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· 实验研究 ·
印 L C测定广西 4个产地野生岩黄连药材中脱氢卡维丁的含量
龚 ,志强 谢丽莎* 黄茂春
(广西中医药大学赛恩斯新医药学院 , 广西 南宁 53 022 2 )
【摘要」目的 考察广西 4 个不同县市野生岩黄连中脱氛卡维丁的含量 , 为控制岩黄连药材的质量提供依据 。 方法 采用高效液相 色谱 (H P L c)
法测定脱氛卡维丁含量 , 色谱柱 为 lU it m ate C 18 (2 50 m m x 4 . 6m m x s 林m ) , 流动相 为 0 . 1% 三 乙胺水溶液 (磷酸调 p H一3 ) 一 乙睛 (75 :
25 )
, 流速 1 . Om L/ m in , 检测波长 3 4 7n m , 柱温 30 口 C 。 结果 脱 氛卡维丁浓度在 12 一 120 林g m/ L (二 0 . 9 994 , n 一6 ) 范围内线性关 系良好 ,
平均加样 回收率为 97 . 85 % , R S D =0 .91 % ( n 一 6 ) , 广西 4 个不同县产岩黄连药材脱氛卡维丁含量差异明显 。 结论 所建立的方法 简便 、 准确 、
重复性好 , 可用于控制岩黄连药材质量 。
【关键词」高效液相 色谱法 ; 岩黄连 ; 脱氢卡维丁
中图分类号 : R 2 8 2 . 7 1 0 . 3 文献标识码 : B 文章编号 : 16 7 1一 8 1 9 4 ( 2 0 1 3 ) 0 3一 0 4 5 0一 0 2
岩黄连为婴栗科紫荃属植物石 生黄荃 ( C o r y d a l i s s a x i e o l a
B un it ng )
, 主产于广西 , 别名岩胡 , 岩连 , 菊花黄连 , 土黄连l[] 。 主
治肝炎 , 口舌糜烂 , 火眼 , 目黯 , 痢疾 , 腹泻 , 腹痛 , 痔疮出血 。 适
用于治疗肝胆湿热证的急慢性肝炎 , 疥疮肿毒和急性腹痛 , 是民间治
疗肝炎、 肝硬化 、 肝癌等疾病的常用中草药 2[] 。 目前国内外对岩黄连
文献报道主要集中在岩黄连总生物碱的成分分析 、 药理作用及含量测
定等降 6] , 本文对广西4个不同产地野生岩黄连中脱氢卡维丁含量进行
测定 , 以期了解将岩黄连野生变家种的合适产地 。
1 仪器与试药
A g il en tl 20 0高效液相色谱仪 (D A D检测器 , 美国安捷伦 ) ; L G -
16 w 高速微量离心机 、 K Q一 5 0 0 0 E医用超声清洗器 (昆山超声仪器有
限公司 ) 、 B P ZI I D 电子分析天平 (北京赛多利斯 ) 。
乙睛 (色谱纯 , T E D I A ) 、 甲醇 (北京化工厂 ; 优级纯 ) 、 超
纯水 (杭州娃哈哈 ) 、 乙醇 (北京化工厂 ; 优级纯 ) 、 三乙胺 、 磷
酸等其他试剂均为分析纯 ; 脱氢卡维丁 (供含量测定用 , 中检所
1 1 16 67
一
20 04 0 1 )
; 岩黄连药材采收自广西靖西 、 东兰 、 、 田林 、 那坡
4个县 , 经广西中医学院刘寿养教授鉴定为婴栗科紫荃属植物石生黄
荃e o圳d a li S S二 e o l a B u nt in g的全草 , 阴干 、 粉碎过 2 0目筛 。
2 方法与结果
2
.
1 色谱条件
色谱柱 : u lit m ate e l s (Z s o m m x 4 . 6m m x s林m ) ; 流动相 : 0 . 1%
三乙胺水溶液 (磷酸调 PH一 3 ) 一乙睛 (75 : 25 ) , 流速 1 . o m L m/ in , 检
测波长3 4 7n m , 柱温30 ℃ , 进样量 5林L , 理论塔板数按脱氢卡维丁计
不低于 50 0 , 色谱图见图 1。
. 注
40 m m
, 冷却后补足重量 , 摇匀 , 过滤 , 取续滤液过0 . 45 林m的微孔滤
膜即得。
2
.
4 精密度试验
精密吸取脱氢卡维丁0 . 1 2m g /m L对照品溶液按上述色谱条件连续
进样 6次 , 以脱氢卡维丁峰面积计算R S D为 0 . “ % , 出峰时间R s D为
0
.
84 %
, 实验结果表明进样精密度结果符合规定。
2
.
5 重复性试验
精密称取同一批样品6份 , 按 2 . 3制备供试品溶液 , 在 2 . 1色谱条件
下测定 , 以脱氢卡维丁含量计算R S D一 2 . 6% , 实验结果表明方法的重
复性较好。
2
.
6 稳定性试验
取 2 3项下供试品溶液 , 室温放置0 , 4 , 8 , 12 , 24 , 4 h8 , 在 2 . 1色
谱条件下测定 。 以脱氢卡维丁除封面积计算R S D , 考察供试品溶液的稳
定性 , 实验结果R S D一 1 . 45 , 表明供试品溶液在 4 h8 内稳定性较好 。
2
.
7 标准曲线制备
精密吸取脱氢卡维丁 0 . 12 m g /m L对照品溶液 1 . 0 , 2 . 0 , 4 . 0 , 8 . 0 ,
10
.
0 m L
, 至于 10 m L容量瓶中加人 1% H CI 甲醇溶液至刻度 , 分别进
样 , 以溶度为横坐标 , 峰面积积分值为纵坐标 , 进行线性 回归 , 得回
归方程为Y 一 2 7 3 7 x 一 1 2 4 7 , : 一 0 . 9 9 9 4 。 脱氢卡维丁在 12 一 12 0 尽 g /m L范
围内呈良好线性关系 。
2
.
8 加样回收率实验
精密称取 已测定含量 的岩黄连 (广西靖西 , 脱氢卡维丁含量
1
.
91 4% ) 6份 , 精密加人对照品储备液适量 , 按 2 . 3项下方法处理 , 在
上述色谱条件下测定 , 计算平均加样回收率。 结果脱氢卡维丁的平均
回收率为9 7 . 8 5% , R S D一 0 . 9 1% ( n 一 6 ) , 见表 l 。
表 1 加样回 收率实验结果
样品中含 加人量 测得量 回收率 平均值
R S D (% )
.口 .之 毛恤臼
图 1 1 1】〕 L C 色谱图 (A 脱氮卡维丁对照品 、 B 岩黄连样品 、 1脱氮卡维丁 )
2
.
2 对照品溶液的制备
精密称定脱氢卡维丁对照品 1 . 2 m g , 置 10 m L容量瓶 , 加人 1% HCI
甲醇定容至 10 m L , 配制成 0 . 12 m gm/ L的对照品溶液 。
2
.
3 供试品溶液的制备
精密称定岩黄连药材 1 . 09 , 加人 1% H CI 甲醇溶液40 m L , 超声处理
墓金项 目 : 广西壮族 自治 区科技攻关项 目资助项 目 (。8 ! 5 0 05 一 !一 ! 2 )
,通讯作者
0
.
9 57 6 0
.
9 5 8 2 1
.
8 5 5 1 9 6
.
8 3
0
.
9 4 8 8 0
.
9 6 0 3 1
.
8 8 17 9 8
.
5 6
0
.
9 3 3 2 0石 8 7 5 1 . 57 5 8 9 7 . 2 3 9 7 . 8 5 0 . 9 1
0
.
9 0 2 5 0石 9 8 7 1 . 56 7 8 9 7 . 9 1
0
.
9 4 13 0
.
8 0 6 4 1
.
7 0 22 9 7
.
3 9
0
.
9 2 14 0
.
7 9 8 8 1
.
7 0 59 9 9
.
17
2
.
9 样品测定结果
样品测定 将不同产地的岩黄连样品分别 2 . 3项下方法制备供试
品溶液后进样分析 , 按标准曲线计算脱氢卡维丁的含量 , 所得结果
见表 2 。
3 讨 论
岩黄连药材中含有脱氢卡维丁 、 盐酸小聚碱 、 黄连碱 、 脱氢阿叶
DOI : 10. 15912 /j . cnki . gocm. 2013. 03. 057
表 2 广西 4个不同产地野生岩黄连脱氛卡维丁含量测定结果
编号 产地 脱氢卡维丁含量 (% ) R S D ( % )
l 广西靖西 ( 100 6 12 ) 1 . 9 14 1 . 34
2 广西东兰 ( 100 7 0 9 ) 1 . 16 8 0 . 98
3 广西田林 ( 100 62 2 ) 1 . 3 7 4 1 . 6 7
4 广西那坡 ( 100 62 8 ) 2 . 10 3 0 . 56
卡维丁 , 脱氢异阿叶卡维丁 , 巴马丁 , 四氢 巴马丁等多种生物碱成
分 , 脱氢卡维丁又名岩黄连碱 , 为岩黄连中特有成分 , 且在药材中含
量较高 , 有比较容易提取出来 。 文献报道队 “ , 7 , 8〕脱氢卡维丁含量测定
的洗脱剂一般选用 o t ol mo l几的磷酸二氢钾水溶液 , 主要是因为生物碱
成分在H PL C中容易造成色谱峰拖尾现象 , 而且本实验用的脱氢卡维丁
对照品德色谱峰拖尾很严重 , 但是鉴于磷酸二氢钾是强碱弱酸盐 , 对
仪器和柱子的损耗性较大 , 在前人研究基础上加以创新 , 选用 0 . 1%三
乙胺水溶液 (磷酸调PH = 3 ) 一乙睛 (巧 : 2 5 ) , 色谱出峰时间 , 峰形等
都较好 。 野生岩黄连种脱氢卡维丁的含量以广西那坡为最高 , 但是本
实验只采集到4个不同产地样品 , 而且 4个产地样品脱氢卡维丁含量相
差较大 , 与文献 l9] 报道相一致 。 岩黄连作为广西濒危药材 , 如何有效
对其进行科学研究和保护 , 应该大范围地考查岩黄连的资源分布及不
同产地间的成分差异 , 并且对其选种 , 野生变家种进行系统研究。
参考文献
[ l」
[3」
[4」
[5」
[6」
[7」
[9」
· 实验研究 . ; 81
国家中医药管理局 《中华本草 》 编委会 .中华本草 .第 3册 [M ] .
上海 :上海科学技术出版社 , 1 9 9 :9 6 3 8 .
中国科学院广西植物所 .广西植物志 [M ] .南宁 :广西科学技术出
版社 , 19 9 3 : 4 1 0 .
程华 ,余龙江 ,胡琼月 ,等 .分光光度法测定岩黄连不同部位总生
物碱的含量 lJ] 旧寸珍国医国药 ,2 0 0 6 , 17 ( :3) 3 64 .
李林 ,王巧晗 ,毛春芹 ,等 .不同产地岩黄连中总生物碱和脱氢卡
维丁的比较研究 [J ].时珍国医国药 ,2 0 0 7 , 1 8 ( 1 0 ) : 2 4 3 6 .
童鳃 .岩黄连总生物碱对小鼠免疫功能的影响 IJ] .免疫学杂志 ,
19 9 5
,
1 1( 4 ) : 2 3 8
.
黄燮陶 ,刘国雄 ,张毅 .岩黄连总生物碱的安定作阴中国药理学
报 , 1 9 8 1 , 2 ( 3 ) : 1 56 .
韦记青 ,蒋伟哲 ,蒋水元 ,等 .反相高效液相色谱法测定岩黄连药
材中岩黄连碱的含量阴 .时珍国医国药 ,2 0 0 7 , 1 8 (:9) 2 0 7 7 .
胡芳,陆兔林 ,毛春芹 ,等 . HP L C法测定岩黄连生物总碱中脱氢
卡维丁 、 盐酸巴马汀和盐酸小聚碱的含量 lJ] 中国实验方剂学
杂志 , 2 0 1 , 17 (7 :) 70 一7 3 .
黄其春 ,涂文升 ,龙俊青 ,等 .广西各地岩黄连药材中脱氢卡维丁
含量考察阴 .药物研究 , 2 0 0 9 , 1 8 (2 3 ) : 9 一 10 .
山豆根配方颗粒中总生物碱含量的分析
谢丽莎 闰守霞 金 钊 江海燕 *
(广西中医药大学赛恩斯新医药学院 , 广西 南宁 53 0 2 22)
【摘要」 目的 测定 山豆根配方颗粒中总生物碱含量 。 方法 采用酸性染料比 色法 , 在 pH =7 . 4 缓冲溶液条件下 , 以 澳百里酚蓝为显 色剂 , 氛
仿革取 , 在 41 3 nm 下测定紫外吸光度 。 结果 苦参碱线性范围在 4
.
2 9一21
.
4 协留川 L (=r O . 9 9 9O ) ; 平均加样回收率为 9 . 54 % (R SD =2 . 17 % ) 。
结论 该方法简单、 快速 、 准确 , 可用于 山豆根配方颗粒质量控制 。
【关键词」山豆根配方颗粒 ; 总生物碱 ; 含量分析
中图分类号 : R 2 8 2 . 7 1 0 . 3 文献标识码 : B 文章编号 : 16 7 1一 8 1 9 4 ( 2 0 1 3 ) 0 3一 0 4 8 1一 0 2
山豆根配方颗粒与其药材一样 , 具有清热解毒 , 消肿利咽 。 用于
火毒蕴结 , 乳蛾喉痹 , 咽喉肿痛等功效。 山豆根药材总生物碱含量较
高是评价质量的重要指标之一 , 本试验以苦参碱为对照品 , 建立了山
豆根配方颗粒总生物碱含量的测定方法 , 现报道如下 。
1 仪器与材料
1
.
1 仪器
T U
一
1 9 0 0型紫外分光光度计 (北京普析通用仪器有限公司 ) ,
FA 2 0 0 4电子天平 (上海恒平科学仪器公司 ) , p H S一 25 型酸度计 (上海
精密科学仪器有限公司 ) 。
l
t
2 材料
嗅百里酚蓝 , 超纯水 , 甲醇、 氨水 、 氯仿 、 磷酸二氢钾 、 氢氧化
钠、 95 %乙醇等试剂均为分析纯 。
l
t
3 材料
山豆根配方颗粒 (南宁培力药业有限公司 , 批号 : A 0 6 1 0 2 4 一 0 1、
A o s l o 8 2
一
0 1
、
A o go 7 o 6
一
0 1
,
A l o l 2 7 6
一
0 1 )
, 苦参碱对照品 (中国药品
生物制品检定所 , 批号 : 1 1 0 8 0 5 一 2 0 0 5 0 8 ) , 嗅百里酚蓝 、 甲醇 、 氨
水、 氯仿等试剂均为分析纯 。
基金项 目 : 广 西教育厅科研项 目 (2 。! ! 。6 L理 8 5 )
中医药大学赛恩斯新药学院科研项 目 (编号 : 2 。 ! ! 。2 0 1)
,通讯作者
2 方法与结果
2
.
1 对照品溶液制备
精密称取干燥至恒重的苦参碱对照品适量 , 用 95 % 乙醇制成含
5 3 6 口留n 止苦参碱的对照品原液 , 吸取 I n止对照品原液 , 用 5% 乙醇定
容于25 毗容量瓶中 , 作为对照品稀释液 。
2 2 供试品溶液制备
取山豆根配方颗粒 0 . 59 , 研成粉末 , 精密称量 , 置具塞锥形瓶
中 , 精密加人氯仿 : 甲醇 ( 10 : 10) 20 m L , 氨液 l t smL , 密塞 , 称
量 , 于叩℃水浴回流加热 4 h J琶补重 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤液转移 , 精
密量取续滤液 10 n 止 , 挥干溶剂 , 加甲醇溶解稀释 , 转移于 10 n 止容量
瓶中至刻度 , 摇匀 , 吸取 1毗 , 蒸干溶剂 , 用 95 % 乙醇定容于 10 毗容
量瓶中 , 摇匀 , 即得 。
2 3 缓冲液及显色剂配制
吸取 0 Z m o比磷酸二氢钾 25 n止 , 0 . l m o比氢氧化钠 3 9 n 止 , 加水至
10 o n止容量瓶中 , 用p H酸度计校正至〕 4作为缓冲液。 精密称取嗅百里
酚蓝0 t 0 2 5 0 9 , 加缓冲液至 1 0 毗容量瓶中配制成0 t0 25 %的显色剂 。
2 4 线性关系考察
分别精密吸取苦参碱对照品原溶液 1 . 0 、 2 . 0 0 、 3 . 0 、 4 . 0 0 、
5
t
0 0 n 止于 25 n 止容量瓶中 , 分别吸取 Z n止 , 分别置于具塞锥形瓶中。
以加人2毗的95 % 乙醇为空白对照 , 在 4 13 n m波长处测定吸光度 , 以