全 文 ：高效液相色谱法测定石吊兰中石吊兰素的含量
盛卫国 , 　熊　阳 , 　徐莲英
(上海中医药大学中药学院 ,上海 201203)
收稿日期:2008-02-17
作者简介:盛卫国(1972-),男 ,博士研究生 ,研究方向:中药制剂新剂型与新技术。 Tel:(021)51322685E-mail:ss3215@sina.com
关键词:石吊兰;石吊兰素;高效液相色谱法
中图分类号:R284.1　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2009)02-0321-02
　　石吊兰为苦苣苔科(Gesneriaceae)吊石苣苔属植物吊石
苣苔(LyeicnotuspauciflorusMaxim.)的全草 , 始载于《植物名
实图考》石草类 ,功能祛痰止咳 , 清热利湿 ,活血调经。主治
肺热咳嗽 , 支气管炎 ,痢疾 , 钩端螺旋体病 ,风湿痹痛 ,跌打损
伤等 [ 1] 。全草含石吊兰素(nevadensin)、石吊兰素糖苷类 、马
鞭草新苷 、二十九烷醇 、正三十烷醇 、β-谷甾醇 、熊果酸等成
分 [ 2-4] 。其脂溶性成分石吊兰素为 5, 7-二羟基-4′, 6, 8-三甲
氧基黄酮 , 是具有抗结核杆菌作用的母核结构 , 有显著的抗
结核杆菌的作用 , 是临床用于治疗结核病的有效成分 [ 5-9] 。
本文用反相高效液相色谱法 , 以甲醇-1%醋酸为流动相 , 梯
度洗脱 , 建立了石吊兰药材中石吊兰素的含量测定方法。该
方法灵敏度高 , 重现性好 , 是测定石吊兰中石吊兰素含量较
理想的方法。
1　仪器与试药
Agilent1200Series高效液相色谱仪(包括四元泵 , 真空
脱气机 , 柱温箱 , 紫外检测器), Agilent色谱工作站。
FA1004N电子天平 ,石吊兰素对照品自制 , 纯度 99.8%。石
吊兰药材采自云南省文山州 , 经上海中医药大学李西林教授
鉴定为苦苣苔科吊石苣苔属植物吊石苣苔全草。
2　实验部分
2.1　色谱条件　Agilent1200Series高效液相色谱仪 , Agilent
ZORBAXSB-C18(5μm, 4.6mm×250 mm)色谱柱 , 紫外检测
器。流动相组成和梯度见表 1, 检测波长 284 nm, 柱温 25
℃, 流速 1.0 mL/min, 定量环体积 20 μL, 所有成分均在 35
min内洗脱出柱。石吊兰及石吊兰素对照品色谱图见图 1。
表 1　 流动相的组成和梯度
时间 /min 1%醋酸 /% 甲醇 /%
0 52 48
6 40 60
11 20 80
25 0 100
28 0 100
35 52 48
2.2　检测波长的选择　以蒸馏水为空白 ,石吊兰素对照品
溶液在 200 ～ 400 nm范围内扫描 , 在 284 nm、334 nm处有最
大吸收 , 284 nm处吸收稳定 , 精密度高 , 因此选择 284 nm作
为检测波长。
A
B
图 1　HPLC色谱图
A.石吊兰素对照品　B.石吊兰 95%乙醇提取液
2.3　供试品溶液的制备　石吊兰样品粗粉 , 60 ℃干燥 2 h。
称取约 1.0g,精密称定 , 置于 100 mL圆底烧瓶中 , 加 95%乙
醇(40 mL、30mL、30 mL)回流提取 3次(1h、0.5 h、0.5 h),
合并提取液 ,减压回收乙醇至小体积后 ,加 95%乙醇定容于
25 mL量瓶中 , 摇匀 ,作为供试品溶液 , 浓度为 0.04 g药材 /
mL, 进样前用 0.20 μm滤膜滤过。
2.4　对照品溶液的制备　精密称取 10.000 mg石吊兰素对
照品 ,甲醇定容于 25mL量瓶中 , 得 0.400 mg/mL的石吊兰
素对照品溶液 ,备用。
2.5　标准曲线的制备　精密吸取石吊兰素对照品溶液 0.2、
0.6、1、1.4、 1.8 mL于 5mL量瓶中 , 甲醇定容 , 按照 “色谱条
件”项下操作 , 进样量 20 μL, 由低浓度到高浓度进样 , 记录
峰面积 ,以石吊兰素峰面积积分值对石吊兰素进样量进行线
性回归。回归方程为 Y=75.271 4X+157.5492, r=0.999 9,
在 16 μg/mL(0.32μg)～ 144 μg/mL(2.88 μg)范围内线性
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第 31卷　第 2期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
February2009
Vol.31　No.2
关系良好。
3　方法学考察
3.1　色谱系统适用性　在以上色谱条件下检测 , 石吊兰素
的保留时间为 14.33 min。以石吊兰素计算 , 理论塔板数大
于 10 000, 石吊兰素色谱峰与相临色谱峰分离度大于 1.5。
3.2　精密度实验　用 48 μg/mL石吊兰素对照品溶液重复
进样 5次 , 进样量 20 μL,石吊兰素的峰面积分别为 3 782.7、
3 762.7、3 726、 3 797.1、 3 821.6, 峰面积的相对标准偏差
RSD为 0.96%。
3.3　重复性实验　称取石吊兰样品 5份 ,每份约 1.0 g, 均
精密称定 , 按本文方法提取和测定。 5份样品中石吊兰素的
峰面积分别为 9 010.6、 8 905.1、 9 260.6、 9 153.7、 8 999.5,
RSD为 1.55%, 说明本文方法有较好的重现性。
3.4　稳定性实验　用某一份石吊兰供试品溶液分别于提取
后 0 h、 2h、4 h、 8 h、 16 h、 24 h进样 , 石吊兰素的峰面积为
8 905.1、8 841.6、 8 605.5、 8 821.8、 8 832.2, RSD为 1.3%,
说明石吊兰素提取液在 24 h内稳定。
3.5　加样回收率实验 　精密称取石吊兰样品 6份 ,
0.500 3、0.501 3、0.500 0、 0.500 3、 0.500 4、0.501 4 g, 向其
中加入 0.4 mg/mL的石吊兰素对照品溶液 3.5 mL, 加入量
为 1.400 mg,按本文方法提取和测定 ,计算回收率 , 结果见表
2,表明回收率良好。
表 2　 石吊兰素加样回收率
称取量
/g
样品中
含量 /mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
0.500 3 1.477 2.87 99.5
0.501 3 1.48 2.866 99.2
0.500 1 1.477 2.829 96.6
97.5 1.5
0.500 3 1.477 2.824 96.2
0.500 4 1.478 2.831 96.6
0.501 4 1.481 2.834 96.6
4　样品含量测定
吸取 5批供试品溶液 20 μL, 依法测定石吊兰素的含
量 , 分别为 2.939、 2.898、 3.014、 2.986、 2.929 mg(RSD=
1.57%), 每克药材中石吊兰素含量为 (2.953 ±0.046 3)
mg/g, 即石吊兰药材中石吊兰素的含量为 0.3% ～ 0.29%。
5　讨论
高效液相色谱法测定石吊兰素的含量报道不多 [ 10, 11] ,
流动相多为甲醇-水或甲醇-1%醋酸不同比例等度洗脱。实
验中曾根据文献报道的流动相组成和比例洗脱 , 发现石吊兰
素分离效果不佳 ,峰形较差 ,拖尾明显 , 色谱峰对称因子多在
1.5以上 , 甚至达到 1.9, 造成峰面积积分值不稳定。后改用
甲醇-1%醋酸梯度洗脱 , 摸索出流动相的最佳洗脱梯度 , 峰
形尖锐 ,对称因子在 0.95 ～ 1.05之间 , 峰面积积分值稳定 ,
色谱峰分离度大于 1.5,符合定量分析需要 , 建立了石吊兰
药材中石吊兰素的含量测定方法。该方法灵敏度高 , 重现性
好 ,是测定石吊兰药材中石吊兰素较为理想方法。
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石吊兰素含量的研究 [ J] .贵阳中医学院学报 , 2002, 24(3):
56-57.
4种情形新药注册申请可获药监局 “特批 ”
根据新颁布的《新药注册特殊审批管理规定 》,今后将有 4种情形的新药注册申请可以实施特殊审批。
这 4种情形包括 ,一是没有在国内上市销售的从植物 、动物 、矿物质中提取的有效成分及其制剂 ,以及新发现
的药材及其制剂;二是没有在国内外获准上市的化学原料药和制剂以及生物制品;三是治疗艾滋病 、恶性肿
瘤 、罕见病等疾病 ,并具有明显临床疗效优势的新药;四是目前尚没有治疗手段的新药 。
对于实施特殊审批的新药 ,国家食品药品监管局将单独设立通道 ,优先审评 、审批 ,并建立适时介入 、关
键阶段沟通交流的机制 ,对于特殊审批新药注册申请 ,在其技术审评 、临床试验的过程中 ,均可与药品审评中
心就相关技术问题进行多渠道 、多形式的交流 ,为研究的推进和结果的评价提供帮助 。
(信息由新华社提供)
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