全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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［责任编辑 顾雪竹］
［收稿日期］ 20120421(004)
［基金项目］ 贵阳市科技局现代药业计划项目(筑科合同［2011204］13 号) ;贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目［黔省专合字
(2011)80 号］
［通讯作者］ * 张丽艳，教授，从事中药、民族药质量控制及新药研究，Tel:13984870641，E-mail:zly1964@ 163． com
黔产苗药石吊兰的 HPLC指纹图谱研究
谭家华1，张丽艳2* ，徐昌艳2，黄健2，汪毅2，杨玉琴2
(1. 贵阳中医学院第一附属医院，贵阳 550002;2. 贵阳中医学院，贵阳 550002)
［摘要］ 目的:建立黔产苗药石吊兰的 HPLC指纹图谱，比较了贵州不同产地石吊兰的差异，为科学评价石吊兰的质量
提供参考依据。方法:采用 HPLC 法，Agilent Zorbax SB-C18柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，乙腈-0. 05%磷酸水为流动相梯度洗
脱，流速 1. 0 mL·min －1，柱温 30 ℃，检测波长 334 nm。结果:建立了黔产石吊兰药材的 HPLC指纹图谱，并对 12 批样品的相似
度进行了比较，标定了 15 个共有峰;贵州不同产地石吊兰的主成分组成基本相同，但各组分的含量有较大的差异。结论:所建
立的方法简便，重复性良好，特征性强，可用于黔产石吊兰的 HPLC指纹图谱测定，并可为其今后规范药材资源及质量评价提
供科学依据。
［关键词］ 苗药;石吊兰;高效液相色谱;指纹图谱
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)11-0108-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013110108
Study on HPLC Fingerprint of the
Miao Medicine Lysionotus pauciflorus from Guizhou
TAN Jia-hua1，ZHANG Li-yan2* ，XU Chang-yan2，HUANG Jian2，WANG Yi2，YANG Yu-qin2
(1. The First Affiliated Hospital of Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China;
2. Guiyang College of Chinese Traditional Medicine，Guiyang 550002，China)
［Abstract］ Objective:To establish the HPLC fingerprint of Lysionotus pauciflorus from Guizhou，and to
compare the difference of L． pauciflorus，so as to provide scientific basis for quality evaluation of L． pauciflorus．
Method:HPLC analysis was performed on a Agilent Zorbax SB-C18 column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm)with the
eluting system of gradient consisted of acetonitrile-0. 05% H3PO4. The flow rate was 1. 0 mL·min
－1 ． The column
temperature was maintained at 30 ℃ and the detection wavelength was set at 334 nm． Result:The HPLC
fingerprint was established and compared by 12 batch of samples similarity with 15 common peaks． The main
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第 19 卷第 11 期
2013 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 11
Jun．，2013
composition of different origin samples is basically the same． But there is large difference between each component．
Conclusion:This method is reliable and repeatable，it can be used to determine HPLC fingerprint in different
origin L． pauciflorus from Guizhou． And it helps to regulate the quality of medical resources and provide scientific
basis in the future．
［Key words］ Miao medicine;Lysionotus pauciflorus;HPLC;fingerprint
石吊兰为苦苣苔科植物吊石苣苔的全草［1］。
又称为岩豇豆、岩泽兰、石豇豆;苗族药名为 Cherb
nex jenl vieeb (肝努尽烟)［2］。具有化痰止咳，软坚
散结之功;临床用于咳嗽痰多，瘰劳痰核［3］。石吊
兰始见于《植物名实图考》，现被 2010 年版《中国药
典》(一部)、2003 年版《贵州省中药材、民族药质量
标准》收载。主要分布于贵州、云南、江西、湖南、湖
北、台湾、浙江、江苏、四川、广西、广东等省区，其中
贵州全省均有分布，生于海拔 300 ～ 2 000 m 的丘陵
或山地林中石上或树上［4］。目前，石吊兰是我省
“岩果止咳蜜”、“马兰感寒胶囊”、“咳康含片”等制
剂的主要原料药材。色谱指纹图谱技术由于其所特
有的整体性和模糊性，非常适用于具有复杂成分的
中药化学成分的分析［5］。石吊兰质量控制研究中，
现行质量标准仅以石吊兰素作为含量测定指标，文
献报道仅对其中石吊兰素［6-7］、总黄酮［8］等单一或
一类成分进行含量测定，并未见其 HPLC 指纹图谱
研究的相关报道。本实验采用 HPLC建立贵州地区
不同产地石吊兰药材的指纹图谱，并对 12 批样品进
行相似度比较，旨在进一步完善石吊兰药材的质量
控制方法，并为今后规范该药材资源及质量评价提
供依据。
1 材料
Agilent 1260 型高效液相色谱仪(DAD 检测
器) ，AG135 电子天平(梅特勒-托利多公司) ，CH-
250 型超声波清洗机(天津恒奥科技公司，功率
250 W，频率 33 kHz) ，101-2AB 型电热鼓风干燥箱
(天津泰斯特仪器公司)。
石吊兰素(批号 111555-200602)、芦丁(批号
100080-200707)、阿魏酸(批号 110773-200611)等对
照品均购于中国药品生物制品检定所，供含量测定
用。甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为
娃哈哈纯净水。12 批石吊兰药材均自采于贵州各
地，经贵阳中医学院魏升华副教授鉴定为苦苣苔科
植物吊石苣苔 Lysionotus pauciflorus Maxim． 的全草。
样品来源见表 1。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4. 6
表 1 石吊兰药材来源
No． 来源地 No． 来源地
S1 贵州纳雍 S7 贵州凯里炉山
S2 贵州铜仁松桃 S8 贵州六枝
S3 贵州盘县珠东 S9 贵州普安县地瓜镇
S4 贵州贵阳花溪 S10 贵州黔南龙里县
S5 贵州毕节黔西 S11 贵州清镇
S6 贵州施秉县城关镇 S12 贵州黔南荔波
mm ×250 mm，5 μm) ，乙腈(A)-0. 05%磷酸水(B)
为流动相，梯度洗脱:0 ～ 80 min，10% ～ 48% A，流
速 1. 0 mL·min －1，柱温 30 ℃，进样量 10 μL，检测波
长 334 nm。
2. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取干燥至恒
重的石吊兰素、芦丁、阿魏酸等对照品适量，分别加
甲醇制成 0. 072 6，0. 251 0，0. 004 9 g·L －1的对照品
溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取干燥至恒重的样品粉
末(过 60 目筛)约 0. 5 g，精密称定，置 100 mL 具塞
锥形瓶中，加 75%甲醇 25 mL，称重，超声 20 min，放
冷，称重，补足减失的质量，滤过，取续滤液适量，以
0. 45 μm微孔滤膜滤过，即得。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 精密度试验 取同一供试品溶液，连续进样
6 次，按 2. 1 项下色谱条件进行测定，以石吊兰素为
参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面
积，各共有峰的相对保留时间的 RSD 0. 036% ～
0. 102%，相对峰面积的 RSD 0. 119% ～ 1. 508%，表
明仪器的精密度良好。
2. 4. 2 重复性试验 分别取同一样品，按 2. 3 项下
方法制备 6 份供试品溶液，按 2. 1 项下色谱条件进
行测定，以石吊兰素为参照峰，计算各共有峰的相对
保留时间及相对峰面积，各共有峰的相对保留时间
的 RSD 0. 032 3% ～ 0. 472%，相对峰面积的 RSD
0. 483% ～2. 017%，表明该方法的重复性良好。
2. 4. 3 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于
0，6，9，15，21，24 h 进样，按 2. 1 项下色谱条件进行
测定，以石吊兰素为参照峰，计算各共有峰的相对保
留时间及相对峰面积，各共有峰的相对保留时间的
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张丽艳，等:黔产苗药石吊兰的 HPLC指纹图谱研究
RSD 0. 037% ～ 0. 448%，相 对 峰 面 积 的 RSD
0. 317% ～ 2. 894%，表明供试品溶液在 24 h 内
稳定。
2. 5 黔产石吊兰的 HPLC指纹图谱分析
2. 5. 1 参照特征峰的标定 分别将 12 批石吊兰样
品按 2. 3 项下方法制备供试品溶液，按 2. 1 项下色
谱条件测定，获得贵州不同产地石吊兰的 HPLC 指
纹图谱叠加图(图 1)和共有模式图(图 2)。从图 2
可见，12 批黔产石吊兰样品中有 15 个共有峰，通过
与对照品比对，考察对照品保留时间，鉴别了石吊兰
药材的 HPLC指纹图谱中的芦丁、阿魏酸、石吊兰素
等 3 个成分，其中 15 号共有峰为石吊兰素峰，分离
度良好，峰面积相对较大、较稳定，选作参照峰。
表 2 12 批样品共有峰的相对保留时间
峰号
相对保留时间
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12
RSD
/%
1 0. 134 0. 134 0. 134 0. 134 0. 134 0. 134 0. 134 0. 134 0. 134 0. 135 0. 134 0. 134 0. 126
2 0. 186 0. 186 0. 185 0. 185 0. 186 0. 186 0. 186 0. 185 0. 185 0. 186 0. 186 0. 186 0. 271
3 0. 203 0. 203 0. 203 0. 203 0. 203 0. 203 0. 203 0. 203 0. 203 0. 204 0. 203 0. 204 0. 115
4 0. 256 0. 256 0. 256 0. 257 0. 256 0. 256 0. 257 0. 256 0. 256 0. 258 0. 257 0. 257 0. 222
5 0. 274 0. 274 0. 274 0. 274 0. 274 0. 274 0. 274 0. 274 0. 274 0. 274 0. 274 0. 274 0. 086
6 0. 287 0. 287 0. 287 0. 286 0. 287 0. 286 0. 286 0. 286 0. 288 0. 288 0. 287 0. 287 0. 197
7 0. 297 0. 298 0. 298 0. 297 0. 298 0. 297 0. 297 0. 297 0. 297 0. 297 0. 297 0. 297 0. 096
8 0. 311 0. 311 0. 311 0. 310 0. 311 0. 310 0. 310 0. 310 0. 310 0. 310 0. 310 0. 311 0. 112
9 0. 334 0. 334 0. 334 0. 334 0. 334 0. 336 0. 336 0. 334 0. 334 0. 334 0. 334 0. 336 0. 261
10 0. 342 0. 343 0. 343 0. 342 0. 342 0. 342 0. 342 0. 342 0. 342 0. 342 0. 342 0. 342 0. 090
11 0. 359 0. 359 0. 359 0. 358 0. 359 0. 359 0. 359 0. 358 0. 358 0. 359 0. 359 0. 359 0. 098
12 0. 467 0. 467 0. 467 0. 466 0. 467 0. 467 0. 467 0. 467 0. 467 0. 467 0. 467 0. 467 0. 044
13 0. 553 0. 553 0. 553 0. 552 0. 553 0. 553 0. 553 0. 553 0. 553 0. 553 0. 553 0. 553 0. 031
14 0. 728 0. 728 0. 728 0. 715 0. 728 0. 727 0. 728 0. 728 0. 727 0. 728 0. 728 0. 728 0. 495
15 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0
图 1 12 批样品的 HPLC指纹图谱叠加
7．芦丁;8．阿魏酸;15．石吊兰素
图 2 石吊兰药材的共有模式
2. 5. 2 相似度评价 运用国家药典委员会推荐的
中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A 版)对
12 批石吊兰的 HPLC 特征图谱进行相似度分析，以
样品 S4 的图谱为参照图谱，采用中位数矢量计算得
出石吊兰样品的共有模式图谱，进行全谱的相似度
评价，12 批黔产石吊兰的相似度分别为 S1
(0. 941) ，S2(0. 950) ，S3(0. 909) ，S4(0. 972) ，S5
(0. 806) ，S6(0. 867) ，S7(0. 895) ，S8(0. 807) ，S9
(0. 792) ，S10(0. 612) ，S11(0. 640) ，S12(0. 465)。
从相似度分析结果看，不同产地石吊兰的质量差异
较大，推测其化学成分及含量可能受生长环境的影
响较大，提示固定的产地来源能保证虎耳草药材及
其制剂的质量稳定。
2. 5. 3 共有峰的相对保留时间、相对峰面积 采用
相对保留时间标定共有峰，即将各色谱图的保留时间
和峰面积分别与同一色谱图中 15 号参照峰的保留时
间和峰面积进行比较，其比值即为各样品图谱中共有
峰的相对保留时间及相对峰面积，结果见表 2，3。
3 讨论
分别比较以水，25%甲醇，50%甲醇，75%甲醇，
甲醇，75%乙醇等提取溶剂，加热回流、超声的提取
方法，及超声 10，20，30，40 min 的提取时间，考察了
峰数、峰面积、分离度等因素，结果以 75%甲醇超声
20 min效果较好，色谱峰较多且达到基线分离，色谱
图信息丰富。
比较了 Hypersil C18柱、Diamensil C18柱、Agilent
Zorbax C18柱等色谱柱，结果表明 Agilent Zorbax C18
柱在石吊兰化学成分的线性梯度洗脱中，具有柱效
高、分离度好、重复性好等特点，比较适用于黔产石
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第 19 卷第 11 期
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 11
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表 3 12 批样品共有峰的相对峰面积
峰号
相对峰面积
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12
RSD
/%
1 0. 150 0. 247 0. 134 1. 515 0. 989 0. 024 0. 050 0. 791 0. 037 0. 021 0. 969 0. 091 121. 777
2 0. 018 0. 038 0. 028 0. 045 0. 013 0. 060 0. 097 0. 022 0. 013 0. 036 0. 039 0. 127 78. 012
3 0. 020 0. 016 0. 040 0. 232 0. 010 0. 019 0. 054 0. 030 0. 017 0. 199 0. 096 0. 050 113. 941
4 0. 025 0. 054 0. 028 0. 156 0. 063 0. 202 0. 299 0. 068 0. 026 0. 103 0. 045 0. 634 124. 210
5 0. 177 0. 853 0. 121 0. 885 0. 598 0. 442 0. 821 0. 228 0. 024 0. 781 1. 057 11. 482 218. 181
6 0. 034 0. 248 0. 037 0. 314 0. 090 0. 117 0. 133 0. 059 0. 029 0. 197 0. 385 0. 402 80. 344
7 0. 303 0. 577 0. 149 5. 323 0. 875 0. 087 0. 415 0. 786 0. 040 6. 753 7. 488 1. 870 135. 085
8 0. 036 0. 090 0. 018 0. 226 0. 111 0. 053 0. 145 0. 059 0. 008 0. 274 0. 508 1. 530 167. 100
9 0. 181 0. 265 0. 187 2. 467 1. 540 0. 129 0. 181 1. 187 0. 070 1. 611 3. 354 0. 345 113. 137
10 0. 002 0. 011 0. 002 0. 463 0. 035 0. 005 0. 032 0. 026 0. 003 0. 200 0. 128 0. 100 160. 392
11 0. 006 0. 068 0. 033 0. 096 0. 015 0. 014 0. 017 0. 038 0. 033 0. 095 0. 128 0. 042 80. 415
12 0. 104 0. 463 0. 233 0. 055 0. 262 0. 037 0. 096 0. 203 0. 025 0. 505 1. 036 0. 826 102. 336
13 0. 078 0. 323 0. 114 0. 406 0. 493 0. 041 0. 105 0. 303 0. 019 0. 825 1. 131 1. 073 97. 201
14 0. 014 0. 091 0. 028 0. 046 0. 017 0. 041 0. 025 0. 019 0. 031 0. 044 0. 019 0. 105 73. 296
15 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0
吊兰的 HPLC指纹图谱研究。
分别采用甲醇-水，乙腈-水，乙腈-0. 05%甲酸水
溶液，乙腈-0. 05%三乙胺水溶液，乙腈-0. 05%磷酸
水溶液 5 种流动相，考察了 25，30，35，40 ℃等柱温
及流速为 0. 8，1. 0，1. 2 mL·min －1等，结果以乙腈-
0. 05%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，柱温 30
℃，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 334 nm 时，色谱
峰较多且达到基线分离，峰型对称，分离效果较好，
谱图整体较为理想。
在同样的色谱条件下，通过石吊兰素、芦丁、阿
魏酸、槲皮苷、β-谷甾醇、咖啡酸、熊果酸等对照品比
对，鉴别了所建立黔产石吊兰的 HPLC 指纹图谱中
芦丁、阿魏酸、石吊兰素等 3 个成分峰。
据文献报道，石吊兰素为石吊兰的主要有效成
分之一，其在石吊兰的 HPLC 特征图谱中出峰时间
约为 68. 5 min，此峰分离度好、峰形好、稳定，且是现
行质量标准中仅有的 1 个含量测定指标。因此，选
择石吊兰素峰作为石吊兰的 HPLC 指纹图谱的参
照峰。
由图 2 可见，各色谱峰分离效果较好，且所建立
的方法具有良好的精密度、重复性、稳定性，可用于
石吊兰药材的质量控制并评价。今后进一步对石吊
兰的生长环境进行考察，以保证石吊兰的 HPLC 指
纹图谱良好的特征性和代表性，并为石吊兰药材的
GAP基地建设奠定基础，保障石吊兰药材及其制剂
质量稳定。
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［责任编辑 顾雪竹］
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张丽艳，等:黔产苗药石吊兰的 HPLC指纹图谱研究