全 文 ：反相高效液相色谱法测定醉鱼草果实中木犀草素的含量
陈以军１，２，任亚硕２，３，吴德玲２，４，张　伟２，３，汪天明２，４
（１．六安市立医院，安徽 六安　２３７００１；２．现代中药安徽省重点实验室，安徽 合肥　２３００３８；
３．安徽中医药大学药学院，安徽 合肥　２３００３８；安徽中医药大学科技处，安徽 合肥　２３００３８）
［摘要］目的　建立反相高效液相色谱法测定醉鱼草果实中木犀草素含量的方法。方法　建采用 Ｗｅｌｃｈ　Ｕｌ－
ｔｉｍａｔｅ　ＡＱ－Ｃ１８色谱柱，流动相为甲醇－水－乙酸（６０∶４０∶２）系统，流速为１．０ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长为３５０ｎｍ，柱温
为２５℃。结果　木犀草素进样量在０．０４３２～０．４３２　０μｇ范围内与峰面积呈良好的线性关系，ｒ＝０．９９９　９；
加样回收率为９８．１５％；ＲＳＤ＝１．８７％（ｎ＝６）。结论　建所建立的高效液相色谱法简便、快速、灵敏度高，结
果准确可靠、重现性好，可用于醉鱼草果实中木犀草素的含量测定。
［关键词］醉鱼草果实；木犀草素；反相高效液相色谱法
［中图分类号］Ｒ９２７．２　［文献标志码］Ａ　［ＤＯＩ］１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５－７２４６．２０１４．０４．０２８
　　醉鱼草果实药材是马钱科植物醉鱼草（Ｂｕｄ－
ｄｌｅｊａ　ｌｉｎｄｌｅｙａｎａ　Ｆｏｒｔ．）的果实，具有祛风除湿、止
咳化痰、散瘀之功效［１］。本课题组已从中发现并报
道了多种成分及其生物活性［２－５］，包括多种黄酮类成
分，其中木犀草素作为一种常见黄酮，是其抗菌消炎
作用的主要活性成分［６－７］，具有较强的抗炎抗氧化活
性［８］。另外它还具有抗肿瘤、防治心血管疾病以及
保护心肌细胞等多种药理活性［９－１１］。经查阅相关文
献，木犀草素广泛存在于醉鱼草属植物中，前期系统
分离实验也从醉鱼草果实中分离得到木犀草素等多
种黄酮类成分［４］，但醉鱼草果实中木犀草素含量测
定的方法尚未见报道。故笔者参考相关文献［１２－１３］，
采用反相高效液相色谱法建立了醉鱼草果实中木犀
草素含量的测定方法，以期为醉鱼草这一传统药用
资源的系统开发提供参考。
１　仪器与试药
１．１　仪器　高效液相色谱仪：美国 Ａｇｉｌｅｎｔ　１２６０
（二元泵：Ｇ１３１２Ｃ，柱温箱：Ｇ１３１６Ａ，ＤＡＤ检测器：
Ｇ４２１２Ｂ，自动进样器：Ｇ１３２９Ｂ）；ＡＢ１３５－Ｓ十万分之
一分析天平：瑞士 ＭＥＴＴＬＥＲ　ＴＯＬＥＤＯ；ＨＨ－Ｓ恒
温水浴锅：江苏金坛市国胜实验仪器厂；ＦＺ－０２型高
速中药粉碎机：浙江省温岭市百乐粉碎设备厂；
ＡＳ３１２０超声清洗仪：天津奥特塞恩斯；Ｍｉｌｉ－Ｑ一体
式超纯水系统：德国默克密理博。
１．２　 试药　木犀草素：中国药品生物制品检定所，
批号１１１５２０－２００５０４；醉鱼草果实：２００８年１２月采
基金项目：国家自然科学基金项目（８１３７３８４１）；安徽高校省
级自然科学研究重点项目（ＫＪ２０１３Ａ１７０）
作者简介：陈以军（１９７３－），男，主管药剂师
通信作者：吴德玲，ｄｌｗｕ７３７５＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
自安徽舒城万佛山，经安徽中医药大学药学院刘守
金教授鉴定为马钱科植物醉鱼草（Ｂｕｄｄｌｅｊａ　ｌｉｎｄ－
ｌｅｙａｎａ　Ｆｏｒｔ．）的果实；甲醇：色谱纯；水：实验室自制
超纯水；其余试剂为分析纯。
２　方法与结果
２．１　色谱条件与系统适用性试验　色谱柱：Ｗｅｌｃｈ
Ｕｌｔｉｍａｔｅ　ＡＱ－Ｃ１８柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ），流动
相：甲醇－水－乙酸（６０∶４０∶２），流速：１ｍｌ／ｍｉｎ；检测波
长：３５０ｎｍ；柱温：２５℃；进样量：２０μｌ。在本色谱条
件下，木犀草素的理论塔板数大于３　０００，其色谱峰与
共存物质色谱分离度大于１．５。木犀草素（对照品）及
醉鱼草果实（供试品）的高效液相色谱图见图１。
图１　对照品（Ａ）与供试品（Ｂ）溶液的反相高效液相色谱图
２．２　对照品溶液的制备　精密称取在五氧化二磷
减压干燥器中干燥３６ｈ以后的木犀草素对照品
２．１６ｍｇ，加适量甲醇溶解，定容至１００ｍｌ，即得浓
度为２１．６μｇ／ｍｌ的木犀草素对照品溶液。
２．３　供试品溶液的制备　精密称取醉鱼草果实粗
粉１ｇ，加甲醇２０ｍｌ回流提取１ｈ，提取３次，合并
滤液，定容至１００ｍｌ，用微孔滤膜（０．４５μｍ）滤过，
取续滤液，即得供试品溶液。
２．４　方法学考察
２．４．１　线性关系考察：精密吸取“２．２”项下木犀草
素对照品溶液，分别进样２、５、８、１０、１５、２０μｌ，测定
峰面积，以峰面积积分值（ｙ）为纵坐标，木犀草素的
７８
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安徽中医药大学学报 第３３卷 第４期 ２０１４年８月 Ｊ　ＡＮＨＵＩ　ＵＮＩＶ　ＣＨＩＮＥＳＥ　ＭＥＤ　Ｖｏｌ．３３ Ｎｏ．４ Ａｕｇ．２０１４
进样量（ｘ）为横坐标，绘制标准曲线。得木犀草素
线性回归方程为：ｙ＝３　６１０．４ｘ－５．２２，ｒ＝０．９９９　９。
结果表明，木犀草素进样量在０．０４３　２～０．４３２　０μｇ
范围内与峰面积呈良好的线性关系。
２．４．２　精密度试验：精密吸取对照品溶液１０μｌ，重
复进样６次，记录各次木犀草素的峰面积值，ＲＳＤ＝
０．３３％。表明仪器精密度良好。
２．４．３　重复性试验：精密称取醉鱼草粗粉１ｇ，同
“２．３”项下方法制备供试品溶液６份，在拟定的色谱
条件下，进样分析，测定峰面积，计算木犀草素的平均
含量为０．０９６％，ＲＳＤ＝１．２８％。表明重复性良好。
２．４．４　稳定性试验：取供试品溶液，分别在０、２、４、
６、８、１０、１２ｈ测定，记录木犀草素峰面积值，其ＲＳＤ＝
１．１７％。表明样品溶液在１２ｈ内稳定。
２．４．５　加样回收率试验：精密称取已知含量的醉鱼
草果实粗粉１ｇ，共６份，置５０ｍｌ圆底烧瓶中，分别
精密加入与药材含量相当的木犀草素对照品，然后
按“２．３”项步骤的供试品溶液制备方法制备，测定。
结果表明，所建立的分析方法准确度良好。见表１。
表１　加样回收率试验
序号
原含量／
ｍｇ
加样量／
ｍｇ
测得量／
ｍｇ
回收率／
％
平均回收率／
％
ＲＳＤ／
％
１　 ０．９６５　 ０．９７２　 １．９０６　 ９６．８１
２　 ０．９５５　 ０．９７２　 １．９２３　 ９９．５９
３　 ０．９６４　 ０．９７２　 １．９００　 ９６．３０
４　 ０．９６５　 ０．９７２　 １．９２４　 ９８．６６
５　 ０．９５６　 ０．９７２　 １．８９６　 ９６．７１
６　 ０．９６９　 ０．９７２　 １．９４９　１００．８２
９８．１５　 １．８７
２．５　样品含量测定　按“２．３”项下步骤操作，制备
供试品溶液，按“２．１”项下色谱条件，测得供试品中
木犀草素含量为０．０９３％、０．０９５％、０．０９６％，平均
含量为０．０９５％。
３　讨论
本实验中采用二极管阵列检测器，在１９０～４００
ｎｍ波长范围内对供试品及对照品溶液进行光谱扫
描，结果供试品溶液与对照品溶液木犀草素对应峰
的最大吸收波长均为３５０ｎｍ，且基本无干扰，因此
选择３５０ｎｍ作为检测波长。流动相采用甲醇－水系
统，并加入一定比例的乙酸，抑制其拖尾现象，最终
选定流动相为甲醇－水－乙酸（６０∶４０∶２）。此时有良好
的分离度，峰形尖锐，分析时间在２５ｍｉｎ以内。确
定测定条件之后，又对醉鱼草果实样品的提取溶剂
进行考察，分别选取水，不同浓度的乙醇、甲醇、乙酸
乙酯等多种溶剂进行提取，结果发现甲醇回流提取
时，测得木犀草素含量最高。
醉鱼草为民间常用中草药，但其果实研究属于
空白，不利于醉鱼草资源的综合开发。本研究通过
高效液相色谱法建立了醉鱼草果实中木犀草素的含
量测定方法，结果显示该方法简便、快速、结果可靠、
稳定、重现性好，为醉鱼草果实中黄酮类成分的研究
提供了参考依据。由醉鱼草果实的高效液相色谱图
可知，木犀草素之前的色谱峰对应成分含量较高，且
极性比木犀草素大。由于本实验所选波长主要是为
了检测黄酮类成分，故推测其对应成分可能为黄酮
苷类化合物。故本实验对醉鱼草果实的系统分离工
作也具有一定的指导意义。
参考文献：
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技术出版社，１９８６：１１２８－１１２９．
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ｔｈｅ　ｆｒｕｉｔｓ　ｏｆ　Ｂｕｄｄｌｅｊａ　ｌｉｎｄｌｅｙａｎａ　ｗｉｔｈ　ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｅｃｔ
［Ｊ］．Ｊ　Ａｓｉａｎ　Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ　Ｒｅｓ，２０１２，１４（４）：３４２－３４７．
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［５］吴德玲，汪洋奎，刘劲松．醉鱼草果实的化学成分研究：
Ⅱ［Ｊ］．中成药，２０１１，３３（１２）：２１０７－２１０９．
［６］詹寿发，陈晔，樊有赋．醉鱼草的化学成分与生物活性
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［７］张毅，王旭光，杨展，等．木犀草素体内抗炎作用机制研
究［Ｊ］．广东医学院学报，２００９，２７（６）：６０６－６０９．
［８］黄丰，朱苗苗，邓华明，等．木犀草素对脂多糖诱导的小
胶质细胞炎性反应的抑制作用［Ｊ］．中药材，２０１１，３４
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ｎａｓｅ　ａｎｄ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｆａｃｔｏｒ－κＢ　ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　ＨｅｐＧ２ｈｅｐａｔｏ－
ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｍｏｌ　Ｍｅｄ，２０１１，２８（１）：２５－３１．
［１０］Ｚｈｕ　ＤＱ，Ｌｉｕ　Ｋ，Ｓｏｎｇ　ＪＮ，ｅｔ　ａｌ．Ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ｒｅｓｔｏｒｅｓ　ｌｙ－
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ｐｅｎｄｅｎｔ　ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｒａｔ　ａｏｒｔａ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎ－
ｆｌａｍｍａｔｉｏｎ－ｌｉｋｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｉｎ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｊ
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醋炙香附中木犀草素的含量［Ｊ］．中国实验方剂学杂
志，２０１１，１７（１）：５６－５８．
（收稿日期：２０１３－１１－１０）
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安徽中医药大学学报 第３３卷 第４期 ２０１４年８月 Ｊ　ＡＮＨＵＩ　ＵＮＩＶ　ＣＨＩＮＥＳＥ　ＭＥＤ　Ｖｏｌ．３３ Ｎｏ．４ Ａｕｇ．２０１４
天仙子及其混伪品的微性状鉴别
杨青山１，吴秋芳１，姚　强１，周建理１，谢冬梅１，孟祥松２
（１．安徽中医药大学药学院，安徽 合肥　２３００３１；２．亳州市食品药品检验所，安徽 亳州　２３６８００）
［摘要］目的　对天仙子及其混伪品进行鉴别。方法　查阅文献，在明确天仙子及其混伪品种类的基础上，应
用中药微性状鉴定法对其进行鉴别研究。结果　天仙子及其混伪品呈现不同的微性状特征，在性状、大小、
色泽、表面光滑程度、表面附属物等方面有较明显的区别。结论　利用中药微性状鉴定法可以对天仙子及其
混伪品进行鉴别。
［关键词］天仙子；混伪品；微性状鉴别
［中图分类号］Ｒ２８２．５　［文献标志码］Ａ　［ＤＯＩ］１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５－７２４６．２０１４．０４．０２９
　　中药天仙子来源于茄科植物莨菪 Ｈｙｏｓｃｙａｍｕｓ
ｎｉｇｅｒ　Ｌｉｎｎ．的干燥成熟种子［１］，以“莨菪子”之名最
早收载于《神农本草经》［２］。味苦、辛，性温，有大毒；
具有解痉止痛、安惊定痫的功效；常用于治疗多种原
因引起的脘腹痛、风湿痹痛、跌打肿痛、牙痛，在治疗
年久喘咳方面效果也较好，还可用于治疗癫狂、惊痫
以及疮痈肿毒等。由于天仙子为细小种子类中药，
肉眼很难对其形态进行准确辨认，且不易与其形态
相似的种子进行区别，所以市场上流通的天仙子药
材中往往存在各种掺伪的现象。目前已有学者［３－９］
对天仙子与其混伪品进行了鉴别研究，已报道的伪
基金项目：国家自然科学基金项目（８１３０３１７７）；安徽中医药
大学青年科研基金项目（２０１２ｑｎ０１８）
作者简介：杨青山（１９８５－），男，硕士，助教
品有麦瓶草子、水蓑衣子、菟丝子、地肤子、楮实子和
补骨脂，但缺乏详细的佐证资料。此外，笔者在市场
抽样调查中发现茄科植物假酸浆 Ｎｉｃａｎｄｒａ　ｐｈｙｓ－
ａｌｏｄｅｓ（Ｌｉｎｎ．）Ｇａｅｒｔｈｅｒ的种子，市场上俗称大千
生子也往往掺入其中。基于此，本研究利用微性状
鉴别法对天仙子及其混伪品进行鉴别研究，在给出
微性状鉴别特征图片的同时总结出相应的微性状鉴
别要点。微性状鉴别法具有操作方法简单、鉴别特
征明确、鉴别特征可长久保存的优点［１０］，可为临床
应用正品天仙子药材提供一种可靠的鉴别方法。
１　材料和仪器
１．１　实验材料　天仙子、大千生子、麦瓶草子、水蓑
衣子、菟丝子、地肤子、楮实子和补骨脂，所有实验材
料（见表１）均经安徽中医药大学生药系周建理教授
鉴定。
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ｉｎ　Ｆｒｕｉｔ　ｏｆ　Ｂｕｄｄｌｅｊａ　ｌｉｎｄｌｅｙａｎａ　Ｆｏｒｔ．Ｂｙ　Ｒｅｖｅｒｓｅ
Ｐｈａｓｅ－Ｈｉｇｈ　Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＣＨＥＮ　Ｙｉ－ｊｕｎ１，２，ＲＥＮ　Ｙａ－ｓｈｕｏ２，３，ＷＵ　Ｄｅ－ｌｉｎｇ２，４，ＺＨＡＮＧ　Ｗｅｉ２，３，ＷＡＮＧ　Ｔｉａｎ－ｍｉｎｇ２，４
（１．Ｌｕａｎ　Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ａｎｈｕｉ　Ｌｕａｎ　２３７００１，Ｃｈｉｎａ；２．Ａｎｈｕｉ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｍｏｄｅｒｎ　Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅ　Ｍａｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｉｃａ，Ａｎｈｕｉ　Ｈｅｆｅｉ　２３００３８，Ｃｈｉｎａ；３．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ａｎｈｕｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｎｈｕｉ　Ｈｅｆｅｉ　２３００３８，Ｃｈｉｎａ；４．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ａｎｈｕｉ　Ｕｎｉｖｅｒ－
ｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｎｈｕｉ　Ｈｅｆｅｉ　２３００３８，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｒｕｉｔ　ｏｆ　Ｂｕｄｄｌｅｊａ　ｌｉｎｄ－
ｌｅｙａｎａ　Ｆｏｒｔ　ｂｙ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｐｈａｓｅ－ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＲＰ－ＨＰＬＣ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＲＰ－ＨＰＬＣ　ｗａｓ　ｃａｒ－
ｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｏｎ　ａ　Ｗｅｌｃｈ　Ｕｌｔｉｍａｔｅ　ＡＱ－Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ　ｗｉｔｈ　ａ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｏｆ　ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｗａｔｅｒ－ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ（６０∶４０∶２）ａｔ
ａ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　１．０ｍｌ／ｍｉｎ，ａ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　３５０ｎｍ，ａｎｄ　ａ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　２５ ℃．
Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ｓｈｏｗｅｄ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ
０．０４３　２－０．４３２　０μｇ（ｒ＝０．９９９　９）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　９８．１５％，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉ－
ａｔｉｏｎ　ｗａｓ　１．８７％（ｎ＝６）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｉｓ　ＲＰ－ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｅｆｉｃｉｅｎｔ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ｒｅｌｉａｂｌｅ，
ａｎｄ　ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ　ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｒｕｉｔ　ｏｆ　Ｂｕｄｄｌｅｊａ　ｌｉｎｄｌｅｙａｎａ　Ｆｏｒｔ．
［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］ｆｒｕｉｔ　ｏｆ　Ｂｕｄｄｌｅｊａ　ｌｉｎｄｌｅｙａｎａ　Ｆｏｒｔ．；ｌｕｔｅｏｌｉｎ；ｒｅｖｅｒｓｅ　ｐｈａｓｅ－ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
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