全 文 ：基金项目 国家“ 863”计划重点资助项目（ 2002AA2Z3217）。
作者简介 刘传安（ 1946-），男，江西奉新人，副教授，从事物理实验教
学与研究。
收稿日期 2005!10!18
陆英（ SambucuschinensisLindl.），为忍冬科接骨木属植
物，又名八棱麻、接骨木、走马风等，多年生草本植物。产于
我国南北各地，以根、茎、叶入药，是我国民间常用草药，有
活血散瘀，祛风活络，发汗利尿之功效。用于治疗跌打损伤、
风湿痛、脱臼、肾炎水肿、脚气水肿、荨麻疹等症。其叶中含
绿原酸、乌索酸、齐墩果酸、α!香精素、β!谷甾醇、黄酮甙等
多种活性成分，具有较高的药用价值[1，2]。陆英叶中绿原酸的
含量测定方法尚未见报道。为此，笔者研究建立反相高效液
相色谱法（ RP!HPLC）测定陆英叶中绿原酸的含量，为控制
药材质量提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 仪器 高效液相色谱仪，515型泵，2996光电二极管
矩阵检测器（ PAD），柱温箱，Empower中文色谱工作站（ 美
国）；FC204分析天平（ 上海天平分析仪器厂）；TG16!WS高
速离心机（ 湖南赛特湘仪离心机仪器有限公司）；UPWS!I!
10T高纯水机（ 杭州永洁达膜分离设备厂）。
1.2 试验药剂 甲醇，色谱纯（ 上海陆忠试剂厂）；乙酸，分
析纯；水为高纯水；陆英叶采自宜春、萍乡和南昌市，经该所
天然药物学研究室鉴定为陆英的叶，烘干后粉碎，过80目
筛，备用；绿原酸对照品（ 中国药品生物制品检定所，批号：
110753!200212，供含量测定用）。
1.3 色谱条件 Nova!PakC18色谱柱（ 3.9mm×150mm，4
μm，带保护柱），流动相为水-甲醇-乙酸（ 88∶12∶1，V/V），流
速1.0ml/min，检测波长326nm，柱温25℃，外标法定量分
析，按3倍基线噪音计算得绿原酸检出限为0.4mg/L（ 即
3σ）。绿原酸对照品HPLC谱图见图1。
1.4 溶液的制备
（ 1）对照品溶液：精确称取绿原酸对照品5.2mg，置于
25ml容量瓶中，用甲醇水溶液（ 体积比1∶1）溶解并稀释至
刻度，摇匀，制成绿原酸浓度为0.208mg/ml的对照品溶液。
（ 2）样品溶液：精密称取陆英叶3.0g，加入10倍量10%
乙醇超声提取45min，过滤，滤液定量转移至50ml容量瓶
中，用高纯水定容，摇匀后取滤液5ml于离心机中3000r/min
离心5min，经0.45μm微孔滤膜过滤，得样品溶液。
2 结果与分析
2.1 线性关系试验 分别吸取绿原酸对照品溶液4、8、12、16、
20μl进样，平行3次，测定绿原酸峰面积。用峰面积（ Y）的平
均值与进样量（ X）进行线性拟合，得绿原酸线性回归方程
为：Y（ μV.s）=2.13×105X（ μg）-5.16×104，r=0.99992。表明当绿
原酸进样量在0.832～4.16μg时，线性关系良好，以绿原酸
计理论塔板数均大于3000。
2.2 色谱进样精密度试验 精密吸取绿原酸对照品溶液
10μl进样，重复5次，测得绿原酸峰面积相对标准偏差
（ RSD）为0.3%（ n=5），结果表明仪器精密度良好。
2.3 方法重现性试验 取同一批陆英叶样品5份，按1.4
方法制备样品溶液，吸取20μL进样分析，测得绿原酸峰面
积RSD为1.1%（ n=5），方法重现性好。
2.4 稳定性试验 精密吸取陆英叶样品20μl进样分析，
然后分别于0.5、1、2、4、8、16、32、48h时重复1次。测得绿
原酸峰面积的RSD为1.8%，结果表明样品溶液在48h内
RP!HPLC法测定陆英叶中绿原酸含量的研究
刘传安 1，邹盛勤2
（ 1.宜春学院理学院，江西宜春 336000，2.宜春学院生物工程研究所，江西省天然药物活性成分研究重点实验室，江西宜春 336000）
摘要 建立反相高效液相色谱法测定了陆英叶中绿原酸的含量，同时采用光电二极管阵列检测器检测绿原酸色谱峰的纯度。色谱柱
为Nova!PakC18（ 3.9mm×150mm，4μm），流动相为水-甲醇-乙酸（ 88∶12∶1，V/V），流速1.0ml/min，检测波长326nm，柱温25℃。绿原
酸在0.832～4.16μg范围内线性关系良好（ r=0.99992），检出限为0.4mg/L（ 3σ），平均回收率为97.1%。该法简便、准确、重现性好、线
性范围宽，适于对含有绿原酸的药材进行质量评价。
关键词 陆英；绿原酸；光电二极管阵列检测器；反相高效液相色谱；含量测定
中图分类号 Q949.781.2 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（ 2005）12-2334-02
DeterminationofChlorogenicAcidinSambucuschinensisLindl.LeafbyRP!HPLC
LIUChuan!anetal（ SchoolofScience，YichunUniversity，Yichun，Jiangxi336000）
Abstract AdeterminationmethodofchlorogenicacidinSambucuschinensisLindl.leafbyreversed!phasehighperformanceliquid
chromtographwasestablishedandatthetimethepurityofchlorogenicacidpeakwasdetectedbymeansofPhotodiodeArayDetector（ PAD）.The
chromatographiccolumn，Nova!PakC18（ 3.9mm×150mm，4μm），water!methanol!aceticacid（ 88∶12∶1，V/V）mobilephasewith1.0ml/min
flowrate，thedetectedwavelength（ 326nm）andthecolumntemperature（ 25℃）wereadopted.Thecalibrationcurveofchlorogenicacidwas
linearunderthecontentof0.832～4.16μg，thecorelationcoeficientwasover0.99992andthedetectedlimitwas0.4mg/L（ 3σ）.Theaverage
recoveryofchlorogenicacidwas97.1%.Themethodcanbeadaptedtoevaluatethequalityofmedicinethatcontainschlorogenicacid.
Keywords SambucuschinensisLindl；Chlorogenicacid；Photodiodearaydetector；RP!HPLC；Contentdetermination
安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2005,33(12):2334-2335 责任编辑 朱永和 责任校对 朱永和
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2005.12.064
稳定。
2.5 加样回收率试验 准确称取已知绿原酸含量的同一
样品5份，分别加入适量绿原酸对照品，按1.4方法配制样
品溶液，进行绿原酸含量分析，进样量20μl，计算绿原酸平
均回收率。结果见表1。
2.6 样品中绿原酸含量测定 取陆英叶样品，按1.4方法
配制样品溶液，用微量注射器吸取20μl样品溶液进样分
析，重复进样5次，测定样品中绿原酸含量。陆英叶样品
HPLC谱图见图2，样品中绿原酸含量结果见表2。
3 讨论
3.1 色谱条件的确定 采用NovaPakC18色谱柱，以水-
甲醇-乙酸（ 88∶12∶1，V/V）为流动相，配比简单，基线平稳，绿
原酸出峰时间短，分离效果好，无其他成分干扰。
3.2 检测波长的确定 取绿原酸对照品溶液进样，在250～
500nm波长范围进行光谱扫描，其最大吸收波长为326.4
nm（ 图3），选择326nm为检测波长，检测器响应值大，而且
提高了色谱系统的信噪比。
3.3 样品提取与预处理 样品加入适量10%乙醇溶液，分
别超声提取15、30、45、60、75min，预处理后测定提取液中
绿原酸含量，45min后绿原酸含量基本无变化，表明已提取
完全，绿原酸平均加样回收率为97.1%。提取液经0.45μm
滤膜过滤后可直接进样分析，样品预处理方法简单，多次重
复进样，未对色谱柱产生污染[3]。
3.4 峰纯度检测 选取相同积分参数，采用Empower软件
系统适应性模块对绿原酸对照品和样品峰积分，分析纯度，
绿原酸对照品和样品峰纯度图中纯度线均位于自动阈值线
下方（ 图4），色谱峰纯度角值小于阈值，证实绿原酸色谱峰
为单一组分吸收峰，与色谱峰顶点、起始点和终止点光谱归
一化叠加后结果相吻合[4]。
图4 绿原酸对照品(A)和样品（ B）峰纯度分析
t∥min
0.10
0.05
0.00
9.98 10.59 11.20 11.81 12.42
自动阈值
纯度
A
A
U
0
20
40
60
80
度
0.10
0.05
0.00
A
U
0
20
40
60
80
度
t∥min
10.21 10.81 11.41 12.01 12.61
自动阈值
纯度
B
表1 绿原酸加样回收率结果（ n=5）
样品含量
mg
对照品加入量
mg
测得量
μg
回收率
%
平均值
%
RSD
%
2.02 1.86 3.80 97.9
2.05 1.86 3.77 96.4
2.03 1.86 3.82 98.2 97.1 0.9
2.04 1.86 3.78 96.9
2.03 1.86 3.73 95.9
表2 样品中绿原酸含量（ n=5） %
绿原酸平均含量 RSD
宜春样品 0.152 0.7
萍乡样品 0.131 1.1
南昌样品 0.136 1.5
3.5 含量测定方法的建立 采用RPHPLC法，以外标法测
定陆英叶中绿原酸的含量，方法简便、快速，准确度好，精密
度高，可准确测定陆英中的绿原酸含量。
参考文献
1 蒋道松，裴刚，周朴华，等.八棱麻挥发性成分分析[J].中药材，
2003，26（ 2）：102-103.
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的含量[J].色谱，2004，22（ 6）：639-640.
4 邹盛勤，刘传安，陈武.枇杷叶及其药渣中乌索酸和齐墩果酸含量
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刘传安等 RP-HPLC法测定陆英叶中绿原酸含量的研究33卷12期 2335