全 文 ：2.8　样品的测定
取样品 6 批 , 按 “ 2.3” 项下方法进行操作 , 进样
20 μL测定 , 结果见表 2。
表 2　样品测定结果
Tab 2　Content of isofraxidin in Mieaoling capsules
批号 (No.) 异嗪皮啶 (isof raxidin)/μg·粒-1 RSD%
060801 25.43 1.1
060802 26.77 1.5
060803 26.35 1.0
060901 25.54 1.4
060902 25.71 1.2
060903 26.25 0.9
3　讨论
3.1　提取方法的选择
乔菲等[ 2]采用加热回流方法提取 , 中国药典 2005 年版
一部[ 3] 采用超声处理方法提取 , 本文对加热回流 、 超声 、 振
摇 3 种提取方法进行比较 , 以回流提取含量测定结果最高 ,
故确定提取方法为回流提取。
3.2　提取溶剂的考察
乔菲等[ 2]采用氯仿为溶剂提取 , 中国药典 2005 年版一
部[ 3] 采用甲醇为溶剂提取 , 本文分别用氯仿 , 甲醇 , 50%、
75%和无水乙醇回流提取 , 结果用 75%乙醇提取样品含量
最高 , 确定 75%乙醇作为提取溶剂。
3.3　提取时间的考察
对 10 、 20 、 30 、 40、 50 、 60 、 70 min 回流提取结果的
测定 , 回流 60 min 即提取完全 , 确定回流时间为 60 min。
参考文献
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(收稿日期:2009-10-14;修回日期:2009-10-27)
高效液相色谱法测定金刚藤分散片中薯蓣皂苷元的含量
张顺芝 , 易爱纯 , 何鸽飞 (长沙市第一医院药剂科 , 长沙　410005)
摘要:目的　建立一种快速 、 准确 、 方便的检测金刚藤分散片中薯蓣皂苷元含量的方法。方法　采用高效液相色谱
法 , 色谱柱:依利特 C18-A (200 mm×4.6 mm , 5 μm);流动相:乙腈-水 (85∶15);流速:1.0 m L· min -1 ;检
测波长:203 nm。结果　薯蓣皂苷元在0.052 ～ 0.468μg 与峰面积具有良好的线性关系 (r=0.999 9), 平均回收率
为 96.48%, RSD为 1.10%(n=5)。结论　该方法能够快速 、 准确 、 方便的检测金刚藤中薯蓣皂苷元的含量 , 可
作为金刚藤分散片质量评价的依据。
关键词:薯蓣皂苷元;高效液相色谱法;金刚藤分散片
中图分类号:R927.2 , R917　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2009)12-0913-03
Determination of diosgenin in Jingangteng dispersible tablets by HPLC
ZH ANG Shun-zhi , YI Ai-chun , HE Ge-fei (First Hospital o f Changsha , Changsha 410005)
Abstract:Objective　 To establish a rapid , accur ate and convenient H PLC method to de te rmine dio sg enin in Jingan-
g teng dispe rsible tablets.Methods　An HPLC method was used with the de tection wave leng th of 203 nm.The co l-
umn was C18-A (200 mm×4.6 mm , 5 μm).The mobile phase w as ace tonitrile-w ater (85∶15)w ith the flow rate o f
　　作者简介:张顺芝 , 女 , 本科 , 副主任药师 , 主要从事临床药学工作 , Tel:(0731) 84667573 , E-mail:zsz42424@Yahool.com.con
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中南药学 2009年 12月第 7卷第 12期　Cent ral S ou th Pharmacy.December 2009 , Vol.7 No.12
1.0 mL · min -1 .Results　Linea rity fo r diosgenin was 0.052 ～ 0.468 μg (r=0.999 9), the ave rage recovery w as
96.48%, and RSD was 1.10%(n=5).Conclusion　The method can be used to detect dio sg enin in Jingangteng dis-
per sible tablets rapidly , accurately and conveniently and contro l the quality o f Jiang tangning dispersible table ts.
Key words:dio sgenin;HPLC;Jingang teng disper sible tablets
　　金刚藤分散片中主要含有甾体皂苷元及其苷 , 此外还含
有一些黄酮 、 生物碱 、 氨基酸 、 有机酸 、 酚类 、 糖类等成
分 , 有祛风利湿 、 解毒散瘀及抗炎镇痛等作用[ 1-2] 。目前 ,
多以薯蓣皂苷元或其苷含量作为控制金刚藤制剂质量的指
标 , 测定的方法主要采用薄层鉴别研究 , 但是目前还缺乏一
种快速有效的鉴定金刚藤质量的方法[3] 。薯蓣皂苷元是金刚
藤中的主要成分 , 本试验通过高效液相色谱法测定金刚藤分
散片中薯蓣皂苷元的含量来评价金刚藤分散片的质量。
1　仪器与试药
Ag ilent 1100 高效液相色谱仪 (美国安捷伦公司 , 紫外
检测器);T L9900 数据处理软件 , AEL-120 电子分析天平
(湘仪仪器厂 , 最小分度值 0.1 mg);293592 索氏提取器
(北京中西远大科技有限公司)。金刚藤分散片 (湖南省某制
药有限公司 , 批号:040418 、 040420 、 040422 、 040424 、
040519、 040521、 040523、 051127 、 051129、 051201 , 规
格:0.65 g ·片-1);薯蓣皂苷元 (中国药品生物制品检定
所 , 批号:1539-200202 , 供含量测定用);乙腈为色谱试
剂 , 流动相水为重蒸水 , 其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
　　色谱柱为依利特 C18-A (200 mm×4.6 mm , 5 μm), 流
动相:乙腈-水 (85∶15);流速:1.0 m L ·min-1 ;检测波
长:203 nm , 进样量:5 mL , 柱温:30 ℃。
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品溶液的制备　精密称取薯蓣皂苷元对照品
5.2 mg , 置 100 mL 量瓶中 , 加乙腈溶解并稀释至刻度 , 摇
匀 , 即得 (0.052 mg·m L-1)。
2.2.2　供试品溶液制备　根据参考文献[ 1]方法取本品 10
片 , 研细 , 取约 0.6 g , 精密称定 , 置索氏提取器中 , 加乙
醇适量 , 浸渍过夜 , 加热回流至提取液近无色 , 回收溶剂至
约 100 m L , 加盐酸 16 m L , 加热回流水解 2 h , 冷却 , 用石
油醚 (60 ～ 90℃)振摇提取 4 次 , 每次 40 mL , 合并提取
液 , 回收溶剂至干 , 残渣加乙腈溶解并转移至 10 m L 量瓶
中 , 加乙腈至刻度 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤液 , 即得。
2.2.3　阴性样品溶液的制备　取制备用辅料 , 按制备工艺
方法制备缺金刚藤的阴性样品 , 按 “ 2.2.2” 项下方法制成
缺金刚藤的阴性样品溶液。
2.3　系统适应性实验
分别取供试品溶液 、 阴性样品溶液及对照品溶液 , 按
“ 2.1” 项下方法 , 各进样 5 μL 测定 , 得 H PLC 图谱 (见图
1)。图谱显示在与薯蓣皂苷元色谱峰相应位置上无色谱峰 ,
说明阴性无干扰 , 薯蓣皂苷元峰和样品中其他组分色谱峰可
达基线分离 , 且与其他相邻色谱峰分离度>1.5;按薯蓣皂
苷元峰计算 , 理论塔板数>1 500。
2.4　线性关系考察
图 1　金刚藤分散片图薯蓣皂苷元对照品 (A)、 供试品 (B)、 阴性
样品 (C)色谱图
Fig 1 　C hromatogram of Jingangteng dispersible tablets diosgenin
(A), Jingang teng dispersible tablet s (B)and negat ive sample (C)
1.薯蓣皂苷元 (diosgenin)
　　精密吸取浓度为 0.052 mg ·mL -1的薯蓣皂苷元对照品
溶液 1 、 3、 5 、 7、 9 μL 进样 , 测定其峰面积积分值 , 以浓
度为横坐标 , 峰面积积分值为纵坐标 , 绘制标准曲线 , 其回
归方程为:A=1.465×107C-7.512×104 , r=0.999 9。结
果表明薯蓣皂苷元在 0.052 ～ 0.468 μg 浓度与峰面积积分值
线性关系良好。
2.5　精密度试验
精密吸取 “ 2.2.2” 项下同一供试品溶液 (批号:
040418)5 μL , 重复进样 5 次 , 测定薯蓣皂苷元峰面积积分
值 , 结果显示 RSD 为 0.48% (n=5), 表明仪器精密度良
好。
2.6　稳定性试验
分别精密吸取同一供试品溶液 (批号:040418) 5 μL ,
于 0 、 2、 4 、 8、 12 h 进样测定 , 结果样品薯蓣皂苷元峰面
积积分值 RSD为 0.78%(n=5), 表明供试品溶液在 12 h
内峰面积积分值基本稳定。
2.7　重复性试验
取同一批号样品 (批号:040418)5 份 , 按 “ 2.2.2”
项下样品处理方法处理 , 按 “2.1” 项下色谱条件 5 份测定 ,
薯蓣皂苷元平均含量为 0.547 mg · 片-1 (0.838 6 mg ·
g -1), RSD 为 0.79%(n=5), 结果表明方法重复性良好。
2.8　回收试验
采取加样回收法。精密称取已知含量为 0.838 6 mg ·
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C ent ral S outh Ph arm acy.December 2009 , Vol.7 No.12　中南药学 2009年 12月第 7卷第 12期
g-1 (批号:040418)的样品 0.3 g , 共 6 份 , 分别精密加入
薯蓣皂苷元对照品溶液 (0.091 mg · m L-1)3 mL , 即
0.273 mg , 按 “ 2.1” 项下色谱条件测定含量 , 计算回收率 ,
结果见表 1。
表 1　回收率测定结果 (n=6)
Tab 1　Recovery test (n=6)
编号
(No.)
取样量
(sample
w eigh t)
/ g
样品中薯蓣
皂苷元含量
(con tent of diosgenin
in the s amp le)/mg
加入薯蓣皂
苷元对照品量
(added am ount)
/mg
实测薯蓣
皂苷元总量
(detected amoun t)
/mg
回收率
(recovery)
/ %
平均回收率
(average
recovery)
/ %
RSD
(%)
1 0.318 5 0.267 1 0.273 0.533 4 97.6
2 0.299 4 0.251 1 0.273 0.511 9 95.5
3 0.304 4 0.255 2 0.273 0.521 6 97.6
4 0.296 8 0.248 9 0.273 0.509 5 95.5 96.48 1.10
5 0.295 4 0.247 7 0.273 0.510 3 96.2
6 0.301 0 0.252 4 0.273 0.492 6 96.5
2.9　样品含量测定
取 10 批样品 , 各取样品 10 片 , 按 “ 2.2.2” 项下方法
制成供试品溶液 , 及 “2.1” 项下色谱条件测定 , 计算薯蓣
皂苷元的含量 , 结果见表 2。
表 2　样品含量测定结果 (n=10)
Tab 2　Sample determination (n=10)
批号
(batch No.)
含量 (conten t of
diosgenin)/mg·片-1
040418 0.55
040420 0.55
040422 0.57
040424 0.54
040519 0.54
040521 0.53
040523 0.52
051127 0.56
051129 0.55
051201 0.57
3　讨论
3.1　原药材情况
在试验过程中 , 笔者对金刚藤药材粗粉的含量测定方法
进行了验证 , 取药材粗粉约 1 g , 精密称定 , 按上述含量测
定方法 , 测定 3 批药材中薯蓣皂苷元的含量 , 结果 3 批药材
含薯蓣皂苷元的数据分别为 0.042%、 0.040%、 0.044%,
均>0.040%, 符合中国药典 2005年版一部规定 。
3.2　流动相选择[ 4-8]
通过比较甲醇-水 、 乙腈-水洗脱系统 , 发现后者对待测
样品具有良好的分离作用 , 峰形优于前者 , 为缩短分析时
间 , 笔者对洗脱条件进行了优选。 最终确定流动相为乙腈-
水 (85∶15), 流速 1.0 m L·min-1 。
3.3　检测波长的选择[ 4-7]
经对比不同检测波长下色谱峰的强度和分离度 , 确认薯
蓣皂苷元在 203 nm 检测波长下有最大吸收 , 且干扰峰少。
据此本实验中选择203 nm 作为测定薯蓣皂苷元的检测波长。
3.4　含量限定
采用 HPLC 法测定本品中薯蓣皂苷元的含量控制产品
的内在质量 , 试验结果表明 , 该方法检测灵敏度高 , 准确度
高 , 操作方法方便 , 缺薯蓣皂苷元的阴性溶液无干扰 , 且样
品分离效果好。测定 10 批成品 , 薯蓣皂苷元的平均含量为
0.548 mg·片-1 , 按 65%折算 , 暂定本品每片含金刚藤按
薯蓣皂苷元 (C27H42O 3)计 , 不得<0.35 mg·片-1 。
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