全 文 ：柿叶黄酮类化合物提取方法和抗氧化性的研究＊
宋常春　鲍庆胜
(安徽技术师范学院基础部 , 蚌埠 , 233100)
摘　要　采用不同的方法提取柿叶中的黄酮类化合物 , 比较不同提取方法的提取效率及提取物中
黄酮类化合物的含量 , 从而探讨最佳的提取方法并对柿叶提取物抗氧化性进行了研究。结果表
明:体积分数 75%乙醇提取法较佳 ,柿叶提取物的抗氧化性效果优于抗坏血酸和柠檬酸。
关键词　柿叶 , 黄酮类化合物 , 提取方法 , 抗氧化性
　第一作者:硕士 ,副教授。
＊安徽省高等学校青年教师科研资助项目(No.2000JqL41)
　收稿时间:2004-03-24 ,改回时间:2004-04-20
　　柿树(Diospyros kak i)属柿树科柿属的植
物 ,据国外杂志报道柿树叶中含有大量黄酮类
化合物。黄酮类化合物具有抗过敏 、降血压 、抗
炎 、抗菌 、抗肿瘤 、保肝和降血脂等活性[ 1] 。在
食品工业上可用作抗氧化剂 、色素等 ,在医学上
可治疗冠心病 、脑血栓和消除自由基。为了开
发柿叶资源 ,本文对柿叶黄酮类化合物提取方
法和抗氧化性进行了初步实验研究 。
1　材料与方法
1.1　试验材料
原料:柿叶 ,采自安徽技术师范学院果园 。
将柿叶切成小片 ,用粉碎机粉碎后 ,在干燥箱干
燥备用。
试剂:芦丁(生化试剂 , 上海生化试剂二
厂),其他试剂均为分析纯 。
1.2　试验方法
1.2.1　柿叶提取物中黄酮类含量的测定
准确称取芦丁标准品 26.33mg ,加甲醇溶
解后定容至 100mL 容量瓶。取 10mL 定容至
50mL 容量瓶中 ,吸取1.0 、2.0 、3.0 、4.0和5.0
mL ,分别置于 10 mL 容量瓶中 , 加质量分数
5%AlCl3甲醇溶液 1 mL ,用甲醇稀释至刻度 ,
摇匀静置 10 min。在 433 nm 处测定吸光度 。
以样品浓度为横坐标 ,吸光度为纵坐标作图 ,得
一直线。
回归方程为:A = -3.20×10-3+3.24×
10-2C　r =0.998 4
其中 A 为吸光度 , C 为芦丁标准品浓度 ,
mg/mL。
1.2.2　柿叶中黄酮类化合物的提取
1.2.2.1　热水提取法
称取柿叶粉 50 g ,用石油醚浸泡脱脂 1 h ,
过滤水洗净后 ,以固液质量比 1 g∶10 mL 、1 g∶8
mL分别用水加热到 100℃, 60 min 提取 2 次 ,
合并提取液并浓缩至一定体积后 ,加入体积分
数 60%乙醇 250mL 使蛋白质 、多糖等沉淀 ,趁
热过滤 , 上聚酰胺柱吸附 , 然后用体积分数
70%乙醇解吸 ,过滤后将提取液置于硫酸纸内
60℃烘干 ,把黄酮粉末称重 、计算产率并测定提
取物中黄酮化合物的含量。
1.2.2.2　体积分数 75%乙醇提取法
称取 50 g 柿叶粉 ,先用石油醚脱脂 ,然后
用体积分数 75%乙醇以固液质量比 1 g∶5 mL ,
在 70℃提取 90min ,过滤后上聚酰胺柱吸附 ,
解吸 、过滤 、干燥得固体 。称重 、计算提取率并
测定提取物中黄酮化合物含量。
1.2.2.3　甲醇提取法
称取 50 g 柿叶粉 ,先用石油醚脱脂 ,再用
甲醇以固液比为 1g∶6 mL ,在 80℃下提取 120
min ,过滤液上聚酰胺柱吸附 ,解吸 、过滤 、干燥
后得固体 。计算提取率并测定黄酮化合物含
量 。
1.2.2.4　乙酸乙酯提取法
117
食品与发酵工业　Food and Fermentation Industries 　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
2004年第 30卷第 9期(总第 201期) 　　　
DOI :10.13995/j.cnki.11-1802/t s.2004.09.031
称取柿叶粉 50 g ,用石油醚脱脂后 ,用乙酸
乙酯以固液比 1 g∶10 mL 、在 80℃下回流 90
min ,过滤液上聚酰胺柱吸附 ,解吸 、过滤 、干燥
后得固体。计算提取率并测定黄酮化合物含
量。
1.2.3　抗氧化性测定
将纯猪油及添加了一定量提取液的猪油置
于60℃左右的烘箱 ,每隔一定时间计算其 POV
值。
POV/ %=126.9 ×(V1 - V2)×100/
(1 000×m)
　　式中:V 1 ,样品消耗硫代硫酸钠标准溶液
的体积(mL);V 2 ,空白试剂消耗硫代硫酸钠标
准溶液的体积 , mL;C ,硫代硫酸钠标准溶液的
浓度(mol/L);m ,样品质量(g);126.9 ,碘的摩
尔质量(g/mol)。
V1 和 V 2 的测定是精确称取 3g 混匀样
品 ,置于碘瓶中 ,加入 30 mL 氯仿-冰乙酸混合
溶液样品 ,再加入1mL饱和碘溶液 ,摇匀 ,放置暗
处5min ,然后加水 100mL ,以0.0002mol/ mL硫代
硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色时 ,加 1mL 淀粉
指示剂 ,继续滴定至蓝色消失为止 。以空白试
剂滴定为参比 ,空白试剂消耗硫代硫酸钠标准
溶液的体积为 2.9mL。
2　结果与分析
2.1　提取方法比较
表 1为各种不同提取方法的比较 ,结果显
示:热水提取法中黄酮化合物含量较低 ,而且提
取液存放易腐烂变质 ,后续的过滤 、干燥等操作
困难 。原因是由于用极性大的水作溶剂 ,容易
把蛋白质 、糖类等易溶于水的成分浸提出来 ,造
成霉变;体积分数 70%乙醇提取法克服了水提
法存放易霉变的缺点 ,具有收率及黄酮化合物
含量较高 ,后续的过滤 、溶剂回收 、干燥等操作
比较容易等优点 。乙酸乙酯提取法的提取率较
低 ,提取费用较高 ,不是一种较好的提取方法 。
甲醇提取法的提取率虽然较高 ,但该法成本高 ,
污染严重 ,提取工艺较复杂 ,使用的甲醇为有毒
试剂 ,不适宜于柿叶黄酮化合物的提取。
表 1　提取黄酮化合物的不同方法比较
序　号 柿叶粉质量/ g 　提取法 提取物/ g 提取率/ % 黄酮含量/ % 颜　色
1 50 热水提取法 0.36 0.72 7.10 淡黄色
2 50 乙醇提取法 3.10 6.20 23.6 黄　色
3 50 甲醇提取法 2.10 4.20 21.3 黄　色
4 50 乙酸乙酯提取法 0.47 0.94 12.3 黄　色
2.2　抗氧化活性分析
影响黄酮类化合物抗氧化活性的因素 ,最
主要的是羟基化的程度和羟基位置。一般来
说 ,B环中的邻二羟基对黄酮类化合物的抗氧
化活性起主要作用。黄酮类于 O2 、OH 的反应
相当于一个连锁反应在终结阶段的反应 ,在消
除O2 、OH 的反应中起着氢供体的作用 ,使具有
高度氧化活性的自由基还原 ,从而达到消除的
目的[ 2] 。
将纯猪油及添加 0.01%、0.02%、0.03%、
0.04%的乙醇提取液的猪油置于 60℃恒温箱
中 ,每隔几天测定计算其 POV 值 ,结果如表 2
所示。柿叶的乙醇提取液具有抗氧化性能 ,并
且随提取液浓度升高 ,过氧化值变小 ,抗氧化性
增强。
表 2　柿叶黄酮化合物对猪油的抗氧化
作用(POV值)　mmol/ kg
样　品 时间/ d
0 3 6 9
纯猪油 0.034 0.057 0.071 0.450
0.01%提取液 0.034 0.055 0.068 0.284
0.02%提取液 0.034 0.047 0.049 0.257
0.03%提取液 0.034 0.041 0.043 0.246
0.04%提取液 0.034 0.036 0.037 0.225
　　抗氧化性比较:为了进行相关比较 ,分别在
猪油中加入 0.03%的柿叶乙醇提取液 、抗坏血
酸 、柠檬酸 、EDTA 。每隔几天计算其 POV 值 ,
结果如表 3所示 。4种试剂中抗氧化性活性顺
序为:EDTA>提取液 >抗坏血酸>柠檬酸 。
柿叶提取液的抗氧化性比较强。
118
分离与提纯
　　　 2004 Vol.30 No.9(Total 201)
表 3　不同抗氧剂对猪油的抗氧化
作用(POV 值)　mmol/kg
样　品 时间/ d
0 4 8
0.3%提取液 0.062 0.068 0.287
0.3%抗坏血酸 0.062 0.089 0.301
0.3%柠檬酸 0.062 0.132 0.413
0.3%EDTA 0.062 0.066 0.279
3　结　论
比较了几种不同提取方法的提取效果 ,实
验显示:体积分数 75%乙醇提取法提取率较
高 ,提取物比较容易浓缩和干燥 ,是一种较好的
提取方法。
柿叶黄酮类化合物的抗氧化性较强 ,通过
对猪油的抗氧化效果试验发现:其抗氧化效果
比抗坏血酸和柠檬酸稍强。
参 考 文 献
1　谭仁祥.植物成分分析[ M] .北京:科学出版社 ,
2002.486 ～ 502
2　万素英 ,赵亚军 , 李　琳等.食品抗氧化剂[ M].北
京:中国轻工业出版社 , 1998
Study on Extraction Method and Anti-oxidation Property
of Flavonoid Compound from Leaves of Diospyros kaki
Song Changchun 　Bao Qingsheng
(Department of Basic Courses , Anhui Technical Teachers College , Bengbu , 233100)
ABSTRACT　The ex traction method of flavonoid in leaves of Diospyros kaki was studied.The opti-
mum ex tracting process w as put forw ard , and anti-oxidation property of the ex tract from the leaves of
Diospyros kaki was studied.The results showed that the optimum ex tracting technical process was
75% alcohol.Effect of flavonoid from the leaves of Diospyros kaki was higher than asco rbic acid and
citric acid.
Key words　leaves of Diospyros kaki , f lavonoid , ext ract ion method , antioxidant
(上接第 111页)
23　彭笑蓉 , 孙文梅.竞争酶标免疫法检测“瘦肉精”
[ J] .河北畜牧兽医 , 2003 , 19(4):42 ～ 43
24　张苏华 , 黄士新.国产“瘦肉精” ELISA 试剂盒与
同类进口试剂盒的对比试验[ J] .上海畜牧兽医通
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26　Pizaariello A , Stred ansky M , S tred ansky S et al.
A Solid binging matrix/ molecularly imprinted po ly-
mer-based sensor sy stem for the determination of
clenbuterol in bovine liver using differential -pulse
voltametry [ J] .Senso rs and Actuators B , 2001 , 76:
286～ 294
Hazard of Clenbuterol Residual in Animal Food and Research
Progress on Its Determination Method
Zhang Qing an 　Fan Xuehui
(Depar tment of Food Engineering , Shaanxi Normal University , Xi an , 710062)
ABSTRACT　In this paper we int roduced the physicochemical characterist ics and mechanism of clen-
buterol , analy zed its hazard to human health and national economy , and summarized test ing methods of
residual clenbuterol in animal food.
Key words　animal food , clenbuterol , residual ,determination method
119
分离与提纯
2004年第 30卷第 9期(总第 201期)