全 文 ：进 MSCs的增殖和向成骨细胞分化的作用。羊胎素的这种既能
促进 MSCs的增殖和向成骨细胞分化 , 又能促进成骨细胞增殖 、
分化和钙化的作用 , 且未见有毒 、副作用的报道 ,在防治骨质疏松
方面 , 应该具有较好的开发前景。
参考文献:
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及矿化功能的影响 [ J].中国骨质疏松杂志 , 2004, 10(4):4956.
收稿日期:2006-07-31;　修订日期:2006-11-16
作者简介:陈保红(1966-),女(汉族),河南漯河人 ,现任漯河市医学高等
专科学校第二附属医院主管药师 , 学士学位 , 主要从事中药药理研究
工作.
泡桐花总黄酮抗哮喘豚鼠气道炎症的作用机制探讨
陈保红1 , 李寅超 2 , 赵宜红 2 , 傅蔓华3
(1.漯河市医学高等专科学校第二附属医院 ,河南 漯河　462300;
　2.郑州大学药学院 ,河南郑州　450052;　3.河南省中医药研究院 ,河南 郑州　450052)
摘要:目的 通过豚鼠哮喘模型研究泡桐花总黄酮抗哮喘气道变应性炎症的作用。方法 以卵蛋白(OA)致敏豚鼠为动物
模型 , 灌胃途径予以泡桐花总黄酮大 、小剂量 , 观察各组豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数 、嗜酸性粒细胞
(EOS)数和嗜酸性粒细胞特异性趋化因子(Eotaxin)的改变。结果 泡桐花总黄酮可显著延长致敏豚鼠的引喘潜伏期 , 不
同程度地抑制 BALF中的 EOS和白细胞总数及气道上皮 Eotaxin的过度表达。结论 泡桐花总黄酮对哮喘具有一定的保
护作用 , 其中泡桐花总黄酮可能通过调控 Eotaxin在气道黏膜上皮的过度表达 ,进而抑制 Eos向哮喘气道的募集 , 消除气
道炎症 , 成为其发挥抗过敏性哮喘的重要环节。
关键词:豚鼠;　慢性气道变应性炎症;　泡桐花总黄酮
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)02-0357-02
EffectofFlavonoidsinFructusPaulowniaeonAirwayAllegicInflammationinGuinea
PigswithBronchialAsthma
CHENBao-hong1 , LIYing-chao2 , ZHAOYi-hong2 , FUMan-hua3
(1.SecondAfiliatedHospitalofLuoheMedicalColege, Luohe462300, China;2.PharmaceuticalInstituteof
ZhengzhouUniversity, Zhengzhou450052, China;3.TheTraditionalChineseMedicalInstituteofHenan,
Zhengzhou450052, China)
Abstract:ObjectiveThisstudywasdesignedtoinvestigatetheefectsofflavonoidsinFructusPaulowniaeonIARandLAR.
MethodsAnguineapigasthmaticmodel, inducedbyOVAwasadministeredbyintragastricgavage(ig)withdiferentdosesof
flavonoidsinFructusPaulowniae.Thelatentperiod, thenumberofacidophilsandtheEotaxininbronchoalveolarlavagefluid
(BALF)wereobserved.ResultsTheflavonoidsinFructusPaulowniaecoulddelaythelatentperiodofairwayinflammationsig-
nificantly.Thenumberofacidophilsandtotalwhitebloodcellinbronchoalveolarlavagefluid(BALF)wasrestrainedbyflavonoids
inFructusPaulowniae.Inaddition, theflavonoidsinFructusPaulowniaecouldinhibittheoverexpressionofEotaxininthetrache-
aepithelium.ConclusionTheresultssuggestthatflavonoidsinFructusPaulowniaecanantagonizeairwayinflammationbyinhibi-
tingtheoverexpressionoftheEotaxinintracheaepithelium.
Keywords:Paulouniafortunei(Semsl.)Hemsl;　Flavonoids;　Bronchiaasthma
　　气道炎症是支气管哮喘(asthma)的病理基础 ,有多种炎症细
胞 、炎症介质和细胞因子参与其炎症过程 [ 1] 。研究发现 [ 2]嗜酸
性粒细胞(EOS)趋化聚集 , 在气道炎症的形成过程中起重要作
用 , Eotaxin是 EOS的选择性趋化剂 [ 3] , 也是 EOS在哮喘发病过
程中选择性增加的原因。 因此 , 调控 Eotaxin的过度表达 , 抑制
EOS在气道内的募集 ,消除气道炎症 , 对治疗哮喘具有关键性意
义。根据文献报道 [ 4, 5] , 少常用草药泡桐花在支气管哮喘的临床
治疗上具有一定的效果;泡桐花浸膏能够明显改善哮喘豚鼠肺组
织的病理损伤 , 对哮喘豚鼠有显著的治疗作用;泡桐花主要成
分 [ 6]为挥发油 、总黄酮 、熊果酸等 , 其中总黄酮含量较丰富
(3.081%)。我们以泡桐花总黄酮为研究对象 , 采用 ig给药途
径 , 结合图象分析技术探讨其抗哮喘作用及其机制。
1　材料与方法
1.1　动物与分组 健康白化豚鼠 , 雌雄各半 ,体重(200±50)g, 由
河南省实验动物中心提供。 随机分为模型 、阳性 、空白对照组和
泡桐花总黄酮大 、小剂量组。 10只 /组。
1.2　药品与试剂 卵白蛋白(ovalbumin, OA):Sigma公司 , GradeⅢ;
Eotaxin一抗(BA1469, Rabbitanti-Eotaxin)武汉博士德生物工程
有限公司 ,相应二抗试剂盒及阳性对照片购自北京中山生物技术
有限公司;醋酸地塞米松片 , 浙江仙琚制药股份有限公司 , 批号
051247。泡桐花总黄酮由郑州大学药学院生药学研究室提供。
1.3　动物诱喘及用药 参照宫兆华 [ 7]方法 , 常规饲养观察 3 d无
异常后 ,予 10%OA生理盐水(N.S)溶液 200 mg/kgip致敏 , 并于
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.2 时珍国医国药 2007年第 18卷第 2期
当天开始按表 1剂量给药。第 15天时 , 予 5%OA的 N.S溶液雾
化吸入诱导哮喘发作 。用哮喘发作(动物取出后的表现为咳嗽 、
呼吸困难 、烦躁 、抽搐 、跌倒甚至死亡)的动物进行实验。
1.4　用药过程中哮喘防治作用观察 用药第 5, 12天及第 15天 ,
3次对豚鼠进行激发实验。予 5%OA的 N.S溶液雾化吸入激发
10 s,封闭时间共 20 s,观察记录各组动物哮喘严重程度 , 取第 15
天的引喘潜伏期(自雾化开始至豚鼠腹肌痉挛 、腹部凹陷出现的
时间作为引喘潜伏期 ,超过 6 min者以 360 s计算)为统计指标。
在第 5, 12天的激发过程中 , 先后有 8只动物(大 、小剂量组各 2
只 , 模型组 3只 ,阳性组 1只)因反应剧烈 ,抢救不及而窒息死亡。
1.5　BALF(bronchoalveolarlavagfluidBALF)的采集与细胞计数
暴露豚鼠气管肺 , 用丝线结扎右肺门处 , 行气管插管灌洗左肺。
灌入 N.S5 ml(抽吸 2次)×2次 , 灌洗回收率大于 80%, 无菌离
心(1 500 r/min×10 min), 沉淀细胞以 Hanks液处理后即刻在显
微镜下计数细胞总数 , 细胞浓度调至 2 ×106 /ml, 涂片 , 瑞氏染
色 , 计数白细胞总数和 EOS数。
1.6　免疫组化 Eotaxin检测 摘取右肺中叶 , 放入乙醇 、醋酸和甲
醛混合固定液中固定 48 h。石蜡切片(4 μm×3张)脱蜡至水 ,行
免疫组化 Eotaxin(EOS趋化性细胞因子)染色。免疫组化操作按
说明书进行 , DAB显色。另设不加一抗的切片作阴性对照。每
只动物在细支气管黏膜各随机选择 5个 Hot视野 ,计算机图像分
析系统检测每个 Hot视野 Eotaxin表达阳性信号的积分光密度
IOD, 以平均值表示该动物气道 Eotaxin阳性表达水平。
1.7　统计学处理 所有数据以 x±s表示 , 使用 SPSS11.0统计软
件进行分析。
2　结果
2.1　泡桐花总黄酮对豚鼠引喘潜伏期的影响 结果表明, 各组造
模动物的引喘潜伏期均较正常组缩短, 表明造模动物皆发生了哮
喘反应;各用药组与模型对照组比较具有显著性意义 , P<0.05或
0.01,说明各用药组对哮喘具有不同程度的保护作用。结果见
表 1。
表 1　泡桐花总黄酮对豚鼠引喘潜伏期的影响( x±s)
组别 动物数 剂量 引喘潜伏期 t/s
总黄酮大剂量 8 1.2g· kg-1· d-1 68.00±12.55＊＊
总黄酮小剂量 8 0.6g· kg-1· d-1 57.32±7.46＊阳性对照　　 9 3mg· kg-1· d-1 89.20±10.60＊＊
模型对照　　 7 等容积 N.S 43.35±6.24
正常对照　　 10 等容积 N.S 360＊＊
　　与模型对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01
2.2　对 BALF中白细胞总数与 EOS计数的影响 结果表明 ,泡桐
花总黄酮大剂量和阳性药对 BALF中白细胞总数和 EOS计数有
抑制作用 , 与模型组比较 , 差异有极显著性意义(P<0.01)。结
果见表 2。
表 2　对 BALF中白细胞总数与 EOS计数的影响( x±s)
组别 动物数 剂量 白细胞总数 /×109 /L EOS数 /×109 /L
总黄酮大剂量 8 1.2 g· kg-1· d-1 1.33±0.66＊ 0.32±0.04＊＊总黄酮小剂量 8 0.6 g· kg-1· d-1 1.68±0.19 0.57±0.12阳性对照　　 9 3mg· kg-1· d-1 1.05±0.12＊＊ 0.26±0.24＊＊
模型对照　　 7 等容积 N.S 1.95±0.58 0.62±0.01
空白对照　　 10 等容积 N.S 0.94±0.16＊＊ 0.05±0.06＊＊
　　与模型对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01
2.3　豚鼠气道上皮表达 Eotaxin阳性蛋白信号的图象分析 镜下
Eotmin阳性信号主要位于支气管黏膜上皮 、肺泡上皮和平滑肌
细胞 、肺微血管内皮细胞胞浆 , 内含棕黄色颗粒物质。图象分析
结果显示 , 模型组支气管黏膜上皮 Eotaxin表达阳性信号的 IOD
显著高于空白组 , 差异有显著性意义(P均 <0.01);与模型组比
较 , 阳性药和总黄酮大剂量组表达 Eotmin阳性蛋白信号细胞的
IOD明显降低 , 差异有显著性意义(P<0.05)。结果见表 3。
表 3　对豚鼠气道 Eotaxin阳性细胞数量的影响 ( x±s)
组别 动物数 剂量 IOD/×106
总黄酮大剂量 8 1.2g· kg-1· d-1 8.36±1.75＊＊
总黄酮小剂量 8 0.6g· kg-1· d-1 10.52±1.60＊
阳性对照　　 9 3mg· kg-1· d-1 5.49±1.03＊＊
模型对照　　 7 等体积 N.S 12.32±0.77
空白对照　　 10 等体积 N.S 2.67±1.42＊＊
　　与模型对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01
3　讨论
哮喘(asthma)是一种由多种因素引起的以可逆性气道阻塞 、
气道高反应和气道炎症为特征的免疫变态反应性疾病 [ 1, 2] 。 慢
性气道炎症是哮喘发病的一个重要因素 , 有多种炎症细胞 、炎症
介质和细胞因子参与其炎症过程。气道炎症是气道高反应
(BronchialHyperresponsiveness, BHR)的基础 , 无论过敏性还是非
过敏性哮喘 ,气道炎症都以 Eos的浸润募集和激活为最终途径 ,
而哮喘时异常高表达于气道上皮的 Eotaxin作为 EOS高度选择
性的化学趋化剂 , 成为 EOS在哮喘发病过程中选择性增加的原
因 [ 2] 。研究发现 , 浸润于哮喘模型动物细支气管黏膜的 EOS数
与该部位 Eotaxin阳性表达水平呈显著正相关 [ 8] 。 因此 , 调控
Eotaxin的过度表达 , 抑制 Eos在气道内的募集 , 消除气道炎症 ,
对治疗哮喘具有关键性意义。
在哮喘的治疗药物中 ,甾体类抗炎药糖皮质激素等是目前较
有效的药物 ,但因其副作用多 , 不宜长期使用 ,导致哮喘的控制率
不尽人意 ,死亡率较高 [ 1] 。中药成分虽然复杂 , 但其具有整体调
节且毒副作用相对较小的优点 , 因此 ,从中药中挖掘抗炎平喘成
分是未来哮喘研究的重要内容。
本实验以引喘潜伏期 、EOS和 Eotaxin作为观察指标 ,探讨泡
桐花总黄酮抗支气管哮喘变应性炎症的防治作用及其可能的机
制。实验结果显示 ,泡桐花总黄酮可显著延长致敏豚鼠的引喘潜
伏期 ,不同程度地抑制 BALF中的 EOS和白细胞总数及气道上皮
Eotaxin的过度表达 , 与模型组比较有显著差异。给药 5 d和 12
d,泡桐花总黄酮大小剂量不能预防再次吸入卵蛋白抗原后的哮
喘发作 , 并且动物死亡率高 , 这很可能是动物对抗原敏感度高所
致。给药第 15天 ,再次吸入卵蛋白抗原后的哮喘发作较平稳 , 无
死亡发生 , 可能与药效发挥和免疫耐受有关。本实验结果表明 ,
泡桐花总黄酮对哮喘具有一定的保护作用 ,其中泡桐花总黄酮可
能通过调控 Eotaxin在气道黏膜上皮的过度表达 , 进而抑制 Eos
向哮喘气道的募集 ,消除气道炎症 , 成为其发挥抗过敏性哮喘的
重要环节。
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