全 文 ：收稿日期:2008-12-22;　修订日期:2009-04-15
基金项目:国家科技支撑计划项目课题(No.2007BA27B06);
海南省海口市重点科技计划项目(No.2008-0000168)
作者简介:李海龙(1978-),男(汉族),河南杞县人 ,现任海南医学院助教 ,
硕士学位 ,主要从事天然产物提取及分析研究工作.
＊通讯作者简介:张俊清(1964-), 女(汉族),安徽含山人 , 现任海南医学
院药学系教授 ,硕士学位 ,主要从事中药质量标准与安全性评价及中药药
物动力学研究工作.
海南胆木药材指纹图谱研究
李海龙 ,谭银丰 ,赖伟永 ,刘明生 ,符乃光 ,张俊清＊
(海南医学院 ·海南省热带药用植物研究开发重点实验室 ,海南 海口　571101)
摘要:目的 采用高效液相色谱法建立海南胆木药材的指纹图谱 ,为海南胆木药材的生产提供质量控制方法。方法 采用
高效液相色谱法 , 色谱柱为 DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm, 5 μm);检测波长为 227 nm;流动相为甲醇 -0.10%磷酸
水溶液 , 二元梯度洗脱。结果 海南胆木药材指纹图谱中 ,共有峰相对保留时间与相对峰面积的精密度 、重复性和稳定性
的 RSD均小于 3%, 符合有关规定。结论 所建立指纹图谱可用于海南胆木药材的质量控制。
关键词:海南胆木;　高效液相色谱法;　指纹图谱;　质量控制
中图分类号:R282.6　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)11-2710-02
StudiesontheFingerprintChromatographyofHainanNaucleaofficinalis
LIHai-long, TANYin-feng,LAIWei-yong, FUNai-guang, LIUMing-sheng,ZHANGJun-qing＊
(HainanMedicalColege, Haikou571101, China)
Abstract:ObjectiveToestablishtheFingerprintChromatographyofHainanNaucleaofficinalisbyHPLCandprovidethemeth-
odforqualitycontrolofHainanNaucleaofficinalis.MethodsAnHPLCmethodwiththeDiamonsilTMC18 column(250 mm×4.6mm, 5μm)andamixtureofmethanol-0.10% phosphoricacidsolution(dualgradientelution)asthemobilephasewasused.
Thedectectionwavelengthwassetat227nm.ResultsHPLCfingerprintchromatographyof10 batchesofsampleswasestablished.
Theresultsshowedthatthismethodhadagoodrepeatabilityandthe 8 commonpeakshadanexclusiveproperties.
ConclusionThefingerprintestablishedcanbeusedforqualitycontrolofHainanNaucleaeofficinalis.
Keywords:HainanNaucleaeoficinalis;　HPLC;　Fingerprint;　Qualitycontrol
　　胆木为茜草科乌檀属乔木乌檀 NaudeaoftcinalisPierrcexPi-
tard干燥的茎和根 , 具有清热解毒 ,消肿止痛等功效。在我国已
用胆木制成注射液及胆木浸膏片 ,治疗钩端螺旋体和上呼吸道感
染 [ 1] 。文献报道 [ 2 , 3]海南胆木中有效成分为生物碱类 ,其中异长
春花苷内酰胺(isovincosidelactone)含量较高。为确保海南胆木
药材生产的质量可控 ,笔者采用高效液相色谱法 , 建立了海南胆
木药材生物碱类成分的检测方法 ,通过对海南五指山地区不同栽
培地区海南胆木药材的研究 ,建立其稳定可行的指纹图谱。
1　仪器与试药
Waters515高效液相色谱仪;国家药典委员会 2004年 A版
“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”。色谱纯甲醇 , 试验用水
为纯净水 , 其他试剂均为分析纯。异长春花苷内酰胺对照品(中
国药品生物制品检定所 , 110831-200302);胆木药材共 10批 ,采
自海南五指山地区栽培地不同区域 ,经中国医科院兴隆分所陈伟
平教授鉴定。
2 　方法与结果
2.1 　色谱条件 色谱柱为 DiamonsilTMC
18
(250mm×4.6 mm, 5
μm);检测波长为 227 nm;柱温为 30℃;流动相为甲醇 -0.10%
磷酸水溶液 , 二元梯度洗脱 ,洗脱时间为 70 min, 流速为 1.0 ml/
min;进样量为 20 μl,所有组分在 70 min内出峰完毕。梯度洗脱
条件见表 1。
2.2 　溶液制备
2.2.1　对照品溶液制备 精密称取异长春花苷内酰胺对照品适
量 , 置于 10 ml容量瓶中 , 加甲醇溶液适量溶解 , 并定容至刻度 ,
配制成质量浓度大约为 160 μg/ml的对照品溶液。
表 1　梯度洗脱条件
编号 时间 t/min流速 v/ml· min-1 A(%) B(%)
1 0.0 1.00 80.0 20.0
2 10.00 1.00 70.0 30.0
3 15.00 1.00 60.0 40.0
4 25.00 1.00 50.0 50.0
5 40.00 1.00 40.0 60.0
6 50.00 1.00 30.0 70.0
7 55.00 1.00 50.0 50.0
8 60.00 1.00 70.0 30.0
9 70.00 1.00 80.0 20.0
　　A为 0.10%磷酸溶液 , B为甲醇溶液
2.2.2　供试品溶液制备 取胆木药材 0.5g, 精密称定 ,置 100 ml
具塞锥形瓶中 ,加入 70%乙醇 50 ml, 称重 , 于沸水浴中加热回流
40 min, 放冷 ,称重 ,用 70%乙醇补足减失的质量 , 滤过 ,取续滤液
适量 , 以 0.45 μm微孔滤膜滤过 , 即得供试品溶液。
2.3　方法学考察
2.3.1　 精密度实验 取同一份供试品溶液 ,连续进样 6次 , 记录
其图谱 。计算各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的
RSD。结果表明 , RSD分别为 0.09% ～ 0.21%和 0.19% ～
2.55%,均小于 3.0%,符合指纹图谱的要求。
2.3.2　稳定性实验 取同一份供试品溶液 ,分别于制备后 0, 2,
4, 8, 16, 24 h进样 ,记录其图谱。计算各色谱峰的相对保留时
间和相对峰面积比值的 RSD。结果表明 , RSD分别为 0.06% ～
0.23%和 0.21 ～ 2.68%, 均小于 3.0%, 符合指纹图谱的要求。
2.3.3　重复性实验 取同一批次的胆木 6份 , 按供试品溶液制
备方法制备供试品溶液 , 分别进样 , 记录其图谱。计算各色谱峰
的相对保留时间和相对峰面积比值的 RSD。结果表明 , RSD分别
为 0.08% ～ 0.22%和 0.21% ～ 2.94% ,均小于 3.0% , 符合指纹
图谱的要求。
2.4 　指纹图谱的建立 、分析与评价
2.4.1　指纹图谱的建立 按照供试品溶液制备方法将 10批药
材制备成供试品溶液 , 分别进样检测 , 测定所有供试品溶液的
HPLC色谱图。根据 10批次供试品测定结果所给出的峰数 、峰
·2710·
时珍国医国药 2009年第 20卷第 11期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.11
值(积分值)和相对保留时间等相关参数 ,进行分析 、比较 , 制定
优化的指纹图谱。见图 1。
图 1　异长春花苷内酰胺对照品色谱图
2.4.2　共有峰确定 根据 10批胆木供试品的检测结果 ,比较色
谱图。选择胆木供试液图谱中峰面积较大 、峰形较好的色谱峰作
为共有峰 , 共 8个(见图 2), 其中 7号峰为异长春花苷内酰胺(为
胆木药材主要成分),其峰面积约占总峰面积 70%, 峰形稳定 ,可
将该峰作为参照峰。
图 2　海南胆木药材的指纹图谱
2.4.3　共有峰相关信息 根据 10批胆木样品的色谱图结果 , 以
7号峰作为参照峰 , 计算各共有峰相对保留时间 , 结果 RSD<
2.0%(见表 2)。 8个共有峰其峰面积总和占总峰面积平均百分
比为 93%。以参照峰峰面积为基准 , 计算各共有峰峰面积与参
照峰峰面积的比值 ,共有峰面积比值基本固定。结果见表 3。均
符合指纹图谱的要求。
表 2　共有峰相对保留时间
峰号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 标定位置 RSD(%)
1 0.231 0.232 0.231 0.231 0.231 0.231 0.232 0.231 0.233 0.231 0.231±0.002 0.30
2 0.446 0.445 0.446 0.446 0.445 0.446 0.446 0.445 0.447 0.446 0.446±0.003 0.14
3 0.498 0.498 0.498 0.497 0.498 0.498 0.497 0.498 0.499 0.498 0.498±0.003 0.12
4 0.545 0.544 0.545 0.544 0.545 0.544 0.545 0.544 0.546 0.545 0.545±0.003 0.13
5 0.558 0.560 0.559 0.560 0.560 0.561 0.561 0.561 0.563 0.560 0.560±0.003 0.25
6 0.676 0.676 0.675 0.676 0.677 0.677 0.676 0.678 0.678 0.677 0.676±0.003 0.13
7 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1.000 0.00
8 1.097 1.097 1.097 1.098 1.097 1.096 1.096 1.096 1.095 1.097 1.097±0.003 0.08
表 3　共有峰的峰面积与参照峰面积比值
峰号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 标定范围
1 0.055 0.055 0.055 0.055 0.055 0.055 0.054 0.054 0.055 0.055 0.054 ～ 0.055
2 0.065 0.069 0.069 0.069 0.068 0.065 0.065 0.068 0.069 0.069 0.065 ～ 0.069
3 0.050 0.053 0.053 0.053 0.052 0.051 0.051 0.051 0.054 0.053 0.050 ～ 0.054
4 0.030 0.031 0.031 0.031 0.030 0.031 0.031 0.031 0.033 0.031 0.030 ～ 0.033
5 0.035 0.036 0.035 0.036 0.035 0.035 0.034 0.036 0.037 0.035 0.034 ～ 0.037
6 0.022 0.022 0.022 0.021 0.022 0.021 0.021 0.023 0.021 0.021 0.020 ～ 0.023
7 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1.000
8 0.062 0.062 0.063 0.062 0.063 0.063 0.061 0.055 0.059 0.063 0.055 ～ 0.063
2.4.4　指纹图谱相似度评价 本实验记录了 10批海南五指山
地区不同区域胆木药材的指纹图谱(见图 3)。 将测试数据导入
国家药典委员会 2004年 A版 “中药色谱指纹图谱相似度评价系
统”进行数据处理。得到胆木药材指纹峰共有模式 R(见图 3);
与共有模式比较 , 10批海南五指山地区不同区域胆木药材的指
纹图谱相似度分别为 0.994, 0.995, 0.996, 0.995, 0.994, 0.982,
0.990, 0.989, 0.996, 0.998。
图 3　10批海南胆木药材指纹图谱
3 　讨论
3.1　提取溶剂的选择 取同样量的海南胆木药材分别采用纯乙
醇 , 70%乙醇 , 50%乙醇 , 70%甲醇 , 50%甲醇进行加热回流提取 ,
并将提取液进行 HPLC分析。结果表明 ,以 70%乙醇提取液的色
谱峰强度最大 , 故选择 70%乙醇为提取溶液。
3.2　检测波长的确定 在对供试品溶液进行HPLC分析的同时 ,
对紫外检测波长进行了筛选 , 发现在 227 nm处胆木药材各色谱
峰分离度较好 , 且主要活性成分异长春花苷内酰胺有较强的吸
收 ,故选择 227 nm作为指纹图谱的检测波长。
3.3 　梯度洗脱条件的确定 在对供试品溶液进行HPLC分析时 ,
分别以甲醇 -0.1%磷酸水溶液 、乙腈 -0.1%磷酸水溶液为流动
相 ,同时对这两种流动相进行二元等度和梯度洗脱两种方式的筛
选 ,结果按表 1的条件可得到分离度较好的胆木药材图谱。
3.4 　相似度分析 结果表明 , 海南五指山地区不同栽培区域的
海南胆木药材的相似度很好 , 品质基本一致。本实验对海南胆木
药材指纹图谱的构建进行的初步探索 , 可以为海南胆木药材的品
质评价 、质量控制提供检测方法。
参考文献:
[ 1 ] 　符　建 ,邝少铁 ,曾祥周 ,等.胆木浸膏片的抗炎作用研究 [ J].海南
大学学报(自然科学版), 2002, 20(1):54.
[ 2 ] 　宣伟东 ,卞　俊 ,陈海生.胆木生物碱成分研究 [ J] .中草药 , 2007,
38(2):170.
[ 3 ] 　李明慧 , 丁　岗 , 沈鸣 ,等.胆木及其制剂中异长春花苷内酰胺的
分离鉴定和含量测定 [ J] .中国天然药物 , 2006, 4(2):104.
·2711·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.11 时珍国医国药 2009年第 20卷第 11期