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第 1 1 卷 第 8 期
2009 年 8 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 11 No. 8
Aug . ，2009
表 4 仙草对 2. 2. 15 细胞 (10×104) 分泌 HBV-DNA 的抑制效果
药物 浓度 HBV-DNA 抗原 (×10
6/copy·mL-1) HBV-DNA 抑制率 (% )
第 4 天 第 8 天 第 4 天 第 8 天
细胞对照 6.89±0.28 7.31±0.20 0 0
仙草
31.25 mg·mL-1 6.85±0.16 7.30±0.21 0.58 0.14
16.53 mg·mL-1 6.83±0.34 7.26±0.18 0.87 0.68
7.82 mg·mL-1 6.81±0.19 7.12±0.16 1.16 2.60
3.91 mg·mL-1 6.75±0.24 7.08±0.30 2.03 3.15
1.96 mg·mL-1 6.72±0.30 7.03±0.15 2.47 3.84
0.98 mg·mL-1 6.63±0.19 6.95±0.24 3.77 4.92
赛若金
400 IU·mL-1 5.01±0.25 * 3.90±0.26** 27.29 46.64
200 IU·mL-1 5.45±0.24 * 4.83±0.28** 20.90 33.93
100 IU·mL-1 5.97±0.13 5.52±0.17 13.35 24.49
注 ：与细胞对照组比较 , **P<0. 05，*P<0. 01。
的 HBV-DNA 有明显抑制作用，并且随着药物作用
时间的延长，抑制率逐渐增高 ( 作用 4d 时P<0.05，作
用 8d 时P<0.01)。
4　讨 论
本 实 验 采 用 PCR 方 法 荧 光 定 量 检 测 HBV-
DNA，采 用 微 粒 酶 免 疫 测 定 技 术 半 定 量 检 测
HBsAg 和 HBeAg，与以往采用 Southren 杂交、斑点
杂交等方法测定 HBV-DNA，采用 ELISA 方法测
定 HBsAg 和 HBeAg，明显提高了实验结果的可信
度。
本 实 验 结 果 表 明 : 仙 草 在 37.45mg/mL 浓 度 以
下，对 HepG2.2.15 细胞毒性较低 ；对 HepG2.2.15 细
胞分泌的 HBV-DNA 仅有微弱抑制作用，而对分泌
的 HBsAg、HBeAg 均有明显抑制作用，并随时间和
浓度增强，TI 远大于 2，提示仙草属有效低毒药物，
是具有潜在的抗 HBV 开发前景的药物。◆
参考文献
[ 1 ] 秦立红，郭晓宇，范明，等 . 凉粉草中抗缺氧化学成分 [ J ] . 沈
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[ 3 ] 刘莹，徐向进，陈明珠，等 . 仙草的降糖作用与急性毒性试验
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[ 4 ] Sargent J M，Taylor C G. Appeaisal of the MTT assay as a rapid
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Cancer，1989，60 ( 2 ) ：206.
[ 5 ] 张吕克 . 中和实验技术 [ M ] . 北京 ：科学出版社，1990 ：143.
丁香为桃金娘科植物丁香 Syzygium aromaticum
Merr.Perry(Eugeia caryophllata Thumb.) 的花蕾。味辛、
苦。性温。具有温中降逆，温肾助阳之功效，临床
主要用于胃寒呕吐、腹泻以及肾阳虚衰等。丁香中
丁香油提取方法研究
徐天生1，刘 莉2，梁 燕2，陈兴兴2
（1.广州美晨药业有限公司，广东 广州 510130 ；2.南方医科大学中医药学院，广东 广州 510515）
摘 要：目的 ：在几种常规提取方法中筛选出提取丁香挥发油的工艺。方法 ：采用高效液相色谱法对丁香酚进
行含量测定，确定丁香油的提取工艺。结果 ：丁香油的提取方法为乙醇回流提取法。结论 ：采用高效液相色谱法能
准确测定丁香酚的含量，进而确立丁香油的提取方法。
关键词：丁香油 ；丁香酚 ； 高效液相色谱法 ；提取工艺
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1673-842X (2009)08- 0221- 02
The Study of the Extracting Technology of the Volatile Oil of Flos Caryophylli
XU Tian-sheng1，LIU Li2，LIANG Yan2，CHEN Xing-xing2
（1.Guangzhou Meichen Pharmaceutical Product Limited Company,Guangzhou 510130,Guangdong,China;
2.School of TCM,Southern Medical University, Guangzhou 510515,Guangdong,China）
Abstract ：Objective ：To study and optimize the extracting technology of the volatile oil of Flos
caryophylli from the routine method of the extracting technology. Methods:Using high performance liquid
chromatography(HPLC) to assaying the content of eugenol in volatile oil, the best extracting technology was
selected. Results:Comparing the quantity of volatile oil and the content of eugenol in volatile oil, the method
of recirculation with alcohol was the best one. Conclusion:The content of eugenol in volatile oil is accurate
determined by HPLC,and the extracting technology of the volatile oil of Flos caryophylli is established.
Key words ：volatile oil of Flos caryophylli;eugenol; high performance liquid chromatography(HPLC);E
xtracting technology
收稿日期：2009-01-01
作者简介：徐天生（1984-），男，广东广州人，中药师，学士，研究方向 ：中药新产品、新技术。
通讯作者：陈兴兴（1970-），男，讲师，学士，研究方向 ：生药学。
DOI：10.13194/j.jlunivtcm.2009.08.223.xutsh.124
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辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 1 卷
抗菌物质主要是挥发油，含丁香酚、乙酰丁香酚、丁
香烯、水杨酸甲酯、甲基正成基酮、苯甲醛、乙酸苄酯
等。而丁香酚是丁香油的主要成分，近年来的研究
表明其有抑菌、麻醉、解热、抗氧化、抗肿瘤、促进透
皮吸收等多种药理活性 [1]。本文以丁香酚含量为指
标，对比研究了丁香油的提取方法，为其进一步开发
利用提供基础。
1 材料与仪器
丁香购于广东广弘中药材公司，经南方医科
大 学 陈 兴 兴 鉴 定 为 桃 金 娘 科 植 物 丁 香 Syzygium
aromaticum Merr.Perry(Eugeia caryophllata Thumb.) 的
花蕾。丁香酚对照品（批号 ：111702-200607）由中
国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯，其余
试剂均为分析纯。
Agilent 1100 高效液相色谱仪（安捷伦科技有限
公司，美国惠普 HEWLETT PACKARO 8453 紫外检
测器）；BP110S 电子天平 ( 德国 ) ；上海科导 SK1200H
超声波提取器（工作频率 ：59kHz，功率 45W）。
2 方法和结果
2.1 丁香油的提取方法
2.1.1 水提法 取丁香粉 100g，置 2000mL 圆底烧
瓶中，加 1000mL 水，置挥发油提取装置上回流提取
4h，收集挥发油。由于丁香油的比重与水相近，收集
的挥发油与水并不能很好的分离。往收集所得的挥
发油中加入 5mL 石油迷（30℃ ~60℃沸程），轻微振
摇，静止后油水分层，去除水层，在 40℃下蒸去石油
迷，得纯挥发油（以下称为水提物），备用。
2.1.2 乙醇回流提取法 取丁香粉 100g，置 2000mL
圆底烧瓶中，加 90% 乙醇 800mL，回流提取 2 次，每
次 2h，合并提取液，过滤，60℃回收乙醇，加 90% 乙
醇定容至 100mL，得丁香乙醇提取物，备用。
2.1.3 超声提取法 取丁香粉 20g，置 500mL 烧杯
中，加 200mL 水，超声提取 2 次，每次 30min，合并提
取液，加水定容至 400mL，得丁香超声提取物 [2]，备
用。
2.2 丁香酚的测定方法与结果
2.2.1 色 谱 条 件 固 定 相 ：反 相 C18 硅 胶 柱 [3]，流
动 相 ：甲 醇 - 水（13 ：8），柱 温 ：35 ℃，检 测 波 长 ：
280nm，流速 ：1.0mL/min。
2.2.2 对照品溶液的制备 精密吸取丁香酚标准品
0.1mL，置 10mL 容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，
再精密吸取 2mL，置 100mL 容量瓶中，加无水乙醇定
容置刻度，即得。
2.2.3 标准曲线的制备 精密吸取对照品 2、4、6、
8、10uL, 按照上述色谱条件进样，测定，进样体积
与峰面积见表 1。以进样体积对峰面积做线性回
归 方 程 得 A=231.97V-6.55，R2=1。 表 明 峰 面 积 在
459.1~2310 范围内，丁香酚进样体积与峰面积成良
好线性关系。
2.2.4 供试品溶液的制备 水提取物 ：按照与对照
品相同的制法制得 ；乙醇提取物 ：精密吸取 1mL 丁
香醇提物置 100mL 容量瓶中，加无水乙醇置至刻
度，再精密吸取 1mL 该溶液置 10mL 容量瓶中，加无
水乙醇至刻度，即得 ；超声提取物 ：精密吸取 40mL
丁香超声提取物置 50mL 容量瓶中，加无水乙醇至
刻度，再精密吸取该溶液 1mL 置 10mL 容量瓶中，加
无水乙醇至刻度，即得。
2.2.5 供试品测定及其结果 按上述色谱条件分别
精密吸取丁香水提取物、乙醇提取物、超声提取物
10μL 进样，测定，结果见表 1，色谱图见图 1。
表 1 供试品测定结果
样品 进样体积（µL） 峰面积 丁香酚含量（mL/100g）
水提物 10 1872.9 9.68水提物 10 1857.1
乙醇提物 10 1850.2 15.94乙醇提物 10 1832.0
超声提物 10 1138.6 2.47超声提物 10 1138.2

a. 标准品 b. 水提物

c. 乙醇提取物 d. 超声提取物
图 1 色谱图
2.2.6 精密度测定 精密吸取对照品溶液 10uL，连
续进样 5 次，其结果 RSD 为 0.77%。
2.2.7 稳定性测定 精密吸取对照品溶液，分别在
1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0h 进 样 10uL，其 结 果 RSD 为
1.4%。
2.2.8 加样回收率测定 精密吸取 6 份已知丁香
酚含量的乙醇提取物 1mL，精密加入丁香酚对照品
0.10、0.10、0.15、0.15、0.20、0.20mL，用无水乙醇定容
至 5mL，按上述色谱条件各进样 10μL，结果见表 2，
平均回收率为 99.27%，RSD 为 1.35%。
表 2 加样回收率结果
丁香酚含
量（mL）
丁香酚加
入量（mL）
丁香酚测
得量（mL）
回收率
（%）
平均回收
率（%）
RSD
（%）
0.1594 0.10 0.2574 98.00
99.27 1.35
0.1594 0.10 0.2601 100.70
0.1594 0.15 0.3056 97.47
0.1594 0.15 0.3078 98.93
0.1594 0.20 0.3602 100.40
0.1594 0.20 0.3596 100.10
3 讨 论
从上结果可以看出，丁香酚的含量为乙醇提取
物 > 水提取物 > 超声提取物，即乙醇回流提取法提
出的丁香油最多，水提法次之，超声提取法最少。
丁 香 油 中 主 要 含 有 丁 香 酚，其 含 量 约 为
70%~85%[4]，故本实验以丁香酚为指标，确定丁香油
的提取方法。
超声提取法是近年兴起的一种简便、快捷的提
取方法，但从数据上看，此法提出的丁香油太少，不
适合用于工业化生产。但对于实验室检验用，仍不
失为一种好方法。◆
参考文献
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[ 3 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典1 部[ S ] .北京 ：化学工
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