全 文 ：第 7 2卷 第 4 期
1 9 92年
河南医科大学学报
JO U R L O FA A N H E N NM EIC D AL U I NV ER I S Y T
V o l
.
7 2
,
N o
.
4
1 9 9 2
脚户
粉叶地锦对小鼠免疫功能影响的实验研究 `
李月华 刘 健 刘 普 刘腾先 张草沐 (河南省医学科学研究所药理研究室 )
提要 采用免疫器官称重法 ,溶血素形成 、 脾抗体分泌细胞及对 oC n A 、 L PS 诱导的 T 、 B 淋巴细胞增
殖反应等实验方法 ( M竹 法 )观察粉叶地锦水提物对小鼠免疫功能的影响 ,并与绞股蓝水提物相比较 。
发现二者在等剂量时均可增加小鼠胸腺及脾脏的重量 , 并能提高溶血素形成及脾抗体分泌细胞的形
成 。 体外实验亦证实二者对 T 、 B 淋巴细胞均有兴奋作用 。 提示粉叶地锦同绞股蓝一样均具有明显的免
疫增强作用 。
关扭词 粉叶地锦 ,绞股蓝 ;免疫功能 ;溶血素 ; M T T 法 ;小鼠
中图分类号 R 9 6 7 ; R 9 7 9 . 5
口 . 阳自
户 粉叶地锦又名白粉绞股蓝 , 它与绞股蓝
不 同 , 粉 叶地锦属 葡 萄 科植 物 , 学 名 为
P a r t h e n oc ss
u s t h o m s o n ii
, 是多年生藤本植物 ,
绞股 蓝为葫芦科植物 , 学名为 G y on st e m m a
eP nt ap hy l
a , 为草本植物 。 近年来我国及 日本
学者对绞股蓝进行了大量化学 、 药理及临床
研 究 〔 ’ , 2 〕 , 证 明它是一种与人参作用相似的
免疫增强剂 , 至于粉叶地锦有无免疫增强作
用 ,迄今 尚未见报道 。
产 ; D G 3 0 2 2 酶联免疫检测仪 : 南京国营华东
电子管厂产 。
1
.
2 动物 B A L B 小鼠 , 体重 2 0士 2 5 ,雄性 ,
由河南医科大学实验动物中心提供 。
口户
1 材料
1
.
1 材料与试剂 粉叶地锦 : 采 自浙江天 目
山 ,用其干燥藤茎及叶剪碎 ,水煎后 , 加 95 %
乙醉沉淀 , 去杂质 , 除醉 , 以其水提物进行实
验 。绞股蓝来自广西 ,取其干燥根茎剪碎后水
煎 , 加 9 5% 乙醇沉淀 , 去杂质 , 除醇 , 亦取其
水提物进行实验 ; c on A ,美国 is gln a 化学公司
出品 ; L咫 : 美国 〕 f e o u 加 r i ot r i e s 出品 ; MT :
3
一
( 4
.
5
一
d im e h t y l t h讯 2 0 1一 2一 y l一 2 , 5一 d ihP e n y l te -
t r a z o l i u m )瑞士 F l u k a 公司出品 ;异丙醇 : 上海
试剂一厂出品 ; H an k ’ s 液 : 与常规配方基本
相同 , 其中含 10 %灭活小牛血清 , 且去除酚
红 ,用等摩尔浓度的葡萄糖代之 , 以消除其在
波长 入一 4 1 3n m 处的吸收带 ,调 PH 至 7 . 2 ~
7
.
4 , 72 1 型分光光度计 : 上海第三分析仪器
厂产 , 80 一 2 型离心沉淀机 : 上海手术器械厂
2 方法及结果
2
.
1 粉叶地锦及绞股蓝水提物对小鼠免疫
器官贡 t 的影响 分别给小鼠口服粉叶地锦
或绞股兰提取物 0 . 5 9 / gk , 1 . 0 9 / kg , 2 . 0 9 /
kg 每天一次 , 连用 s d ,停药后次 日使小鼠脱
颈至死 ,解剖取其脾脏及胸腺并称其重量 ,结
果见表 1 。
表 1 粉叶地锦及绞股蓝水提物
对小砚免疫器官盆 t 的影响
免疫器官重量 (云士 、 )
水提物 剂量及用法
( g / k g
,
po )
( m s / 1 09 体重 )
脾 脏 胸 腺
对照组
; :
3 7
.
5士 4 . 9
4 8
.
2士 5 . 6 .
4 5
.
6士 1 0 . 4 .
4 4
.
6士 1 2 . 5
3 5
.
3士 1 ] . 8
5 3
.
7士 1 2 . 1
5 2
.
8士 1 9 . 4
3 8
.
8土 5 . 5
3刁. 0士 3 . 8
4 1
.
8十 6 . 7 . “
4 4
.
8士 8 . 4 “ “
4 0
.
9土 4 . 1 .
2 7
.
1土 1 1 . 0
粉叶地锦
对照组
46
.
7士 5 . 3 . ’
50
.
6士 9 . 6 ’ “
3 4
.
1士 4 . 0 .
ó日nU工心卜,`1nlù纹股蓝
、
,.
, P < 0
.
0 5
朴 , P < 0
.
0 1
由表 1 可见 ,粉叶地锦于折合生药 0 . 5 , 1 . 0
, 河南省自然科学基金资助项目
·
3 3 5
·
DOI : 10. 13705 /j . i ssn. 1671 -6825. 1992. 04. 019
河南医科大学学报 1 99 2年 第 27卷 第 4期
及 2. 0 9g / k剂量时 ,均可明显增加小鼠胸腺
及脾脏的重量 。 纹股蓝于折合生药 0 . 5 、 1 . 0 、
.2 0 9 / kg 剂量时可增加小鼠胸腺重量 ,而于
1
·
0 9 / kg 及 .2 0 9 / k g 时才能增加脾重 。
2
.
2 对溶血素形成的影响 给 BA L B 小鼠
腹腔注射以无菌生理盐水洗涤三次的 20 %
压积绵羊红细胞 , 每鼠 0 . s ml 致敏 ,致敏后
次日 ,按不同剂量组 口服给药 , 每天 l 次 , 连
用 s d , 停药后次日取各 小鼠眼眶血分离血
清 ,置 56 ℃水浴 中 30 m in 灭活补体后 , 稀释
30 0 倍待用 。 取各稀释 3 0 倍的小鼠血清 l
ml + l
:
10 经制备的豚 鼠血清 l ml 十 l : 5
s R BC O
.
5 m l
, 每管设 一平 行管 , 对照管内不
加小鼠眼眶血清而代之 以 l ml 的生理盐水 ,
将上述各试管置于 37 ℃水浴中孵育 30 m in ,
于 2 0 0 0 r / n im 离心 5 m i n ,取上清液于 7 2 1 分
光光度计波长 4 13 n m 处测 o D 值 。 结果见表
2
。
次日口服给药 ,每天 1次连用 5次 ,于停药后
次日 ,断颈放血处死 ,取脾 ,经匀浆洗涤后 ,用
含 5%小牛血清的 aH kn ’ s 液配成 1 . 6 x 1 07
个脾细胞每 lm 的悬液 , 同时用含 5%小牛血
清的 H a n k ’ s 液配成 0 . 8写 s R现 及 l : 8 稀
释的新鲜混合豚鼠血清 ,将上述三种液体各
取 1 m l 加入试管内混匀 , 每管设一平行管 ,
对照管 内不加脾细胞而代之 以 l ml H a n k
液 ,将各管置于 37 ℃水浴中孵育 l h ,取出离
心 2 0 0 0 r / m in 10 m in , 取其上清液 于 7 2 1 分
光光度计 入一 4 13 n m 处测 o D 值 ,结果见表
3
。
, ,
农 3 粉叶地铆及绞股蓝水提物
对小民脾抗体分泌细胞的形响
水提物
对照组
剂童及用法
( g / gk
,
op )
O D
( x士 s )
衰 2 粉叶地铆及绞股蓝水提物
对小爪溶血素形成的影响
2
.
0
1
.
0
0
.
5
粉叶地锦
剂量及用法
( g / kg
,
po )
O D
(云士。 )
对照组水提物
对照组
2
.
0
1
.
0
0
.
5
0
.
2 3士 0 . 0 8
0
.
8 8士 0 . 2 5二
0
.
4 7士 0 . 6 0 .
0
.
4 4士 0 . 14 ’
0
.
5 7士 0 . 1 6
0
.
7 2士 0 . 08 .
0
.
6 7士 0 . 06
0
.
6 6士 0 . 0 7
2
.
0
1
.
0
0
.
5
0
.
2 2 1士 0 . 0 4 9
0
.
4 38士 0 . 0 38 `
0
.
3 7 1士 0 . 0 1 .
0
.
3 7 6士 0 . 02 3 .
0
.
4 3 6士 0 . 0 2
1
.
0 2 0士 0 . 2 4二
0
.
8 8 5士 0 . 0 5 “ .
0
.
7 5 0士 0 . 2 0 ’
叫. 曰
绞股蓝
, P < 0
.
0 5 , , P < 0
.
0 1
粉地叶锦
对照组
2
.
0
1
.
0
0
.
5
绞股蓝
釜 P < 0
.
0 5
甘 , P < 0
.
0 1
由表 2 可见粉叶地锦水提物于折合生药
为 0 . 5 , 1 . 0 , 2 . 0 9 / kg 口服时 ,均可使小 鼠血
清 O D 值明显升高 ,尤 以 2 . 0 9 / kg 时最为明
显 ,而绞股蓝仅于 2 . 0 9 / kg 时才能明显提高
o D 值 ,提示二者均可促进溶血素形成 。
2
.
3 对脾抗体分泌细胞 ( P F c )的影响 取
B A L B 小鼠一批 ,每鼠腹腔注射 0 . s ml 以生
理盐水洗涤 3 次的 10 %绵羊红细胞 ,致敏后
由表 3 可见 , 不同剂量的粉叶地锦及绞
股蓝均可提高 o D 值 , 提示二者都能促使脾
抗体分泌细胞的形成 。
.2 4 对 C on A 及 L SP 诱导 T 、 B 淋巴细胞增
殖反应的影响 本实验采用 M竹 比色法 ,
M T 是一种黄色水溶性粉末 , 易被活细胞吸
收 ,在活细胞线粒体水解酶的作用下 ,变化为
紫黄色不溶性甲脱 四氮哇而显色 , 故增殖的
细胞愈多 ,其颜色愈深 ,其 O D 值与活细胞数
及细胞活性呈正相关性 。 取正常 B A BL 小鼠 ,
拉脱颈椎处死 ,取脾 ,用完全培养液制备成浓
度为 6 x l 印个 / m l的脾细胞 悬液 。 实验用
4 X 10 孔微孔培养板 ,各孔加入 c on A 或 LSP
3 3 6
李月华等 粉叶地锦对小鼠免疫功能影响的实验研究
口户
尸 .
溶液各 0 5川 , 各用药组加人相应浓度的药物
10 0 林l ,对照组加入 10 0 卜一完全培养液 ,所有
各孔均加入 6 又 1 0 7 个 /m l 脾细胞悬液 5 0 林l ,
c o n A 和 L p s 的终孔浓度分别为 7 . 5 协s/ ml
和 7 . 8 件l / m l ,脾细胞的终孔浓度为 1 . s x l o ,
个 / m l ,粉叶地锦及绞股蓝水提物的药物浓度
为 1 0 , 10 0 , 1 0 0 0 、 s / m l 。 将上述各反应成分混
匀后 ,把培养板置于 5纬c o : 培养箱中 , 37 ℃
及饱和湿 度条件下培养 , 4 8 h后取出离心
1’ 5 0 0 : /m in , 5 m i n , 弃去各孔上清 1 0 0 以 ,各
孔加入新配制的 MT 液 10 闪 ,在上述条件
下继续培养 4 h ,取出 ,各孔加入 10 0 时 二甲
基亚矾 ,充分混匀 ,静置数分钟以使细胞生成
的甲麟四氮充分溶解 , 各孔再 加入蒸馏水
1 0 0 林I ,又以 2 0 0 林l 的蒸馏水调零点 , l h 内测
O D 值 ,结果见表 4 ,检测波长为 5 70 n m ,参照
波长为 6 3 0 。 m 。
表 4 粉叶地锦及绞股蓝水提物对 C O . A 及
L p s 诱导 T 、 B 细胞增殖反应的形响
水提物
对照组
浓度
阳 /m l
O D (云士 召 )
C O n A L l拐
0
.
2 4士 0 . 0 6 0 . 15士 0 . 0 5
0
.
5 1士 0 . 2 9 . 0 . 49士 0 . 1 2 .
0 57士 0 . 3 6 . 0 . 58士 0 . 3 3 .
0
.
4 0士 0 . 0 8 件 0 . 86士 0 . 10 .
0
.
3 3士 0 . 10 9 . 0 . 5 1士 0 . 3 2 .
0
.
3 72士 0 . 11 0 0 . 2 30士 0 . 1 2
0
.
5 6 2士 0 . 0 6 8 . 0 . 5 3 0士 0 . 0 4 .
0
.
5 6 5士 0 . 0 3 5 . 0 . 5 7 5士 0 . 0 6 .
0
.
5 5 6士 0 . 0 6 6 . 0 . 4 68土 0 . 14 .
结构 。 其中四种与人参皂贰 R 。 , R b 。 , R 。 及 F Z
完全相同 ,因此绞股蓝有 “ 第二人参 ”之美称 。
实验证明 : 绞股蓝有抑制肿瘤细胞增殖 ,
抗疲劳 ,抗胃溃疡及调节脂质代谢等方面的
药理作用 。经我们实验室发现 :绞股蓝与属于
葡萄科的粉叶地锦 (又名白粉绞股蓝 )于等剂
量的情况下 ,二者均可使脾脏及胸腺的重量
增加 , 并可使小鼠对绵羊红细胞的溶血素形
成增加 ,二者均于 2 . 0 9 / kg 剂量的作用最为
明显 。 粉叶地锦及绞股蓝的水提物亦增加小
鼠脾抗体分泌细胞的形成 , 且二者亦均 于
么 0 9 / kg 剂量时作用最为明显 ,说 明粉叶地
锦及绞股蓝均 可提高小鼠的体液免疫功 能 。
采用 M T 比色法及 酶标分光 光度法测 定
co
n A 及 LSP (分别为 T 细胞及 B 细胞有丝分
裂原 )对 T 、 B 淋巴细胞的增殖反应 , 实验发
现 : 粉叶地锦及 绞股蓝水提 物于折合生药
1 0
、
1 0 0
、 及 1 0 0 0 卜g / m l 浓 度 时 , 均 可提 高
C on A 及 LSP 所诱导的 T 、 B 淋巴细胞的增殖
反应 ,该结果亦进一步证实粉叶地锦水提物
在体外除对 B 淋巴细胞有兴奋作用外 , 对 T
淋巴细胞亦有刺激作用 。 仁述实验结果 , 充分
说明粉叶地锦和绞股蓝一样均具有明显的免
疫增强作用 ,从而为进一步开发利用粉叶地
锦提供了科学依据 。
致谢 本室刘展江 、 赵志鸿提供水提物 。
lóU
卜nō钊”
l八U找匕Unù洲n们洲r一l0)八1ù.月二(ēO曰”], l(ùU粉叶地娜口户
对服组 一
纹 10
股 1 0 0
蓝 1 0 0 0
必 考 文 献
朴 P < 0
.
05
3 讨论
纹股蓝又名七叶胆 , 在我国民间常用于
治疗咳嗽 , 哮喘 , 传染性肝炎等 , 自 1 9 7 6年以
来 日本学者对绞股蓝作了大量化学及药理工
作 ,先后分离得到并确定了五十余种皂贰的
陈压 . 植物绞股蓝在 日本的研究概况 . 浙江医学 .
1 98 6
,
3 一 33
张国安 ,周如珍 . 绞股蓝化学成分研究 . 中成药研
究 , ] 98 6 , 3 : 3 1
李月华 ,等 . 香菇多糖对小鼠免疫功能影响的实
验研究 . 河南医科大学学报 , 1 9 87 , 2 : 23
蒲丽嫂 ,张覃沐 . 雷公藤内脂对 T 淋巴细胞功能
的影响 . 中国药理学报 , 19 90 , 1 1 : 76
( 1 9 9 1
一
1 0
一
2 4 收稿 )
、 ,.
·
3 3 7
·
第 7 2卷 第 4期
1 9 9 2年
河南医科大学学报
J OU R NA L O F E H NA NM IE DC A LUI N V石 RS I T Y
V o l
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7 2
,
N o
.
4
19 9 2
蔬菜对大鼠肝匀浆脂质过氧化物生成的影响
张菊峨 陈本悠 赵卫星 金国平 王树立 (生物化学教研室 ) , ,
提要 研究了郑州市常见蔬菜对大鼠肝匀浆脂质过氧化物生成的影响 。 发现各种蔬菜的生理盐水
或蒸馏水菜浆均有明显抑制过氧化脂质生成的作用 ,抑制作用随菜浆浓度增加而增强 ;生菜浆较熟菜浆
的抑制作用更强 。 提示各种蔬菜中可能存在着天然抗氧化物 。
关往词 蔬菜 ; 鼠肝匀浆 ;脂质过氧化物
中图分类号 R 15 1 · 3
脂质过氧化学说已成为实验病理学 、 营
养学 、 毒理学的重要理论之一 仁’ 〕 ,并与基础 、
临床和预防 医学等密切相关 ,尤与衰老 、 癌
变 、 畸变和突变等有关川 。 自由基学说认为 :
在某些因素作用下 ,体内组织 中自由基代谢
平衡紊乱 。 过多的高活性自由基对生物膜脂
质双层 中的多不饱和脂肪酸攻击 ,产生脂质
过氧化物 , 使膜结构发生变化 , 引起膜功能改
变 s[] ;过氧化脂质可使某些酶失活 , 核酸 、 蛋
白质结构发生异常 , 以及 引起溶酶体破裂
等 .z[ `〕 , 引起某些疾病及老化 3[, “ 〕 。 蔬菜是人
类的日常食物之一〔`〕 ,但其与防病 、 抗衰老及
抗脂质过氧化作用方面的工作尚未见报道 。
本实验以郑州市常见蔬菜制成生理盐水匀浆
对大鼠肝匀浆脂质过氧化物生成进行观察 。
现将结果报告下 。
1 材料与方法
1
.
1 试剂及仪器 硫代 巴比妥酸 (T B A ) ( .B
R )
: 上海试剂二厂 ; 正丁醇 ( A . R ) : 北京化 工
厂 ;三轻甲基氨基甲烷 ( rT is ) (P . d ) : 上海化学
试剂采购供应站试剂 厂 , lF u k a 进 口分装 ;顺
丁烯二酸 (马来酸 ) ( A . R ) : 北京化工厂 。 sD -
20 0 组织捣碎机 : 上海标本模型厂 ;玻璃匀浆
. 勺脚
E x ep r im e n at l s ut d y o f t h e e f f e e t o f P a r t h e n o e i s u s t h o m s o n i i o n t h e
im m u n o l o ig e f u n e t i o n o f m i e e
八 Y I阳触目汉油名 J如沉 , 乙如 J峋 , 乙如 了叫咖砚 , Z俪夕罗如卿 (月如口忿翔成添晓 of 卫配必以 5疏由泊郎 , 刀细呐咖 )
yB m
e a n s o f u n m u n e or g a n
一 w e ihg l n g m e t h od
,
h e m o ly s in f o r m a ti o n t es t
, s P le e n a n ti饮川 y 一 se e r e ti n g
c el f or m a tion t est
a n d th e a义砚 y of th e 少目」f e r a t iv e r e a e it v i t y of ht e T an d B ly m hP oc y t e i n d u c e d by
e o n ^ an d L咫 ( M竹 m e t h od ) , t h e e f f e e t 。 r t h e w a t e : e x t r a e t 。 f p a r t h o n oc 俪 u s t h o m s o n i扩w as s t u d i e d
a n d e o m因 r ed w i t h t h a t o f G y n OS t e m m a pe n at Ph y l la . E x pe r im e n at l d a at s h o w e d t h a t bo t h o f t h e m a t
th e sa m e d osa
g e e o u l d i n e e a s e t h e w e i g h t o f s p le e n a n d t h y m u s gl a n d
, a n d e n h a n e e t h e h e m o ly s i n f o r
-
m a t i o n a n d s P le e n a n t i饮劝y 一 se e r e t i n g e e ll s f o r m a ti o n i n m i e e . I n v i t r o , w a t e r e x t r a e t s o f P a r t h e n oc is u s
ht o m s on i i a n d G y n璐 t e m m a ep n讯hP y l la e o u ld s t im u l a t e t h e Pr o li f e r a ti v e r e a e ti v i t y o f t h e T a n d B ly m -
Ph oc y t e s i n d u e e d b y C o n A a n d L P S
.
K e y w or d s
:
P a r t h e n oc is u s t h o m s o n i i
,
G y n os te m m a ep
n at Ph y ll a ; im m u n o l og ie f u n e t i o n ; h e m o lys in
f or m a t i o n ; M I T m e t h od
,
m o u se
·
3 3 8
·