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生命科学仪器 2009 第7卷/8月刊
陆英为忍冬科接骨木属植物陆英Sambucus chinese
Lindl.的干燥全草。陆英又名接骨草，八棱麻，臭草，
蒴藋，走马风，七叶金等[1]。早在《神农本草经》就
有记载，为民间常用草药，应用广泛。产于华北、华
东、华南、西南及陕西、甘肃、宁夏等省区，以根、茎
及叶入药，具有活血散淤、消炎止痛、利尿消肿、祛
风活络之功效, 常用于治疗跌打损伤，风湿疼痛，肾炎
水肿，急性菌痢及肺炎，又能作兽药，治牛跌伤等[2]。
陆英具有抗肝炎，止痛、抗菌消炎作用，对新生儿
黄疸早期干预具有良好的疗效[3-6]。陆英中所含的熊
果酸、齐墩果酸、β - 谷甾醇等均是陆英治疗肝炎
的主要有效成分[7]。马学惠、韩德五等已证实齐墩
果酸具有明显的抗肝炎活性[8,9]，陆英中熊果酸的含
量远高于齐墩果酸，熊果酸是陆英抗肝炎的主要活性
成分[10-13]。而陆英花和果实中齐墩果酸和熊果酸含量
测定未见报道，本文建立HPLC法分离和测定了陆英
花和果实中齐墩果酸、熊果酸，为陆英花和果实的开
发利用提供依据。
1 仪器、试剂与材料
1.1仪器
Water515双泵型高效液相色谱仪，2296光电二
极管矩阵检测器（7725I进样阀，Empower中文色谱
工作站，美国），SK2510HP超声波清洗器(上海科
导超声仪器有限公司，FC204分析天平（上海天平
摘要 建立高效液相色谱法同时分离和测定陆英花和果实中齐墩果酸和熊果酸的含量。选用Kromasil C18色谱柱，流动
相为甲醇∶水∶磷酸(90∶10∶0.2)，检测波长210 nm，流速0.8 mL/min，柱温25 ℃。齐墩果酸进样量在0.55～5.50μg，熊
果酸进样量在 1.02~10.20 μ g时呈现良好的线性关系，相关系数均为 0.9999，齐墩果酸和熊果酸的平均回收率分别为
99.3 %（RSD为 1.9 %）和 101.2 %（RSD为 2.3 %）。本法具有准确、灵敏、数据可靠的优点，可用于陆英花和果实的齐
墩果酸和熊果酸的分离与测定。
关键词 高效液相色谱法；陆英；花；果实；齐墩果酸；熊果酸；含量测定
HPLC法测定陆英花和果实中齐墩果酸和熊果酸的含量
邹盛勤
（宜春学院化学与生物工程学院，江西省天然药物活性成分研究重点实验室，江西 宜春 336000）
基金项目：国家“8 6 3”计划重点资助项目（2 0 0 2 A A 2 Z 3 2 1 7）。
作者简介：邹盛勤(1970- )，男(汉族)，江西奉新人，副教授，在读硕士，主要从事天然药物成分提取与分析研究。
分析仪器厂），RO-MB-10D高纯水机(杭州永洁达膜
分离设备厂），FW177高速万能粉碎机（天津市泰斯特
仪器有限公司）。
1.2试剂与材料
甲醇为色谱纯（99.95％，江苏汉邦科技有限公
司），乙醇为分析纯（95％，江西洪都生物化学有限公
司），水为超纯水，熊果酸、齐墩果酸对照品（中国药
品生物制品检定所，批号分别为：110742-200314，
110709-200311），陆英采自江西省宜春市。
2方法与结果
2.1溶液的配制
2.1.1对照品溶液的配制
分别精密称定齐墩果酸、熊果酸对照品 2.75mg
和5.10mg，置于10ｍL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至
刻度，摇匀，制成含齐墩果酸 0.275mg/ml和熊果酸
0.510mg/ml的对照品混合溶液。
2.1.2陆英样品溶液的配制
分别取于65℃干燥并于高速万能粉碎机中粉碎的
陆英花和果实原料药粉末约5ｇ，分别置于50mL具塞
锥形瓶中，用 95％乙醇 40mL超声提取 40min，过滤，
滤渣用少量乙醇洗涤，合并滤液，定容至50mL量瓶中。
用微孔滤膜（0 . 4 5μm）滤过，作为样品溶液。
2.2色谱条件
色谱柱为Kromasil C18 柱(4.6 mm×250mm, 美国
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Waters公司) , 带保护柱，流动相为甲醇∶水∶磷
酸（90∶10∶0.2），流速为0.8mL/min，检测波长210nm，
柱温 25°C ，数据处理为外标法峰面积定量[10]。在
上述色谱条件下，齐墩果酸和熊果酸的混合对照品及
陆英花和果实样品的HPLC色谱见图 1、图 2。齐墩
果酸和熊果酸的保留时间分别为 18min和 19min左
右，与各自相邻峰的分离度均大于 1.5，理论踏板数
均大于 10000。
图 1 熊果酸（U A）和
齐墩果酸（OLA）对照品混合溶液的HPLC色谱
图 2 陆英花和果实样品的HPLC色谱
2.3 线性关系试验
精密吸取齐墩果酸和熊果酸对照品混合贮备液
2、6、10、15、20 μL进样分析，测定峰面积，以对
照品的进样量（μg）为横坐标，峰面积（μV·s）
为纵坐标，绘制标准曲线，得齐墩果酸回归方程为：
Y=4.27× 105X-2.84× 104，r=0.9999；熊果酸回归方
程为：Y=4.55× 105X-1.74× 104，r=0.9999。表明
齐墩果酸进样量在 0.55～5.50 μg，熊果酸进样量在
1.02 μg～10.20 μg范围内线性关系良好。
2.4峰纯度检测
峰纯度分析是将积分峰上每个数据点的光谱与峰
顶点光谱进行对照，分析色谱峰所有点的个别光谱图
之间的差异，计算出所有的光谱对照角，求其加权
平均值（纯度角）；同时，选定一段基线计算纯度
噪音角与溶剂角之和（阈值）。进行峰纯度分析时，纯
度角和阈值角是平均所有测量到的角度并加权吸收强
度的结果，由Empower软件自动计算，并绘制纯度曲
线和自动阈值曲线，纯度曲线表示整个色谱峰的每个
数据点的光谱图与峰顶点光谱图的差异。当纯度角小
于阈值时，在测量的噪音内光谱是均匀的，为纯组分；
当纯度角大于阈值时，表示有共流出物存在。峰纯度
分析条件：检测波长190~600nm，最小分辨率1.2 nm，
峰宽 30s，基线噪音阈值 50μV·s，噪音间隔起止时
间 0.25~0.75 min。结果表明，色谱图中齐墩果酸和熊
果酸峰的纯度角均小于阈值，纯度线位于自动阈值线
下方（图3、图4），表明齐墩果酸和熊果酸色谱峰均为
单一组分吸收峰，无其它组分的干扰。
图 4 对照品溶液中熊果酸色谱峰纯度分析
图 3 对照品溶液中齐墩果酸色谱峰纯度分析
2.5精密度试验
以同一对照品混合溶液进样，每次 10μl，重
复进样5次，分别测定峰面积数值，计算得齐墩果酸
峰面积 RSD(相对标准差值)为 0.5%，熊果酸峰面积
RSD为0.6%。
2.6重现性试验
分别精密称取干燥至恒重的同一批陆英花样品 5
份（每份 5.0g），按样品溶液制备方法制备样品溶液。
精密吸取各样品溶液 10μL，进样，测定其峰面积积
分值，外标法计算含量。齐墩果酸和熊果酸含量的RSD
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分别为 2.1 %和 1.9 %。
2.7加样回收率试验
精密称取已知齐墩果酸和熊果酸含量的陆英花样
品5份，每份2.0g，分别加入齐墩果酸、熊果酸对照品
适量。按样品溶液配制方法提取处理，进样量为10 μl，
测定峰面积，用外标法计算齐墩果酸和熊果酸含量，得
齐墩果酸的平均回收率为99.3%，RSD为1.9%；熊果酸
的平均回收率为101.2%，RSD为2.3%。
2.8样品含量测定
精密吸取过滤液 10μl进样，注入液相色谱仪，
按上述色谱条件测定样品中齐墩果酸和熊果酸的峰面
积，每个样品重复进样3次，取平均值，根据回归方程
计算样品中齐墩果酸和熊果酸的含量，结果见表1。由
表 1可知，陆英花中齐墩果酸和熊果酸的含量均远高
于其果实，约为果实中2组分含量的3倍；在同一部位
（花或果实）中，熊果酸的含量均远高于齐墩果酸。
表 1 陆英花及陆英果实中齐墩果酸和
熊果酸的含量测定结果
3讨论
3.1检测波长的选择
采用光电二极管矩阵检测器，取齐墩果酸和熊
果酸对照品混合溶液，在 190~400nm进行光谱扫描，
结果表明：齐墩果酸和熊果酸在 201.0nm处均有最大
的吸收波长，但在 201.0nm 检测波长下，流动相有较
强的末端吸收[14]，为避免流动相对检测结果的干扰，
提高信噪比，又不降低检测器的灵敏度，本实验选取
210nm为检测波长。
3.2样品提取方法的选择
超声提取法在提取过程中有空化、粉碎、搅拌
等特殊作用，对植物药材的细胞具有破坏作用，溶媒
渗透到药材的细胞中，使药材的化学成分易于溶入溶
媒中[15]。具有提取设备简单、操作简便，提取时间
短，提取率高等优点。
3.3流动相和色谱柱的选择
齐墩果酸和熊果酸均属三萜类化合物，为同分
异构体，结构相似，两者极性几乎无差别，分离
较困难，传统的检测方法在测定熊果酸的含量时未
能将齐墩果酸和熊果酸分离，测定结果实际为两者
的含量之和。本实验经多次试验，仅以甲醇∶水∶磷
酸(90∶10∶0.2)三种低价、常用的溶剂作为流动相，
实现了齐墩果酸和熊果酸的良好分离。另外，齐墩果
酸和熊果酸的分离效果和色谱柱的选择有很大的关
系，试验证实在相同条件下，使用KromasilC18分析
柱分离效果较好，且出峰时间较短。本方法快速简
便、准确可靠、专属性强，可用于陆英花和果实的齐
墩果酸和熊果酸的分离与测定。
参考文献
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Determination of Ursolic Acid and Oleanolic Acid in Flowers and
Fruits of Sambucus Chinensis Lindl. by HPLC
Sheng-qin Zou
（College of Chemistry and Bioengineering, Yichun University,
Key Laboratory of Jiangxi Province for Research on Active Ingredients in Natural Medicines,
Yichun 336000,China）
Abstract: A method for determination of oleanolic acid and ursolic acid simultaneously in flowers and fruits of Sambucus Chinensis Lindl was
established. HPLC was carried out on a Kromasil C18 column using MeOH∶H2O∶H3PO4（90∶10∶0.2, with detection at 210 nm，flow
rate 0.8 ml/min and column temperature 25 ℃. An average recovery of 99.3 % was obtained with a RSD of 1.9 % in the range of 0.55~5.50 μg for
oleanolic acid, and an average recovery of 101.2 % was obtained with a RSD of 2.3 % in the range of 1.02~10.20 μg for ursolic acid. There were both
good linear correlations with the correlation coefficients of 0.9999.. The method is accurate, sensitive and the data is reliable, and it can be used for
the isolation and determination of oleanolic acid and ursolic acid in flowers and fruits of Sambucus Chinensis Lindl.
Key words: HPLC; Sambucus chinensis lindl.; flowers; fruits; ursolic acid; oleanolic acid; determination
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新闻动态
《科学》：研究发现瘙痒神经元
这一成果将来有望用于开发治疗皮肤病的新方法
美国华盛顿大学医学院和中国北京大学第三医院的科研人员日前合作发现了实验鼠脊髓中只负责瘙
痒信号传递的神经元，这一成果将来有望用于开发治疗皮肤病的新方法。
参加这项研究的华盛顿大学专家 8月6日在一份声明中说，一些神经元对瘙痒感觉至关重要，这意
味着它们内部可能有只针对瘙痒的受体或信号分子，可以作为将来治疗或控制慢性瘙痒的“靶子”。
参与这项研究的科研人员曾于2007年在实验鼠体内发现第一个与瘙痒相关的基因——“胃泌素释放
肽受体”（GPRP）。他们发现，体内GPRP基因不活跃的实验鼠接触瘙痒物时并不怎么抓挠，而GPRP基
因活跃的实验鼠痒得几乎发狂。
在最新实验中，科研人员通过化学物质杀死了实验鼠脊髓中GPRP基因所在的神经元，此后再接
触瘙痒物质时，实验鼠的抓挠行为大大减少，有些实验鼠甚至完全停止抓挠。不过，它们感受疼痛的能
力仍与正常实验鼠一样。这表明，GPRP基因所在的神经元只对瘙痒信号有反应，而不负责疼痛信号的
传递。
这一研究成果将刊登在 8月 7日出版的最新一期美国《科学》杂志上。
不过也有科研人员指出，人体内是否具有与实验鼠类似的瘙痒神经元还有待进一步确认。