全 文 ：作者简介 刘临(1964-),男,江西高安人,实验师,从事基础化学教学
与研究。*通讯作者。
收稿日期 2006!05!22
泡桐属(Paulownia)植物是玄参科(Scrophulariaceae)落
叶乔木,原产于我国,现有 9个种,4个变种[1]。泡桐不仅是
材质优良的树种,且其花、叶、果、树皮、根均可入药[2]。临床
上泡桐花用于治疗呼吸道感染、支气管肺炎、急性扁桃体
炎、菌痢、急性肠炎、急性结膜炎和腮腺炎[2],为我国重要的
传统中草药。泡桐花中主要含有三萜、倍半萜、黄酮、环烯醚
菇苷、苯丙素苷、木脂素苷等化学成分[3],其中三萜酸类,特
别是乌索酸和齐墩果酸,由于其显著的药理活性,已引起人
们广泛的关注。据报道,三萜酸类物质具有抗菌、抗病毒、抗
肿瘤、降血糖血脂等多种生理作用[4]。笔者首次建立了毛泡
桐花中乌索酸和齐墩果酸的反相高效液相色谱—二极管阵
列检测器(RP-HPLC-PAD)的测定方法,以期为从毛泡桐花
中制备该类化合物提供参考,并为毛泡桐花的开发利用和
质量控制提供依据。
1材料与方法
1.1 材料、仪器与试剂 毛泡桐花采自江西宜春市区,经
该所生药室鉴定为毛泡桐花 [FlowersofPaulowniatomentosa
(Thunb.)Steud]。Waters系列高效液相色谱仪,包括双 515
泵,二极管阵列检测器(2996型),Enpower中文色谱数据工
作站。
甲醇为色谱纯,水为高纯水,其余试剂均为分析纯;乌
索酸和齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号
110742-200314、110709-200304,供含量测定用)。
1.2 色谱条件 色谱柱为NucleodurC18柱(4.6mm×250mm,
5μm);流动相为甲醇:0.5%冰醋酸溶液(体积比,86∶14);流
速1.0ml/min;检测波长205nm。外标法定量分析。
1.3 溶液配制
1.3.1 对照品溶液。准确称取乌索酸、齐墩果酸对照品
高效液相色谱法测定毛泡桐花中乌索酸和齐墩果酸的含量
刘临 1,邹盛勤 2,3*(1.宜春学院化学与生物工程学院,江西宜春 336000;2.江西省天然药物活性成分研究重点实验室,江西宜春 336000;
3.宜春学院生物工程研究所,江西宜春 336000)
摘要 建立了毛泡桐花中乌索酸和齐墩果酸的高效液相色谱分析方法。色谱柱为NucleodurC18(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲
醇:0.5%冰醋酸溶液(体积比,86∶14),流速1.0ml/min,检测波长205nm,柱温25℃。乌索酸进样量在0.0785～6.28μg时,与峰面积呈
良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为97.8%,相对标准偏差(RSD)为0.6%;齐墩果酸在0.051～4.08μg时,与峰面积呈良好的
线性关系(r=0.9999),平均回收率为99.2%,RSD为0.3%。该方法操作简便、快速、准确,可用于毛泡桐花的质量控制。
关键词 高效液相色谱法;毛泡桐花;乌索酸;齐墩果酸;含量
中图分类号 O657.7+2 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2006)16-3881-01
HPLCDeterminationofUrsolicAcidandOleanolicAcidinFlowersofPaulowniatomentosaSteud
LIULinetal(SchoolofChemistry&Bioengineering,YichunUniversity,Yichun,Jiangxi336000)
Abstract HPLCmethodcoupledwithphotodiodearaydetection(PAD)forthedeterminationofursolicacidandoleanolicacidinflowersof
Paulowniatomerztosa(Thunb.)Steud.wasestablished.TheseparationwasachievedonaNucleodurC18column(4.6mm×250mm,5μm)at25℃
withmethanol-0.5%aceticacidsolution(86:14)asthemobilephaseataflowrateof1.0ml/min,205nmasthedetectionwavelength.Ursolic
acidshowedgoodrelationshipwiththepackareaattherangeof0.0785～6.28μg(r=0.9999).Therecoverywas97.8%.Oleanolicacidshowed
goodrelationshipwiththepackareaattherangeof0.051～4.08μg(r=0.9999).Therecoverywas99.2%.Theproposedmethodwassimple,
rapidandaccurateandpromisedtobeapplicableforthequalitycontrolofflowersofPaulowniatomentosa(Thunb.)Steud.
Keywords HPLC;FlowersofPaulowniatomentosaSteud;Ursolicacid;Oleanolicacid;Content
15.05.0 10.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0
t/min
A 1
2
15.05.0 10.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0
t/min
图1 对照品和样品的HPLC色谱
B
12
6.28和4.08mg,置于10ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至
刻度,摇匀,制成对照品混合贮备液。
1.3.2 样品溶液。取60℃干燥,粉碎过20目筛的毛泡桐花
粉末约3g,置于50ml具塞锥形瓶中,用95%乙醇40ml超
声提取60min,过滤,残渣用乙醇洗涤,合并滤液,定容至50ml
容量瓶中,摇匀,作为样品溶液。
2 结果与分析
2.1 线性关系试验 从乌索酸和齐墩果酸对照品溶液中
准确吸取 5ml用流动相依次作稀释,乌索酸浓度分别为
314、157、78.5、39.25、7.85μg/ml,齐墩果酸浓度分别为204、
(下转第3883页)
安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2006,34(16):3881,3883 责任编辑 陈 娟 责任校对 范世群
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2006.16.002
(上接第3881页)
102、51、25.5、5.1μg/ml,准确吸取对照品混合贮备液及稀释
液各10μl,按1.2色谱条件测定峰面积,以对照品的进样量
为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得乌索酸回归
方程为:Y=2.521×106X-1.326×104(r=0.9999),齐墩果酸回
归方程为:Y=3.557×106X-2.681×104(r=0.9999)。表明乌索
酸进样量在 0.0785～6.28μg,齐墩果酸进样量在 0.051～
4.08μg时,线性关系良好。对照品和样品色谱图见图1。
2.2 精密度试验 吸取对照品混合贮备溶液5μl,于同日
内每隔2h测定 1次,共 5次,以峰面积计算色谱系统精密
度,求得乌索酸和齐墩果酸峤面积RSD分别为0.6%和0.3%。
说明进样方法和仪器精密度良好。
2.3 加样回收率试验 准确称取已知乌索酸和齐墩果酸
含量的毛泡桐花样品 9份各约 3g,分为 3组,每组分别加
人对照品适量,制备样品溶液进样测定含量,乌索酸平均回
收率为97.8%,RSD为1.2%;齐墩果酸平均回收率为99.2%,
RSD为1.5%。
2.4 样品溶液中乌索酸和齐墩果酸含量 准确吸取样品
溶液各10μl,进样,按1.2色谱条件进行测定。按外标法计
算,得毛泡桐花中乌索酸的含量为0.3001%,RSD为1.8%,
齐墩果酸的含量为0.1013%,RSD为1.3%。
3 讨论
(1)文献报道的三萜酸类化合物的检测波长多为210nm[5]
和 215nm[6],采用二极管阵列检测器对进样后的乌索酸和
齐墩果酸对照品进行全波长扫描,结果两组分均在199.9nm
处有最大吸收,为了避免流动相对基线的影响,提高检测灵
敏度,试验中选定检测波长为205nm,基线平稳,峰形对称,
两组分分离良好。
(2)分别采用超声波法、加热回流法提取样品2h,测定
其含量,发现超声波法提取含量较高,且处理简便,故确定
提取方法为超声法。同时,进行了提取次数的考察,分别用
超声处理 1、2、3次(每次 60min),测定其含量,发现超声
处理1次后,组分含量不再增加,故超声处理次数定为1次。
(3)该试验选用了甲醇—水体系为流动相,并以不同配
比和流速进行试验,发现随甲醇浓度的降低(90%~86%),
流速的增大(0.8～1.0ml/min),乌索酸、齐墩果酸的保留时间
增加,并与杂质峰的分离度增大;当甲醇浓度降低到 86%,
流动相洗脱速度增加到 1.0ml/min时,乌索酸、齐墩果酸与
杂质峰达到基线分离,但峰形拖尾,这是由于两组分结构中
的羧基存在解离现象,加入0.5%的冰醋酸能有效抑制其解
离,使拖尾现象得以改善,峰形尖锐对称。通过二极管阵列
检测器检测以及色谱数据工作站系统适应性模块纯度角理
论判定,组分色谱峰的纯度角值小于阈值,为纯化合物的单
一组分吸收峰[7]。最终选定流动相为甲醇:0.5%冰醋酸溶液
(体积比,86∶14),流速为1.0ml/min。
(4)采用该试验建立的 HPLC-PAD法测定毛泡桐花中
乌索酸和齐墩果酸的含量,方法简便、快速、准确,为传统中
药的现代化、产业化奠定了技术基础。
参考文献
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房,2005,26(24):1916-1917.
的降解率高达(91.31±5.34)%,生物量高达(19.9±3.2)g/L。
3 讨论
从霉变的稻草、麦秸、枯枝烂叶和烂玉米芯中筛选了大
量菌株,发现烟曲霉 XC6菌株对稻草具有明显的降解能
力。试验表明,当氮源为(NH4)2SO45g/L,培养温度为30℃,
最适种龄为 36h,接种量为 10%,培养时间为 2～3d时,该
菌株对稻草的降解率高达(91.31±5.34)%。这对于稻草的生
物降解和利用具有十分重要的意义。
参考文献
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木质素的定量分析程序[J].微生物学通报,1987,14:81-86.
0.85
0.90
0.95
1.00
1.05
7.5
0
1053
DR BW
15
20
25
D
R
B
W
∥
g/
L
接种量∥ml
图3 接种量对DR与BW的影响
0.8
0.9
1.0
1.1
1.2
7.5
0
1053
DR BW
10
20
25
D
R
B
W
∥
g/
L
种龄∥h
图4 种龄对DR与BW的影响
15
金显春等 烟曲霉XC6菌株的发酵条件优化研究34卷16期 3883