全 文 ：天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2012，24: 1284-1287
文章编号: 1001-6880( 2012) 09-1284-04
收稿日期: 2011-12-19 接受日期: 2012-04-17
基金项目:湖南省科学技术厅项目( 2011TP4014-3) ;湖南省教育厅
项目( 11C1043) ;林产化工工程湖南省重点实验室开放
基金项目( JDZ201004) ;湖南省高校科技创新团队支持
计划资助“林产资源化学林化产品研发”( 林产化工工
程湖南重点实验室)
* 通讯作者 Tel: 86-013974478656; E-mail: hme78656@ 126． com
南瓜叶中 γ-氨基丁酸的提取及薄层扫描测定
黄美娥1* ，彭 胜1，陈阳波2，袁洪昆2
1吉首大学林产化工工程湖南省重点实验室; 2 吉首大学城乡资源与规划学院，张家界 427000
摘 要:本文在单因素试验基础上，通过正交试验优化了南瓜叶中 γ-氨基丁酸的提取条件，并对 γ-氨基丁酸的
薄层扫描测定方法进行了探索。结果表明，南瓜叶中 γ-氨基丁酸的最佳提取条件为:以 20%乙醇为溶剂、料液
比 1∶ 17( w /v) 、提取时间 1 h，此条件下得到的 γ-氨基丁酸的含量为 209 mg /100 g。所建立的薄层扫描测定方法
在 0． 125 ～ 2． 0 mg /mL范围内呈良好线性关系( R2 = 0． 9991) ，平均加样回收率( n = 4) 为 99． 61%。
关键词:南瓜叶; γ-氨基丁酸;提取;含量测定
中图分类号: Q946． 91 文献标识码: A
Determination and Extraction of γ-Aminobutyric
Acid from Pumpkin ( Cucurbita mosehata) Leaves
HUANG Mei-e1* ，PENG Sheng1，CHEN Yang-bo2，YUAN Hong-kun2
1Key Laboratory of Hunan Forest Products and Chemical Industry Engineering，Jishou University;
2College of Resources and Planning Sciences of Jishou University，Zhang Jiajie，Hunan 427000，China
Abstract: The extraction conditions and thin layer chromatography scanning ( TLCS) analytic method of γ-aminobutyric
acid from pumpkin leaves were studied． On the basis of single factor experiments，orthogonal test was investigated． The
optimum parameters for extracting γ-aminobutyric acid from pumpkin leaves were determined as follows: the concentra-
tion of alcohol was 20%，the ratio of solid to liquid was 1∶ 17( w /v) ，and the extraction time was 1 h． Under these condi-
tions，the yield of γ-aminobutyric acid was 209 mg /100 g． The calibration curve showed good linearity in the range of
0. 125 to 2． 0 mg /mL ( R2 = 0． 9991) with the average recovery ( n = 4) of 99． 61% ．
Key words: pumpkin ( Cucurbita mosehata) leaves; γ-aminobutyric acid; extraction; determination
南瓜( Cucurbita moschata Duch． ) 系葫芦科南瓜
属一年生蔓生草本植物，种植历史悠久，世界各地均
有栽培［1］。南瓜性味甘温，入脾胃二经，具有补中
益气、消炎止痛、解毒杀虫等功效。对其功能成分如
γ-氨基丁酸、葫芦巴碱等的研究报道很多［2］。南瓜
叶作为保健食品资源之一，资源丰富，天然无公害，
但国内外关于从南瓜叶中提取 γ-氨基丁酸的研究
鲜有报道。
γ-氨基丁酸( γ-aminobutyric acid，简称 GABA) ，
是一种重要的功能性非蛋白质氨基酸，参与体内的
多种代谢活动，具有很高的生理活性。GABA 在医
药、食品、饲料中具有广阔的应用前景，2009 年 9 月
29 日，GABA已被中华人民共和国卫生部批准为可
用于食品生产加工的新资源，开发 GABA 产品及其
功能性食品、保健品是当前食品及医药领域的研究
热点之一［3］。因此利用南瓜叶提取 GABA，对充分
利用南瓜资源具有重要的经济意义和现实意义。本
实验通过对南瓜叶中 GABA 的提取测定进行研究，
旨在为南瓜叶的进一步开发利用奠定基础。
1 材料与方法［4-7］
1． 1 材料、试剂与仪器
南瓜叶: 于 7 月采集吉首大学张家界校区后山
菜园鲜南瓜叶，置恒温干燥箱中 50 ℃干燥至恒重，
粉碎过 40 目筛，保存，备用。
γ-氨基丁酸标准品: 中国药品生物制品检定研
究所，纯度≥99% ; 薄层层析硅胶 G、茚三酮、正丁
醇、冰醋酸、无水乙醇等均为分析纯。
日本岛津 CS-9000 型薄层扫描仪、RE-540 旋转
蒸发仪、WT-150 粉碎机、CS101-3D 电热鼓风干燥
箱、DSY-2-4 孔电热恒温水浴锅( 北京国华医疗器械
厂) 、AEG-200 十万分之一天平。
1． 2 方法
1． 2． 1 对照品溶液的配制
精密称取 γ-氨基丁酸对照品 25 mg置于 25 mL
容量瓶中，用 20%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，制
成 1 mg /mL的对照品溶液，备用。
1． 2． 2 供试品溶液的制备
称取南瓜叶样品粉末 10． 00 g，加入 20%的乙
醇溶液 100 mL，浸提 1 h，过滤，定容至 100 mL，摇
匀，制得南瓜叶供试品溶液，备用。
1． 2． 3 薄层色谱条件与薄层扫描条件［3］
称取硅胶 G 30 g 放入研钵中，加入 0． 5% CMC-
Na和 60 mL水调成糊状后涂布于玻璃板( 10 cm ×
20 cm) 上，厚度为 0． 5 mm，置室温风干后于 105 ℃
活化 1 h，置干燥器中备用。分别吸取 5 uL 的对照
品溶液和供试品溶液点样，用正丁醇、醋酸、水按 4
∶ 1∶ 1 的比例配成展开剂，饱和后按上行方式展开。
用 0． 2%茚三酮乙醇溶液喷雾显色，105 ℃烘数分
钟，直至获最大斑点，薄层扫描，根据薄层扫描结果
确定南瓜叶中 γ-氨基丁酸的薄层扫描条件为:反射
式双波长线式扫描，λs = 515 nm，λr = 680 nm，狭缝
为 1． 0* 10． 0 mm，SX =1。
1． 2． 4 标准曲线的制备
称取 γ-氨基丁酸对照品 100 mg 用蒸馏水定容
至 100 mL，得 1 mg /mL 的 γ-氨基丁酸对照品溶液。
分别吸取 1 mg /mL的 γ-氨基丁酸对照品溶液，配成
0． 125、0． 25、0． 50、1． 00、2． 00 mg /mL的系列对照溶
液。于硅胶板上点样，层析展开、显色、薄层扫描，以
对照溶液浓度为横坐标 ( x ) ，峰面积积为纵坐标
( y) ，建立标准曲线，得回归方程为 y = 77747x +
4948． 7，相关系数 R2 = 0． 9991。表明 γ-氨基丁酸薄
层扫描时浓度在 0． 125 ～ 2． 0 mg /mL 范围内有较好
的线性关系。
1． 2． 5 稳定性试验
用毛细点样管吸取对照品溶液 5 μL 点于薄层
板上，按上述条件展开、显色、薄层扫描，每隔 30 min
扫描 1 次，共测定 5 次，计算峰面积的 RSD( n = 5 )
为 5． 34%，RSD( n = 4) 为 2． 50%，表明显色后在 2 h
内较稳定。
1． 2． 6 重复性试验
用毛细点样管吸取同一南瓜叶供试品溶液 5
μL点样，按上述条件展开、显色、薄层扫描，重复扫
描 6 次，结果 RSD为 0． 98%。
1． 2． 7 精密度实验
同板精密度试验: 用毛细点样管吸取对照品溶
液 5 μL点样( 重复点 6 个点) ，按上述条件展开、显
色、薄层扫描，结果 RSD 为 1． 99%。异板精密度试
验:用毛细点样管吸取对照品溶液 5 μL点于 6 块薄
层板上，按上述条件展开、显色、依次扫描测定，结果
RSD为 2． 13%。
1． 2． 8 加样回收试验
将对照品溶液 5 μL，供试品溶液 6 μL 和对照
品溶液 5 μL，与供试品溶液 3 μL的混合液分别点于同
一薄层板上，按上述条件展开、显色、扫描，测得平均回
收率( n =4)为 99． 61%，RSD( n =4)为 2. 04%。
1． 2． 9 提取条件的确定
1． 2． 9． 1 提取溶剂的选择
称取 10． 00 g南瓜叶粉末 10 份于三角瓶中，分
别加入蒸馏水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、80%
乙醇各 100 mL，于常温浸提 1 h，过滤，滤渣重提 1
次，合并滤液;分别进行减压浓缩、醇沉、过滤、浓缩，
扫描测定。
1． 2． 9． 2 提取时间的选择
称取 10． 00 g南瓜叶粉末 10 份于三角瓶中，加
入 20%乙醇 100 mL，于常温下分别浸提 1、2、3、4、5
h，过滤，滤渣重提 1 次，合并滤液; 减压浓缩、醇沉、
过滤、浓缩，扫描测定。
1． 2． 9． 3 提取料液比的选择
称取 10． 00 g南瓜叶样品 10 份于三角瓶中，分
别加入 20%乙醇 80、100、120、140、160 mL，于常温
下浸提 1 h，过滤，滤渣重提 1 次，合并滤液; 减压浓
缩、醇沉、过滤、浓缩，扫描测定。
1． 2． 10 正交试验
由单因素试验确定的范围，选择乙醇浓度、固液
比、提取时间三因素作为考察对象，每因素确定三个
水平，进行正交试验，因表水平见表 1。
表 1 正交试验因素表
Table 1 Orthogonal experiment facts
水平
Level
因素 Factors
A溶剂浓度
Concentration ( % )
B浸提时间
Time ( h)
C料液比
Solid to
liquid ratio ( w /v)
1 10 0． 5 1∶ 15
2 20 1． 0 1∶ 16
3 30 1． 5 1∶ 17
5821Vol. 24 黄美娥等: 南瓜叶中 γ-氨基丁酸的提取及薄层扫描测定
2 结果与分析
2． 1 提取条件的单因素实验确定
2． 1． 1 提取溶剂的选择结果
按 1． 2． 9． 1 进行提取测定，提取溶剂对南瓜叶
中 γ-氨基丁酸提取效果的影响结果为:以水和高浓
度乙醇为提取溶剂比稀乙醇的提取效果差，以 20%
乙醇为提取溶剂进行提取实验得 γ-氨基丁酸含量
值最高为 156 mg /100 g，故选择提取溶剂浓度的优
化区为 10% ～30%。
2． 1． 2 提取时间的确定
按 1． 2． 9． 2 进行提取测定，提取时间对南瓜叶
中 γ-氨基丁酸提取效果的影响结果为:随着提取时
间的延长，提取得到的 γ-氨基丁酸的含量反而逐渐
降低，提取时间为 1 h 进行提取实验得 γ-氨基丁酸
含量值最高为 148 mg /100 g，故选择提取时间的优
化区为 0． 5 h ～ 1． 5 h。
2． 1． 3 固液比的选择
按 1． 2． 9． 3 进行提取测定，提取料液比对南瓜
叶中 γ-氨基丁酸提取效果的影响结果为:随料液比
的增大，南瓜叶中 γ-氨基丁酸的含量不断提高，但
料液比为 1∶ 14 ～ 16 时，增大料液比，含量增加放缓。
所以，选择料液比的优化区为 1∶ 15 ～ 17。
2． 2 正交实验结果与分析
表 2 正交试验结果表( n = 3)
Table 2 The effects of orthogonal experiment ( n = 3)
序号
No．
因素 Factor
A B C 空列
含量
Content
( mg /100 g)
1 1 1 1 1 135
2 1 2 2 2 186
3 1 3 3 3 192
4 2 1 2 3 149
5 2 2 3 1 209
6 2 3 1 2 168
7 3 1 3 2 127
8 3 2 1 3 176
9 3 3 2 1 165
K1 171 137 160 170
K2 175 190 167 160
K3 156 175 176 172
R 19 53 16 12
表 3 方差分析表
Table 3 The variance analysis
来源
Source
偏差平方和
Sum of
squares
自由度
DOF
F比
F value
显著性
Significance
A 617． 556 2 2． 592 *
B 4523． 556 2 18． 989
C 402． 889 2 1． 691
D 238． 222 2 1． 000
误差 238． 222 2
“* ”，0． 05 ＜ P ＜ 0． 1
对表 2 中数据进行方差分析，结果由表 3 可见，
因素 B 显著，因素 A 和 C 不显著，因素作用的主次
顺序是 B ＞ A ＞ C，即浸提时间 ＞ 溶剂浓度 ＞ 料液
比，与极差分析得出的结果一致。对表 2 数据进行
分析得出南瓜叶中 γ–氨基丁酸提取条件最优水平
组合为 A2B2C3，即以 20%乙醇为溶剂、浸提 1 h、料
液比 1∶ 17，其 γ–氨基丁酸的含量为 209 mg /100 g。
2． 3 验证实验
按上述最佳条件 A2B2C3 进行 3 次验证提取试
验，测得南瓜叶中 γ-氨基丁酸的含量分别为 210、
205、212 mg /100 g，平均含量 209 mg /100 g。
3 结论
本研究采用单因素和正交试验确定了南瓜叶中
γ-氨基丁酸的提取条件，即精密称取供试品适量，加
入 17 倍体积的 20%乙醇、常温浸提 1 h。并以薄层
扫描法测定南瓜叶中 γ-氨基丁酸的含量为 209 mg /
100 g，其方法操作简单、灵敏，结果准确可靠。
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