全 文 ：高效液相色谱 －四通道紫外可见检测法测定五加皮中原儿茶酸含量
陈 芳1，冯丽娟2 (1．江汉大学化学与环境工程学院，湖北武汉 430056;2．遵义医学院珠海校区生物工程系，广东珠海 519041)
摘要 ［目的］建立五加皮中原儿茶酸的含量测定方法。［方法］采用高效液相色谱 －四通道紫外可见检测法，以 ODSC18(柱长 250 mm，
内径 4． 6 mm，涂布厚度 5 μm)为色谱柱，流动相为甲醇∶磷酸二氢钠缓冲溶液(浓度 0． 1 mol /L)= 15∶85，pH = 2． 5，测定五加皮中原儿茶
酸的含量。四通道紫外检测的定性检测波长分别为 245、260、275、290 nm;定量检测波长为 260 nm。［结果］原儿茶酸在 0． 5 ～ 6． 0 mg /L
范围内线性关系良好(r =0． 999 9)，平均回收率为 99． 87%，RSD为 2． 11%。［结论］该方法测定结果可靠，稳定易行，重复性好，可用于
五加皮中原儿茶酸的含量测定。
关键词 高效液相色谱法;四通道紫外可见检测法;五加皮(CORTEX ACAN THOPANACIS);原儿茶酸
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2011)26 －15950 －15951
Determination of Protocatechuic Acid in CORTEX ACANTHOPANACIS Using High Proficiency Liquid Chromatography Coupled with
Four-channel UV-visible Detector
CHEN Fang et al (Department of Chemistry and Environmental Engineering，Jianghan University，Wuhan，Hubei 430056)
Abstract ［Objective］To established a quantitative method of determination of protocatechuic acid in cortex acanthopanacis radicis．［Method］
High proficiency liquid chromatography (HPLC)coupled with four-channel UV-visible detector was used，C18 chromatographic column，mobile
phase was the buffer solution of methanol and sodium dihydrogen phosphate(0． 1 mol /L)，the volume ratio of methanol and sodium dihydrogen
phosphate was 15∶85，pH =2． 5． Qualitative evaluation was done by retention time and four-channel UV spectrum at the same time，and the detec-
tion wavelength were 245 nm，260 nm，275 nm，290 nm． Selected the best sensitive wave of 260 nm to make quantitative evaluation． Result:The
linearity of protocatechuic acid was in the range of 0． 5 －6． 0 ml /L(r =0． 999 9)，the average recovery was 99． 87%，the RSD was 2． 11% ．［Con-
clusion］The method is reliable，and can be used for quality control of cortex acanthopanacis radicis．
Key words High proficiency liquid chromatography (HPLC);Four-channel UV-visible detector;CORTEX ACANTHOPANACIS RADICIS;Pro-
tocatechuic acid
作者简介 陈芳(1978 －)，女，湖北武汉人，硕士，试验师，从事分析
测试研究，E-mail:jdcf886@ sohu． com。。
收稿日期 2011-06-10
五加皮(CORTEX ACAN THOPANACIS)是一种常用的
中草药，可以祛风湿，补肝肾，强筋骨，用于风湿痹痛，筋骨痿
软，小儿行迟，体虚乏力，水肿，脚气等症，也是滋补强身的佳
品［1］。原儿茶酸(3，4-二羟基苯甲酸，protocatechunic acid)是
五加皮的重要活性成分之一［2］，具有抗菌、祛痰、平喘作
用［3 －4］，亦具有减慢心率，显著降低心肌耗氧量，提高心肌耐
氧能力等药理作用，并且对乙肝病毒的脱氧核糖核酸(DNA)
复制有较强的抑制作用等［5］。但至今未见五加皮中原儿茶
酸含量的质量控制检测方法。为此，试验进行了高效液相色
谱 －四通道紫外检测法检测五加皮中原儿茶酸含量的研究，
以期为控制五加皮药材的质量提供科学依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。中药五加皮(Cortex Acan thopanacis Graci-
listyli) ，购买自中药店，批号分别是 20081001、20081101、
20081201、20090101、20090201、20090301、20090401、20090501。
1． 1． 2 主要试剂。甲醇，色谱纯，批号为 040518，由国药集
团化学试剂有限公司生产。原儿茶酸对照品，购于中国药品
生物制品检测所，纯度为 99． 2%。
1． 1． 3 主要仪器。由美国戴安公司生产的 SUMMIT高效液
相色谱仪，配有:P680A LPG-4 高压泵;UVD 170U 四通道紫
外 －可见检测器;TCC-100 色谱柱温箱;UV2401(PC)S 紫外
－可见分光光度计;索氏提取器。
1． 2 方法。
1． 2． 1 色谱条件。色谱柱为 ODSC18分析柱(柱长 250 mm，
内径 4． 6 mm，涂布厚度 5 μm) ;流动相为无水甲醇 －缓冲溶
液(15∶85，V /V，缓冲溶液为浓度 0． 1 mol /L的磷酸二氢钠缓
冲溶液，用磷酸调 pH为 2． 5) ;流动相流速为 1． 0 ml /min;色
谱柱温度为 30 ℃;检测波长分别为 245、260、275、290 nm。
1． 2． 2 对照品溶液的制备。取原儿茶酸对照品适量，精密
称定，加无水甲醇制成每 1 ml约含 10 mg的溶液，即得。
1． 2． 3 供试品溶液的制备。索氏提取法［6］。将五加皮捣
碎、烘干，精确称取适量放入索氏提取器中，加入 100 ml浓度
70%乙醇，90 ℃加热提取 6 h。将回流液放入恒温水浴锅中
水浴至乙醇挥干。过滤，并用适量纯水洗涤，合并滤液和洗
液。再用乙酸乙酯溶液萃取 3 次，每次 20 ml。合并萃取液，
挥干溶剂，残渣用无水甲醇溶解并定容至 10 ml容量瓶中，即
得样品溶液。
1． 2． 4 线性关系的考察。对照品溶液稀释 100 倍后，分别
精密量取0． 5、1． 0、2． 0、4． 0、6． 0 ml，置100 ml量瓶中，加无水
甲醇至刻度，摇匀。分别取上述对照品溶液适量，注入液相
色谱仪，按上述色谱条件测定，记录 260 nm处的峰高。以峰
高为纵坐标，原儿茶酸的浓度(mg /L)为横坐标，绘制标准曲
线，计算回归方程。
1． 2． 5 稳定性试验。分别于 0、2、4、6、8、12、24 h，精密吸取
上述供试品溶液适量，注入液相色谱仪，依法测定，记录
260 nm处峰高平均值。
1． 2． 6 重复性试验。按上述供试品溶液制备方法，称取同
一批次的样品约 4 g，共 8份，分别进行测定。
1． 2． 7 回收率试验。采取加样回收法，取已知含量的同一
批次(批号20090501)的样品约4． 0 g，6份，精密称定，分别精
密加入 2． 8 ml原儿茶酸对照品溶液(10． 0 g /L) ，按“1． 2． 3”
项下方法制备供试品溶液，精密吸取上述供试品溶液适量，
注入液相色谱仪，依法测定。
1． 2． 8 样品测定。分别称取五加皮约 4． 0 g，精密称定，按
责任编辑 石金友 责任校对 况玲玲安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2011，39(26):15950 － 15951
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.26.111
“1． 2． 3”项下方法制备各供试品溶液，精密吸取各供试品溶
液，注入液相色谱仪中，依法测定。
2 结果与分析
2． 1 方法学考察
2． 1． 1 线性关系的考察。得到线性回归方程为:Y =
1． 488 5X +0． 283 8，(r = 0． 999 9，n = 5)。表明原儿茶酸在
0． 5 ～6． 0 mg /L呈良好的线性关系。在选定的条件下，原儿
茶酸的最低检出浓度为 0． 113 mg /L。
2． 1． 2 稳定性试验。通过计算得到 260 nm 处峰高平均值
为 4． 407，RSD为 1． 2%。说明原儿茶酸在 24 h内稳定。
2． 1． 3 重复性试验。测得供试品中原儿茶酸的平均含量为
6． 931 4 mg /kg，RSD为1． 1%。表明供试品溶液的重复性良好。
2． 1． 4 回收率试验。试验结果表明，原儿茶酸的加样回收
率计算回收率为 99． 87%，RSD为 2． 11%。说明该方法准确、
可靠，可用于五加皮中原儿茶酸的含量测定。
2． 2 样品含量测定 样品五加皮溶液含原儿茶酸浓度为
2． 77 mg /L，则五加皮中原儿茶酸含量为 6． 931 4 g /kg。
3 结论与讨论
3． 1 流动相及浓度的选择 对于反相高效液相色谱分析，
由于原儿茶酸为有机酸，试验选用酸性的缓冲溶液，使其部
分在缓冲溶液中呈中性的分子状态，并且 pH越低，中性分子
的比例越高，与非极性固定相的亲和力越强，保留时间越长。
对于 pKa不同的有机酸，在 pH值相同的条件下，中性分子所
含的比例不同，pKa 大的中性分子所含的比例较大，保留时
间较长。所以不同 pKa的有机酸能得到较好的分离。因此，
该试验选用浓度为 0． 1 mol /L的磷酸二氢钠溶液作为缓冲溶
液。通过反复试验发现，在 pH =2． 5的条件下，当甲醇∶缓冲
溶液为 15∶85时，原儿茶酸的保留时间较长，为 14． 5 min，能
与其他有机酸较好地分离，且色谱峰峰形较好，故选此条件。
3． 2 原儿茶酸的定性、检测器和检测波长的选择 戴安
UVD 170U紫外可见检测器是一种四波长检测器，用这种检
测器可以得到被分离组分 4 个波长段的紫外可见光谱图。
只要这 4个波长选择适当，结合保留时间进行定性分析，结
果十分可靠。因为在相同的色谱条件下，保留时间相同，且
这 4个波长的吸光度的比例也相同的情况是极少的。
结合原儿茶酸标准溶液在紫外可见光谱仪上扫描的紫
外吸收情况，选择 245、260、275、290 nm这 4个波长作为检测
波长。用这 4个波长结合保留时间对原儿茶酸进行定性分
析。又由于波长 260 nm处紫外吸收相对最强，为了提高原
儿茶酸检测灵敏度，故选用 260 nm处进行定量分析。
3． 3 试验测定方法的选择 试验首次建立了高效液相色谱
－四通道紫外检测法联用测定五加皮药材中原儿茶酸含量
的方法，为研究中草药原儿茶酸的定性和定量分析提供了一
种准确有效的方法，这也为五加皮药材的质量控制提供依
据。此外，试验应用反相键合相色谱法，以无机盐缓冲溶液
为主体，加入能与水混溶的有机溶剂(甲醇)共同调节，并可
根据分离需要，加入磷酸调节极性来调节洗脱能力，为中草
药中复杂成分的分离提供了一个途径。
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可以为海南地区有关白木香叶药理学的研究、药材开发、药
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