全 文 ：西北林学院学报 2009 , 24(4):97 ～ 100
Journal o f No r thw est Fo restry Univer sity
长绿期金银木的组织培养研究
＊石进朝 , 陈兰芬
(北京农业职业学院 , 北京 102442)
摘 要:以长绿期金银木为外植体 ,探讨了不同生长调节物质对外植体分化 、增殖和生根的影响。
得出如下结论:(1)长绿期金银木组织培养最适宜的外植体是新稍茎段 ,以 0.1%HgCl2 消毒 5 min
为最好。(2)适宜的继代培养基为 MS+BA0.3+NAA0.1+CM80 ml·L-1 ,生根培养基为:MS+
IBA1.0 。(3)暗培养生根时间以 4 d为最好。
关键词:组织培养;外植体;长绿期金银木
中图分类号:S722.37 文献标识码:A 文章编号:1001-7461(2009)04-0097-04
Tissue Culture of the Lonicera maackii`Chang lvqi
SHI Jin-chao , CHEN Lan-fen
(Bei j in g Agr icul tural Vocat ion Col leg e , Bei j in g 102442 , Ch ina)
Abstract:Using Lonicera maacki i`Chang lvqi as explants , inf luences of dif ferent plant g row th ho rmones on
dif ferentiation , multiplicat ion and roo ting w ere examined.The results show ed that:(1)The optimal ex-
plant mate rial w as tende r stem with sing le bud , ste rilized 5 min in 0.1%HgCl2 .(2)The optimal subcul-
ture and root ing media w ere MS+BA0.3+NAA0.1+CM80 mL·L-1 and M S+IBA 1.0 respectively;(3)
the opt imum root ing times w as 4 day darkness culture.
Key words:tissue culture;explant;Lonicera maacki i`Chang lvqi
金银木(Lonicera maack ii)为忍冬科(Caprifo-
liaceae)忍冬属一落叶灌木树种 ,具有喜光 、抗旱 、适
应性强 、管理粗放的特点 ,在中国北方园林造景中广
泛应用。春季观花 ,秋季观果 ,全株入药 。茎皮可制
人造棉 ,种子油可制肥皂 ,叶浸汁可杀棉蚜虫 ,花可
作金银花用 ,含有 17种氨基酸 ,丰富的矿质元素 、维
生素和其它多种营养成分 ,能祛风解毒 、消肿止痛 ,
主治头晕 、跌打损伤 , 具有较高的观赏与药用价
值[ 1-3] 。长绿期金银木是金银木一自然变异类型 ,具
有稳定的强耐寒性 ,比普通金银木落叶晚20 ～ 30 d ,
具有落叶期晚 、生长期长等特征 。笔者对长绿期金
银木的繁殖主要采用扦插方法 ,由于母本少 ,成苗量
少 ,繁殖系数低等特点 ,限制了这一优良类型的生产
推广 。对长绿期金银木的组织培养研究未见报道 。
于 2006年 11月 ～ 2008 年 9月在北京农业职业学
院植物组织培养实验室对长绿期金银木进行了组织
培养快速繁育研究 ,找到了长绿期金银木快速繁育
的技术参数 ,为快速推广生产利用这一乡土耐寒树
种奠定了基础。
1 材料和方法
1.1 材 料
为 1 ～ 4 a 生长绿期金银木(Lonicera maack ii
`Chang lvqi )植株 。试验选取长绿期金银木带芽茎
段 、半木质化茎段 、叶片 、叶柄作为外植体材料。
1.2 方 法
1.2.1 外植体的筛选及消毒处理 休眠期 1 a 生
长绿期金银木外植体病菌污染试验。
在早春 3月休眠期芽萌发前 ,从露地选取芽体
饱满的当年生长绿期金银木枝段作为外植体材料。
自来水冲洗干净后 ,采用 70%酒精 、0.1%HgC l、
3%～ 5%次氯酸钠 、吐温 20 、无菌蒸馏水等进行消
＊ 收稿日期:2008-10-18 修回日期:2008-12-30
基金项目:2007—2008年北京市教育委员会科技发展面上项目“长绿期金银木耐寒基因分子标记的研究”(KM200700005001)。 作者简介:石进朝 ,男 ,教授 ,从事观赏植物的教学及研究工作。 E-mil:shijinchao888@sina.com
毒。试验共设置 13个处理(表 1),每个处理试验 30
个带芽茎段 。培养温度(25 ±1)℃,光照度 1 200
lx ,光照时间 12 h ·d-1 。
生长季外植体病菌污染试验 在早春 4月份分
别从温室内及露地选取长绿期金银木新梢茎段 、成
熟叶片 、叶柄作外植体材料 ,用 0.1%HgCl2 以 1 ～ 8
min不同消毒时间进行消毒 ,试验分别各设置 8 个
处理(表 2)。
1.2.2 增殖培养基的筛选 添加不同浓度生长调
节剂对长绿期金银木进行增殖 。以 MS为基本培养
基 ,添加不同类型及浓度的植物生长调节剂 , 30 d
调查接种处理后的苗木高度及生长势。
添加不同浓度椰汁对长绿期金银木进行增殖
在增殖效果较好的 MS +BA0.3+NAA0.1培养基
的基础上 ,添加 50 、100 、150 mL · L-1三种浓度椰
汁(coconut mi lk ,缩写:CM)进行增殖试验 , 30 d 调
查接种处理后的苗木高度及生长势 。
1.2.3 生根培养基的筛选 添加不同类型及浓度
生长素诱导长绿期金银木生根。
以 1/2MS 培养基为基本培养基 ,添加不同类型
及浓度的生长素 ,接种 30 d后调查各处理的试管苗
生根情况。
添加不同时间暗培养诱导试管苗生根 在已选
取的生根培养基 MS+IBA1.0 上 ,对试管苗进行不
同时间的暗培养 ,接种 30 d后调查各处理的试管苗
生根情况。
2 结果与分析
2.1 外植体的筛选及不同消毒方法的影响
2.1.1 露地外植体病菌污染试验 表 1显示:对长
绿期金银木休眠期 1 a 生枝进行的 13个处理消毒
试验 ,外植体污染率为 100%。重复试验 2次 ,污染
率仍为 100%。造成休眠期茎段污染率高的原因分
析 ,主要有两种:一是北京地区早春干冷 ,空气杂菌
较多;二是长绿期金银木小枝中空 ,枝芽密生绒毛 ,
不易彻底杀菌。
表 1 长绿期金银木外植体病菌污染试验表
Tab le 1 Contaminant rates of dif ferent disinfected ex plants of Lonicera maackii`C hanglqi
编号 消毒处理 外植体数/个 污染数/个 污染率/ %
1 3%次氯酸钠 10 min 30 30 100
2 4%次氯酸钠 10 min 30 30 100
3 5%次氯酸钠 10 min 30 30 100
4 0.1%升汞 4 min 30 30 100
5 0.1%升汞 5 min 30 30 100
6 0.1%升汞 6 min 30 30 100
7 0.1%升汞 7 min 30 30 100
8 70%酒精 30 s+0.1%升汞 5 min 30 30 100
9 70%酒精 30 s+0.1%升汞 6 min 30 30 100
11 70%酒精 30 s+0.1%升汞 7 min 30 30 100
12 70%酒精 30 s+0.1%升汞 8 min 30 30 100
13 70%酒精 30 s+(0.1%升汞+2滴吐温 20)7 min 30 30 100
在生长期的 6月份 ,在露地采集长绿期金银木
带芽茎段 、半木质化带芽茎段 、成熟叶片 、叶柄作外
植体材料 ,设置 13个处理(同表 1),进行消毒试验 ,
10 d后外植体污染率为 100%。重复试验二次 ,污
染率仍为 100%。
通过以上试验可看出 ,无论是生长期还是休眠
期 ,从露地生长的长绿期金银木带芽茎段 、新梢带芽
茎段 、成熟叶片 、叶柄不适宜作为外植体的材料。
2.1.2 日光温室内生长季新梢茎段病菌污染试验
对采集于日光温室内生长的长绿期金银木新梢带芽
茎段采用 0.1%HgCl进行 1 ～ 8 min不同时间的消毒
试验。表 2显示:污染率随着消毒时间的延长而降
低 ,消毒时间越长污染率越低 ,然而对应的外植体杀
死率越高。8个处理的外植体污染率 ,以处理 8污染
率最低为5%,处理 6 ,7为 10%,处理 1 , 2 , 3为最高。
外植体杀死率以处理1 ,2 ,3最低 ,处理 4次之 ,处理 8
最高。综合污染率及杀死率两项判定指标 ,在对长绿
期金银木新梢带芽茎段进行消毒试时 ,适宜的消毒处
理是处理5及处理4。在日光温室内采集的长绿期金
银木带芽茎段 、成熟叶片 、叶柄进行消毒试验 ,全部污
染。可见 ,长绿期金银木组培时 ,适宜的外植体材料
为日光温室内生长的新梢带芽茎段。
2.2 增殖培养基的筛选
2.2.1 不同浓度生长调节剂对长绿期金银木生长
的影响 在继代 30 d时 ,在增殖培养基中添加不同
浓度植物生长调节剂 ,依据增殖苗生长高度及生长
势两项指标筛选长绿期金银木适宜的增殖培养基。
结果见表 3。
98 西北林学院学报 24 卷
表 2 不同消毒时间对新梢带芽茎段污染率的影响
Table 2 Ef fect of diff eren t disinfect t imes on contaminant
rate of tender stem wi th single bud explant
处理 升汞/min
段数
/支
污染段数
/支
污染率
/ %
杀死数
/支
杀死率
/ %
1 1 20 20 100 0 0
2 2 20 20 100 0 0
3 3 20 20 100 0 0
4 4 20 8 40 3 15
5 5 20 4 25 5 25
6 6 20 2 10 10 50
7 7 20 2 10 15 75
8 8 20 1 5 20 100
表 3显示:处理 1虽然苗木高生长量最大 ,但长
势弱;处理 7 , 12 苗木高生长量最小 ,生长势缓慢。
高浓度的生长素促进了苗木的高生长 ,但苗木变的
细弱 ,这与李俊红[ 4] 、王艳[ 5]等研究结果一致 。从增
殖苗生长高度及生长势综合分析 ,适宜的增殖培养
基为处理 5。
2.2.2 不同浓度椰汁对长绿期金银木生长的影响
通过在增殖培养中添加不同浓度椰汁 ,观测对长绿期
金银木生长的影响 。依 30 d苗木平均生长高度及生
长势两项指标 ,选择适宜的椰汁浓度。
表 3 不同浓度生长调节物质对试管苗增殖生长的影响
Table 3 Ef fect of dif feren t hormones on proliferation of cuvet te seedlin g
处理 培养基 样本数 30 d苗高/ cm 生长势
1 MS+BA0.5+NAA0.1 30 5.0 苗细弱 ,叶色黄
2 MS+BA0.5+NAA0.05 30 4.0 苗细弱 ,叶色较黄
3 MS+BA0.5+NAA0.03 30 3.5 苗细弱 ,叶色较绿
4 MS+BA0.5+NAA0.01 30 2.8 苗细弱 ,叶色较绿
5 MS+BA0.3+NAA0.1 30 4.0 苗健壮 ,叶色浓绿
6 MS+BA0.3+NAA0.03 30 3.0 苗较壮 ,叶色浓绿
7 MS+BA0.3+NAA0.01 30 2.5 长势一般 ,叶色较绿
8 MS+BA0.3+NAA0.05 30 3.0 长势一般 ,叶色较绿
9 MS+BA0.2+NAA0.01 30 3.0 苗较壮 ,叶色较绿
10 MS+BA0.2+NAA0.03 30 3.0 苗较壮 ,叶色偏黄
11 MS+BA0.2+NAA0.05 30 2.8 长势一般 ,叶色较绿
12 MS+BA0.2+NAA0.1 30 2.5 长势一般 ,叶色较绿
表 4 不同浓度椰汁对试管苗增殖的影响
Table 4 Ef fect of cocon ut milk(CM)wi th dif ferent con cen t rat ions on proliferation cu vet te seedling
处理 培养基 样本数 30 d苗高/ cm 生长势
1 MS+BA0.3+NAA0.1+CM50 ml/ L 30 6 生长旺盛 ,叶色浓绿
2 MS+BA0.3+NAA0.1+CM80 ml/ L 30 7 生长旺盛 ,叶色浓绿
3 MS+BA0.3+NAA0.1+CM120 ml/ L 30 5 生长旺盛 ,叶色浓绿
CK MS+BA0.3+NAA0.1 30 4 生长中等 ,叶色浅绿
表 4可看出:椰汁对苗木生长高度有明显促进
作用 。其中以处理 2 最明显 ,苗木高生长量为 7
cm ,比对照增加了 3 cm ,且生长势旺盛 ,叶绿。对照
生长中等 ,叶色浅绿 。可见 ,适宜的增殖培养基为:
MS+BA0.3+NAA0.1+CM80 mL·L-1 。
2.3 生根培养基的筛选
2.3.1 不同类型及浓度生长素对长绿期金银木生
根的影响 在 MS 生根培养基中加入不同浓度的
IBA 及 NAA ,生根培养 20 d后 ,调查 5种生根培养
基试管苗的最初生根时间 、平均生根数量 、生根长
度 、根生长势 ,依此判断适宜的 IBA 及 NAA 添加浓
度。结果见表 5。
通过对 5种生根培养基在生根时间 、生根数量 、
根生长量及生长势的调查结果的综合分析 ,处理 4
虽然开始生根时间较短 ,为9 d ,仅有少量愈伤出现 ,
不利于移栽成活 。处理 2开始生根时间为 10 d ,平
均根数 5条 ,平均根长为 1.5 cm ,为金银木试管苗
生根最好 。表 5显示:适宜的生根培养基为:MS+
IBA1.0。
表 5 不同浓度生长素对试管苗生根的影响
Table 5 Ef fect of diff eren t concent ration IBA and
NAA on cu vet te seedling rooting
处理 生根培养基
样本
数
开始生根
时间/ d
平均
根数
根长
/ cm
根生
长势
1 MS+IBA1.5 30 15 2～ 3 1.0 根少
2 MS+IBA1.0 30 10 5 1.5 根健壮 ,短粗
3 MS+IBA0.5 30 12 2 1.0 根少
4 MS+NAA1.0 30 9 2～ 3 0.5 有少量愈伤
5 MS+NAA0.5 30 11 4 2.0 根细长
2.3.2 不同时间暗培养对试管苗生根的影响 在
已选取的生根培养基 MS+IBA1.0的基础上 ,在试
管苗接种初期进行暗培养 。表 6 显示:一定时间的
暗培养对试管苗生根有促进作用 。处理 4 ,5的生根
时间比没处理前提前了2 d ,处理2提前了 1 d ,处理
99第 4 期 石进朝 等 长绿期金银木的组织培养研究
1无变化 。因此 ,试管苗接种初期暗培养时间以 4 d
为好 。
表 6 不同时间暗培养对试管苗生根的影响
Table 6 Ef fect of di ff erent dark culture du rat ions
on cuvet te seedlin g root ing
处理 暗培养时间/ d 样本数
出根
时间/ d
平均
根数
20 d平均
根长/ cm
1 2 30 10 4～ 5 1.5
2 3 30 9 5 1.5
3 4 30 8 6 1.8
4 5 30 8 5～ 6 2.0
5 6 30 9 5 2.0
3 结论与讨论
3.1 结 论
长绿期金银木组织培养时 ,适宜的外植体材料
为日光温室内生长的新梢带芽茎段 ,诱导出不定芽
的发生 。消毒时以 HgCl 消毒 5 min为最好 ,污染
率为 25%,杀死率也为 25%。带芽茎段 、成熟叶片 、
叶柄均不适宜作为外植体的材料。
长绿期金银木组织培养的不同培养阶段的适宜
培养基分别为:继代苗培养基为:MS +BA0.3 +
NAA0.1+CM80 mL · L-1 ,生根培养基为:MS +
IBA1.0 。
在对试管苗进行暗培养时 ,有利于试管苗生根 ,
能够显著提早生根。暗培养时间以 4 d为最好 。
3.2 讨 论
关于长绿期金银木外植体选择问题 ,试验中选
取了带芽枝段 、新梢茎段 、叶片 、叶柄作为长绿期金
银木组织培养外植体 ,只有从日光温室采集长绿期
金银木新梢带芽茎段进行外植体初带培养时 ,获得
了腋芽萌发 ,污染率相对较低 。而无论是从日光温
室内还是从露地选取带芽枝段 、叶片 、叶柄作为外植
体初带培养时 ,全部污染死亡;露地新梢带芽茎段也
全部污染死亡。北京地区春季干旱少雨 ,空气污染
严重 ,枝条杂菌较多 ,彻底消毒受到了限制 。长绿期
金银木自身的芽枝多毛 、容易积尘 ,增加了外植体消
毒的难度 ,提高了污染率 。忍冬科忍冬属的一些植
物 ,如灰毡毛忍冬(Lonicera macranthoides)选用茎
尖及带腋芽茎段[ 6] ,金银花“蒙花”品系的茎段[ 7] ,金
银花(L.japonica)的叶片[ 8] 、顶芽和侧芽[ 9] 作为外
植体组培时取得了良好的效果 。带芽枝段 、新梢茎
段 、叶片 、叶柄是否能够作为长绿期金银木组织培养
快速繁殖的外植体材料 ,需要进一步的研究。
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