相:乙睛-水(15:85);柱温:30℃ ;流速:0.5mL/min;检测波长:215nm;进样量:20μL
高效液相色谱法测定青梅核仁中苦杏仁甙的含量
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峰面积,C为质量浓度(mg/L)。结果表明,苦杏仁甙质量浓度在
15.0～300mg/L时,其峰面积与质量浓度有良好的线性关系。
3.2精密度实验
取质量浓度分别为 30,60,120mg/L的苦杏仁甙标准液,分
别重复进样 5次,测得峰面积,计算峰面积的相对标准偏差
(RSD)分别为0.98%,0.77%和0.84%,说明色谱的分析方法有良
好的精密度。
3.3稳定性实验
取同一份样品溶液于室温下放置,分别于 0,4,8,12h取
样,在相同的色谱条件下测定峰面积。计算其峰面积的相对标准
偏差为 0.89%,说明被测组分在本实验条件下稳定。
3.4样品测定
精确称取青梅核仁粉末 1.0000g,用石油醚脱脂,过滤后将
残渣用100mL甲醇在60℃水浴条件下索氏提取5h。提取液用
甲醇定容至 100mL,经微孔滤膜过滤器(0.45μm)过滤。由高
效液相色谱仪自动进样,进样量为 10μL,测定苦杏仁甙色谱峰
面积(见图 2),用外标法计算,样品中苦杏仁甙的含量为 2.08%
,RSD为1.6%(n=5)。
3.5加标回收率
精密称取样品粉末0.1000g,共5份。分别加入0.0010g苦杏仁
甙标准品,按样品含量测定项制备溶液并测定,计算回收率,结
果见表1,平均回收率为98.8%,RSD=1.1%(n=5)。
4结论
本实验建立了从青梅核仁中提取苦杏仁甙的方法,该方法
先将青梅核仁粉末用石油醚脱脂,过滤后将残渣用甲醇在60℃
水浴条件下索氏提取 5h,提取液用 0.45μm滤膜过滤后进入
HPLC检测,实验结果确定了青梅核仁中苦杏仁甙的含量,为继
而研究青梅核仁中苦杏仁甙水解后产生的氰氢酸含量,防止中
毒事件的发生提供有效的检测手段。
参考文献
〔1〕中国药典.1990.一部:176
〔2〕姚乾元等.气相色谱法直接测定酶解苦杏仁中苦杏仁甙含量的研究.
中药通报,1987.12(4):42
〔3〕穆静.苦杏仁甙的的研究进展.中医药信息.2002.19(3):19
图2:青梅核仁中提取的苦杏仁甙在215nm波长下的色谱图 色谱条件如图1
表1 苦杏仁甙的加标回收率
NO.
1
2
3
4
5
Added/mg
0.0010
0.0010
0.0010
0.0010
0.0010
Found/mg
0.0987
0.0989
0.0975
0.0991
0.0998
Recovery/%
98.7
98.9
97.5
99.1
99.8
环境监测
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